高效液相色譜法測定食品中的抗氧化劑

胡玉霞

(浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術學院，浙江 杭州 310018)

食品中存在易氧化的油脂、脂溶性維生素、磷脂和胡蘿卜素等物質(zhì)[1]，在貯存過程中易導致食品感官發(fā)生變化。油脂中的不飽和脂肪酸被水解、氧化，導致油脂的酸價、過氧化值升高，破壞營養(yǎng)，產(chǎn)生異味，對人體健康有影響，嚴重時還會引起食物中毒[2]?？寡趸瘎┠茏柚够蜓泳徲椭淖詣友趸?，防止食品貯藏過程中的褐變、褪色和營養(yǎng)損失[3]，提高食品穩(wěn)定性，延長貯存期。正確使用抗氧化劑，不僅可以給生產(chǎn)者、消費者帶來良好的經(jīng)濟效益，而且能提高食品安全，防止食品安全事故發(fā)生。

特丁基對苯二酚(TBHQ)、丁基羥基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)是常用的油脂類抗氧化劑，限量標準已有規(guī)定[4]。已有研究發(fā)現(xiàn)，長期大量使用抗氧化劑有致癌作用[5-6]，快速檢測食品中抗氧化劑的含量，具有重要的意義。目前，我國檢測油脂類抗氧化劑常采用乙腈-正己烷液液萃取，C18固相萃取柱凈化的方法[6]，該方法前處理復雜、毒性大、成本高，不利于批量樣品的檢測分析。質(zhì)譜法雖靈敏度高、檢出限低，但設備昂貴，難以推廣普及。本研究基于現(xiàn)有檢測方法，采用甲醇作為提取溶劑，重復提取后，直接過膜上機檢測。與標準方法相比，該方法簡單快捷、定量準確，檢測成本低，適于批量檢測，對提高檢測分析的效率和靈敏度具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

TBHQ、BHA、BHT標準品(TMstandard，含量≥99%，擴展不確定度0.5%)，北京壇墨質(zhì)檢；0.22 μm有機濾膜，上海安譜實驗科技股份有限公司；甲酸、甲醇均為色譜純；餅干、食用油樣品采集于超市。

1.2 儀器與設備

超純水凈化器，美國Millipore公司；戴安p680液相色譜儀，二極管陣列檢測器，德國AUPOS公司；旋渦震蕩器，合肥艾本森科學儀器有限公司；電子天平，瑞士Mettler-Toledo公司。

1.3 色譜條件

色譜柱：Eclipse C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：A為0.5%甲酸水，B為甲醇；流動相梯度洗脫程序為：0～5 min，50% A；5～15 min，50%～20% A；15～20 min，20% A；20～25 min，20%～10% A；25～27 min，10%～50% A；27～30 min，50% A。流速1.0 mL·min-1，進樣量 10.0 μL，柱溫35 ℃，紫外檢測波長280 nm。

1.4 樣品前處理

準確稱量0.2～2.0 g樣品(精確到0.01 g)，加入甲醇5 mL，旋渦震蕩2 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液，重復提取3次，合并提取液，55 ℃氮氣吹至近干，甲醇定容至2.0 mL，過膜上機分析。

1.5 標準曲線繪制

準確稱取BHA、BHT、TBHQ各0.05 g(精確至0.000 01 g)，用乙腈定容到50 mL，混勻，制成標準溶液儲備液(1 mg·mL-1)。將標準溶液儲備液用甲醇稀釋至2、5、10、20、50 μg·mL-1標準工作液，HPLC-DAD檢測。以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

2 結果與分析

2.1 線性范圍

以峰面積對應于各標準物質(zhì)的質(zhì)量濃度(μg·mL-1)進行線性回歸，實驗結果表明呈現(xiàn)良好的線性關系(表1)。

表1 方法的線性范圍

2.2 準確度、精密度及檢出限

選擇餅干作為樣品，檢測其中BHA、BHT、TBHQ含量。結果表明，餅干中未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為14.52 mg·kg-1，相對標準偏差(RSD)2.60%。以餅干為空白樣品基質(zhì)，進行低、中、高3個濃度水平的添加實驗，進行回收測定，平均測定6次，結果見表2。

表2 方法的精密度和回收率(n=10)

由表2可見，抗氧化劑回收率90.4%～101.1%，相對標準偏差0.32%～2.46%，能夠較好地滿足GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》的要求。以樣品中目標物響應和基線噪音比計算本方法的檢出限，TBHQ、BHA、BHT的檢出限分別為0.6、0.2、0.6 mg·kg-1。

2.3 實際樣品含量的檢測

在上述試驗條件下，分別對市場上購買的食用油(未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為24.20 mg·kg-1)和糕點(未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為8.90 mg·kg-1)進行加標回收測定(每個樣品3個重復)，測定結果見表3。加標檢測結果表明，回收率97.0%～103.0%，RSD為0.95%～2.34%，可以滿足日常檢驗需求。

表3 實際樣品的加標回收檢測

3 小結

本實驗建立了用甲醇作為提取溶劑的高效液相色譜-二極管陣列檢測器(HPLC-DAD)測定食品中TBHQ、BHA、BHT 3種抗氧化劑殘留的方法，相比現(xiàn)行標準中液液萃取-過柱凈化的液相色譜分析技術，實現(xiàn)了簡化前處理操作、提高樣品提取效率、減少有機溶劑的使用和降低檢測成本等目的。精密度、準確度和檢出限結果表明，該方法滿足檢測標準要求，對政府部門或第三方檢測公司開展相關產(chǎn)品的檢驗檢測有重要的參考意義。