青杞果實化學成分研究

郭瑞，郭少波，王海鳳，王曉

(1.山西中醫(yī)藥大學 基于炎性反應(yīng)的重大疾病創(chuàng)新藥物山西省重點實驗室，山西 晉中 030619; 2.北京中醫(yī)藥大學中藥學院,北京 102488)

青杞系茄科茄屬植物青杞(SolanumseptemlobumBunge)的干燥全草，多年生草本或半灌木，又名單葉青杞、卵葉青杞、蜀羊泉、野茄子、野枸杞等，產(chǎn)于西北、華北和東北等地區(qū)[1]。青杞始載于《新修本草》[2]，明初朱木肅的《救荒本草》記載“青杞，本草名蜀羊泉。今祥符縣西田野中有之。苗高二尺余，葉似菊而稍長，花開紫色，子類枸杞子，生青熟紅，根如遠志，無心有糝”[3]。由于青杞分布較為廣泛，其果實又與枸杞類似，加之地域文化有別，對青杞的叫法也不同，在內(nèi)蒙古錫林郭勒盟、陜西綏德一帶稱之為野狗杞，而在河北，陜西等華北地區(qū)稱野茄子。除此之外，由于溫度、日照強度、海拔等氣候因素的影響，除青杞之外，還包括許多變種，例如茄子蒿、單葉青杞和卵果青杞等(見表1)。青杞化學成分多樣，主要含有萜類、生物堿類、甾體類和苯丙素類等化學成分[4-8]。生物活性廣泛，具有抗真菌、抗炎、抗癌等作用[9-11]，臨床上可用于治療乳腺炎、目赤目昏、咽喉腫痛，以及疥癬瘙癢等疾病[3]。目前，國內(nèi)外對于該植物化學成分的報道相對較少，為了豐富茄屬植物中的化學成分組成，尋找具有較強生物活性的天然產(chǎn)物，本實驗對青杞果實的化學成分進行了較為系統(tǒng)的研究，從中分離得到5個化合物，分別鑒定為正丁基-O-α-D-呋喃果糖苷[N-butyl-O-α-D-Fructofuranosidase](1)、9,12,13-三羥基-10,15-十八碳二烯酸 (9,12,13-trihydroxy-10-octadecaenoic acid) (2)、鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯 [di(ethylhexyl)phthalate] (3)、鄰苯二甲酸二異丁酯(diisobutyl phthalate) (4)、鄰苯二甲酸二丁酯 (dibutyl phthalate) (5)，其中化合物1首次從該植物中分離得到。

表1 青杞變種與正品青杞的區(qū)別

1 材料

Waters 2545-2489制備型HPLC(沃特世科技有限公司)；Waters2695-2998分析型HPLC(沃特世科技有限公司)；Thermo Q Exactive Focus液質(zhì)聯(lián)用儀(賽默飛世爾科技公司)；核磁共振光譜儀Bruker-600型(Bruker公司)；分析型色譜柱XSelect?HSS T3(5 μm,4.6 mm×250 mm,沃特世科技有限公司)；半制備型色譜柱Acchrom C18(10 μm,100 A,10 mm×250 mm，華譜新創(chuàng)科技有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀EYELA N-1300(日本東京理化公司)；柱色譜反相ODS(C18)60 μm 100 A(華普新創(chuàng)科技有限公司)；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇均為分析醇(天津市進豐化工有限公司)。

藥材為2018年10月—2018年11月采于山西中醫(yī)藥大學藥植園，經(jīng)山西中醫(yī)藥大學藥學院中藥資源教研室王兵副教授鑒定為青杞(SolanumseptemlobumBunge)的果實。藥材標本(20181015)存放于山西中醫(yī)藥大學中藥化學實驗室。

2 提取與分離

取干燥的青杞果實0.6 kg，經(jīng)粉碎后用7倍量的95%乙醇加熱回流提取2次，每次3 h，雙層紗布過濾，合并2次提取液，減壓濃縮回收乙醇，得到總浸膏407.4 g。取200 g浸膏用水分散，依次加入等體積量的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，反復多次，直至萃取至無色。萃取液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收至干，分別得到石油醚萃取部位21.6 g，二氯甲烷萃取部位6.24 g，乙酸乙酯萃取部位12.2 g，正丁醇萃取部位100.2 g。將石油醚萃取部位21.6 g經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(40∶1→0∶1)梯度洗脫，得到4個流分Fr. 1～4。Fr. 1經(jīng)過經(jīng)硅膠柱色譜二氯甲烷(40∶1)等度洗脫得到化合物2(21.3 mg)；Fr. 2經(jīng)過經(jīng)硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇(30∶1→0∶1)梯度洗脫，得到化合物3(27.6 mg)，化合物4(33.4 mg)，化合物5(17.2 mg)。取10.0 g正丁醇萃取部位，經(jīng)硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇(10∶1→0∶1)梯度洗脫，得到1個流分，經(jīng)ODS反相柱色譜，甲醇-水(30∶70→100∶0)梯度洗脫得到一個組分，再經(jīng)HPLC(52%，甲醇/水，流速2 mL/min)，制備得到化合物1(11.35 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

