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    HPV16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組織及非癌組織中的表達(dá)

    2014-09-04 10:19:03周臻濤王悅冬
    中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2014年2期
    關(guān)鍵詞:梅州客家人危型

    周臻濤 王悅冬

    HPV16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組織及非癌組織中的表達(dá)

    周臻濤 王悅冬

    目的 通過(guò)分析HPV16-E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達(dá),探討HPV16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)對(duì)68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16-E6蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究。結(jié)果 HPV16-E6蛋白陽(yáng)性率在正常食管黏膜組織中為14.7%,在上皮不典型性增生組織中為45.0%,在癌組織中為70.6%,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 HPV16-E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

    食管腫瘤;人乳頭狀瘤病毒;E6蛋白;免疫組化

    人乳頭狀瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬,是球形DNA病毒,能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種,根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型,其中HPV16屬于高危型,研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關(guān)系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū),該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16-E6蛋白表達(dá),以探討HPV16-E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月~2011年6月間行根治性切除,且臨床病理資料完整的食管鱗病例標(biāo)本及相應(yīng)的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實(shí)為正常食管黏膜組織68例。所有患者術(shù)前均未行放療、化療,其中男性50例,女性18例;年齡40~62歲,中位年齡50歲;另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實(shí)為食管鱗狀上皮不典型性增生標(biāo)本20例,其中男性15例,女性5 例;年齡30~65歲,中位年齡40歲。上述所有患者均為長(zhǎng)期(≥20年)居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16-E6單抗為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品,購(gòu)自北京中山生物公司,即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購(gòu)自DaKo公司。

    1.2 方法 免疫組織化學(xué)檢查采用EnVision兩步法,實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照,以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

    1.3 結(jié)果判斷 HPV16-E6蛋白主要位于細(xì)胞核內(nèi),呈棕黃色或棕褐色反應(yīng),伴少許胞漿著色。在普通光學(xué)顯微鏡下閱片,在高倍鏡下(400×)隨機(jī)觀察5~10個(gè)視野,觀察細(xì)胞核的染色深淺和計(jì)算胞核陽(yáng)性的細(xì)胞所占的百分比。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照Fromowitz等[2]陽(yáng)性細(xì)胞半定量分級(jí)法,在高倍鏡下對(duì)細(xì)胞染色作如下評(píng)分:根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占整個(gè)腫瘤細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)打分:<5%為0分,5%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色深淺打分:無(wú)著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;兩項(xiàng)結(jié)果相加<2分為陰性(-),2~3分為弱陽(yáng)性(+),4~5分為中度陽(yáng)性(++),6~7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++),其中(-)視為低表達(dá)陰性,(+、++、+++)視為陽(yáng)性。以上結(jié)果均由2位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師采用雙盲法觀察并確定。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn),以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 HPV16 E6在各組織中的表達(dá) HPV16-E6蛋白著色部位主要在細(xì)胞核, 呈棕黃色或棕褐色反應(yīng),伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16-E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16-E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16-E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

    表1 3種組織中HPV16-E6蛋白的表達(dá)情況[n(%)]

    3 討論

    食管癌是常見的消化道腫瘤,全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌,我國(guó)是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一,其中尤以我國(guó)北部(太行山區(qū))發(fā)病率最高,梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結(jié)果,其病理學(xué)形態(tài)常經(jīng)過(guò)鱗狀上皮的單純?cè)錾?、不典型增生、原位癌、早期浸?rùn)癌至浸潤(rùn)癌階段[3]。

    HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖,目前已分離出的HPV有130多種,根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型,其中HPV16屬于高危型,研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4,5]。在HPV16雙股DNA的8個(gè)讀碼框架結(jié)構(gòu)中,E6基因?yàn)檗D(zhuǎn)化有關(guān)的早期基因,在DNA復(fù)制前早期編碼E6蛋白,是一種病毒癌蛋白,可以刺激易感細(xì)胞增生,并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學(xué)者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),40%~60%的食管鱗癌標(biāo)本HPV監(jiān)測(cè)為陽(yáng)性[6]。國(guó)內(nèi)學(xué)者王悅冬[7]采用PCR/導(dǎo)流雜交法檢測(cè)56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達(dá),結(jié)果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16-E6蛋白表達(dá),結(jié)果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16-E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別14.7%、45.0%、70.6%,各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從研究結(jié)果可也看出,隨著食管病變的進(jìn)展,HPV16- E6蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率也隨著升高,這提示HVP16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),但其具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

    [1] 劉節(jié),蘇勤,張偉.人乳頭瘤病毒HPV-E6及p53蛋白與食管鱗癌關(guān)系.世界華人消化雜志,2000,8(5):494-496.

    [2] Fromowitz F B, Viola M V, Chao S, et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol,1987, 18(12):1268- 1275.

    [3] 許春雷,千新來(lái),周小山,等.HPV16型-E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達(dá).癌癥,2004,23(2):165-168.

    [4] 任占平,石喆,杜鵑,等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達(dá)及意義.中國(guó)腫瘤臨床,2008,35(6):327-330.

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    [6] 陸哲明.HPV與食管癌關(guān)系研究概況.國(guó)外醫(yī)學(xué):腫瘤分冊(cè),2000,27(4):241-245.

    [7] 王悅冬,張開鄂,周臻濤,等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關(guān)系.腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2010,23(5):377-378.

    Expression of HPV16-E6 in squamous cell carcinoma tissues of esophageal cancer and non-cancer tissues

    ZHOUZhen-tao,WANGYue-dong.

    DepartmentofOncology,MeizhouPeople’sHospital,Meizhou514031,China

    Objective To explore the biological significance of HPV16-E6 in the esophageal squamous cell carcinogenesis of Meizhou Hakka People through determining the expression of HPV16-E6 protein in normal tissues, dysplasia tissues and carcinoma tissues of esophagus. Methods Immunohistochemistry technique was used to detect the expression of the HPV16-E6 protein in 68 cases of normal tissues, 20 cases of dysplasia tissues and 68 cases of carcinoma tissues of esophagus. Results The positive rates of HPV16-E6 protein in the tissues of normal mucosa,dysplasia and carcinoma of esophagus patients were 14.7%, 45.0% and 70.6% respectively. There was significantly difference among the three groups respectively(P<0.05). Conclusion HPV16-E6 protein are highly associated with esophageal squamous cell carcinogenesis of Meizhou Hakka People.

    Esophageal neoplasm;Human Papillomavirus(HPV);E6 protein;Immunohistochemistry

    514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

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