化合物1為無定型粉末 (MeOH)，易溶于甲醇。Molish反應(yīng)呈陽性?；衔?酸水解后，采用GC-MS色譜檢測其水解后的糖，其出峰時間與標準品D-呋喃果糖(D-fructopyranose)一致。因此可判斷化合物1中連有D-呋喃果糖(D-fructopyranose)。化合物1的正性HRESIMS質(zhì)譜，在m/z 237.134 6給出[M+H]+離子峰，表明化合物1的分子量為236，結(jié)合化合物1的1H-NMR、13C-NMR及DEPT譜，可推測其分子式為C10H20O6，并計算其不飽和度為1。

1H-NMR(CD3OD,600 MHz)，δH3.51(1H,dt,J=9.3,6.6 Hz, H-1a), 3.70 (1H, dt, J=9.3, 6.6 Hz, H-1b), 1.43 (1H, overlapped, H-2a), 1.49 (1H, overlapped, H-2b), 1.32 (1H, overlapped, H-3a), 1.39 (1H, overlapped, H-3b), 0.90 (1H, t, J=7.2 Hz, H-4), 3.49 (1H, d, J=12.0 Hz, H-1′a), 3.69 (1H, d, J=12.0 Hz, H-1′b), 4.11 (1H, d, J=5.0 Hz, H-3′), 3.89 (1H, dd, J=5.0, 7.2 Hz, H-4′), 3.81 (1H, ddd, J=3.2, 5.0, 7.2 Hz, H-5′), 3.63 (1H, dd, J=5.0, 12.1 Hz, H-6′a), 3.77 (1H, dd, J=5.0, 12.1 Hz, H-6’b);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz), δC64.3 (C-1), 33.5 (C-2), 20.4 (C-3), 14.3 (C-4), 62.2 (C-1′), 105.2 (C-2′), 78.4 (C-3′), 78.1 (C-4′), 83.4 (C-5′), 64.9 (C-6′)。將化合物1的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻數(shù)據(jù)對照[12]，發(fā)現(xiàn)與文獻報道一致，化合物1被確定為正丁基-O-α-D-呋喃果糖苷[N-butyl-O-α-D-Fructofuranosidase]。

3.2 化合物2

化合物2為白色粉末 (MeOH)，易溶于甲醇，正性HRESIMS譜在m/z 351.214 8給出[M+Na]+離子峰，表明化合物2的分子量為328。結(jié)合1H-NMR譜和13C-NMR譜，推測其分子式為C18H32O5，計算其不飽和度為3。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz), δH2.26 (1H, t, J=7.4, H-1), 1.58 (1H, overlapped, H-2), 1.33 (1H, overlapped, H-3), 1.33 (1H, overlapped, H-4), 1.33 (1H, overlapped, H-5), 1.33 (1H, overlapped, H-6), 1.33 (1H, overlapped, H-7), 1.51 (1H, overlapped, H-8), 4.03 (1H, m, H-9), 5.70 (1H, m, H-10), 5.72 (1H, m, H-11), 3.95 (1H, m, H-12), 3.45 (1H, ddd, J=4.0, 8.3, 10.0 Hz, H-13), 2.03 (1H, m, H-14a), 2.31 (1H, m, H-14b), 5.45 (1H, m, H-15), 5.46 (1H, m, H-16), 1.33 (1H, m, H-17), 0.96 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-18);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz), δC177.8 (C-1), 35.3 (C-2), 26.2 (C-3), 26.5 (C-4), 30.2 (C-5), 30.4 (C-6), 30.6 (C-7), 38.4 (C-8), 73.0 (C-9), 136.6 (C-10), 131.1 (C-11), 75.8 (C-12), 75.9 (C-13), 31.6 (C-14), 134.4 (C-15), 126.4 (C-16), 21.7 (C-17), 14.6 (C-18)。綜上數(shù)據(jù)，將化合物2的波譜數(shù)據(jù)與文獻比較[13]，發(fā)現(xiàn)兩者基本一致，因此，確定化合物2為9, 12, 13-三羥基-10,15-十八碳二烯酸 (9,12,13-trihydroxy-10-octadecaenoic acid)。

3.3 化合物3

化合物3為無色油狀化合物 (MeOH)，正性HRESIMS譜在m/z 391.285 0給出[M+H]+離子峰，表明化合物3的分子量為390。結(jié)合1H-NMR譜和13C-NMR譜，推測其分子式為C24H38O4，計算其不飽和度為6。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δH: 7.7 (2H, m, H-3, 6), 7.61 (2H, m, H-4, 5), 0.96 (6H, t, J=4.3 Hz, 1′,1″-CH3), 1.28 (6H, t, J=8.0 Hz, 6′, 6″-CH3);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δC: 133.6 (C-1, 2), 132.3 (C-3, 6), 129.8 (C-4, 5), 69 (C-1′, 1″), 40.2 (C-2′, 2″), 30.1 (C-3′, 3″), 24.9 (C-4′, 4″), 24.0 (C-5′, 5″), 14.5 (C-6′, 6″), 11.5 (CH3-1′, 1″), 31.7(CH3-6′, 6″),169.3(C=O)。綜上數(shù)據(jù)，將化合物3的波譜數(shù)據(jù)與文獻比較[14]，發(fā)現(xiàn)兩者基本一致，因此，確定化合物3為鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯[di(ethylhexyl)phthalate]。

3.4 化合物4

化合物4為白色無定形粉末 (MeOH)，正性HRESIMS譜在m/z 301.142 2給出[M+Na]+離子峰，表明化合物4的分子量為278。結(jié)合1H-NMR譜和13C-NMR譜，推測其分子式為C16H22O4，計算其不飽和度為6。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δH: 7.70 (2H, dd, J = 3.4 Hz, 5.7 Hz, H-2, 5), 7.61 (2H, dd, J=3.3 Hz, 5.7 Hz, H-3, 4), 4.0 (2H, d, J=6.5 Hz, H-1′, 1″), 2.04(2H, m, H-2′, 2″), 0.98 (12H, m, J=2.72, H-3′, 3″, 4′, 4″);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δC: 133.6 (C-1, 6), 129.9 (C-2, 5), 132.4 (C-3, 4), 72.9 (C-1′, 1″), 29.0 (C-2′, 2″), 19.5 (C-3′, 3″, 4′, 4″), 169.3 (C-1α, 2α)。綜上數(shù)據(jù)，將化合物4的波譜數(shù)據(jù)與文獻比較[15]，發(fā)現(xiàn)兩者基本一致，確定化合物4的結(jié)構(gòu)為鄰苯二甲酸二異丁酯 (diisobutyl phthalate)。

3.5 化合物5

化合物5為淡黃色油狀物 (MeOH), 正性HRESIMS譜在m/z 279.156 6給出[M+H]+離子峰，表明化合物5的分子量為278。結(jié)合1H-NMR譜和13C-NMR譜，推測其分子式為C16H22O4，計算其不飽和度為6。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz,) δH: 7.70 (2H, dd, J = 3.3, 5.7 Hz, H-2,5), 7.60 (2H, dd, J=3.3, 5.7 Hz, H-3, 4), 4.27 (4H, t, J=6.6 Hz, H-1′, 1″), 1.68 (8H, m, H-2′, 2″, 3′, 3″), 0.97 (6H, t, J=7.4 Hz, H-4′, 4″);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δC: 132.3 (C-1, 6), 129.9 (C-2,5), 133.6 (C-3, 4), 66.7 (C-1′, 1″), 31.7 (C-2′, 2″), 20.3 (C-3′, 3″), 14.1 (C-4′, 4″), 169.3 (C-1α, 2α)。綜上數(shù)據(jù)，將化合物5的波譜數(shù)據(jù)與文獻比較[16]，發(fā)現(xiàn)兩者基本一致，故確定化合物5為鄰苯二甲酸二丁酯 (dibutyl phthalate)。

4 結(jié)論

從青杞果實的石油醚和正丁醇萃取部位中分離得到5個化合物，依次鑒定為正丁基-O-α-D-呋喃果糖苷[N-butyl-O-α-D-Fructofuranosidase](1)、9,12,13-三羥基-10,15-十八碳二烯酸(9,12,13-trihydroxy-10-octadecaenoic acid)(2)、鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯[di(ethylhexyl)phthalate](3)、鄰苯二甲酸二異丁酯(diisobutyl phthalate)(4)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)(5)。其中化合物1為首次從該植物中分離得到。