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    氮、磷、硫?qū)︺t超富集植物李氏禾吸收CrⅥ的影響

    2019-09-23 06:10:53伍嬋翠劉杰梁英
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年14期

    伍嬋翠 劉杰 梁英

    摘要:通過水培試驗(yàn),以用25% Hoaglands營養(yǎng)液培養(yǎng)的植株作為對照,研究無機(jī)營養(yǎng)元素氮、磷、硫?qū)︺t超富集植物李氏禾吸收六價鉻[Cr(Ⅵ)]的影響。結(jié)果表明,李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的吸收符合系Michaelis-Menten方程,其米氏常數(shù)(Km)為91.84 μmol/L。與全素培養(yǎng)條件相比,在缺氮、缺硫條件下,李氏禾的根系吸收位點(diǎn)與Cr(Ⅵ)的親和力增加,根系分泌物能增加土壤中難溶性鉻的活性,從而有利于對Cr(Ⅵ)的吸收;而在缺磷培養(yǎng)條件下,根系分泌物不利于土壤中難溶性鉻的溶出,缺磷條件對李氏禾吸收Cr(Ⅵ)存在非競爭性抑制作用。由研究結(jié)果可知,適當(dāng)施用磷肥有利于提高李氏禾對Cr(Ⅵ)污染土壤的植物修復(fù)效率。

    關(guān)鍵詞:超富集植物;李氏禾;氮;磷;硫;植物修復(fù)效率

    中圖分類號: X173 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A ?文章編號:1002-1302(2019)14-0316-05

    受人類活動的影響,土壤中的六價鉻[Cr(Ⅵ)]污染已經(jīng)成為亟待解決的環(huán)境問題之一。李氏禾(Leersia hexandra Swartz)是我國境內(nèi)發(fā)現(xiàn)并報道的首例鉻超富集植物[1],因其強(qiáng)大的吸收和富集Cr(Ⅵ)的能力,在Cr(Ⅵ)污染土壤的修復(fù)方面具有良好的應(yīng)用前景。然而,重金屬污染土壤的植物修復(fù)效率受到很多外界因素的影響,土壤中的非金屬營養(yǎng)元素正是影響因素之一。此外,氮(N)、磷(P)、硫(S)對土壤重金屬形態(tài)轉(zhuǎn)化及植物吸收累積的影響也成為環(huán)境領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。

    已有一些研究者分析了不同營養(yǎng)元素對植物吸收重金屬的影響。樓玉蘭的研究表明,硝態(tài)氮的施用會促進(jìn)OH-或HCO3-的釋放,使根際pH值上升,從而降低土壤中重金屬的活性,減少了植物對重金屬的吸收[2]。郭光光等的研究表明,施用磷肥提高了蓖麻地下部對銅(Cu)的吸收和積累[3]。López-Bucio等研究發(fā)現(xiàn),磷抑制了擬南芥對鉻的吸收[4]。Shi等研究發(fā)現(xiàn),在銅污染土壤中施加硫肥有利于水稻對銅的吸收累積[5]。Zhong等研究發(fā)現(xiàn),在砷(As)污染土壤中施用硫肥可減少油菜籽粒中的砷含量[6]。Marchiol等利用高粱(Sorghum bicolor)、向日葵(Helianthus annus)在各種金屬污染土壤中進(jìn)行植物提取試驗(yàn),結(jié)果表明,施肥的植物葉片中富集的As、Cu和鋅(Zn)要高于不施肥的植物[7]。由此可見,不同的營養(yǎng)元素對植物吸收土壤中重金屬的影響存在一定差異,會因營養(yǎng)元素、植物和重金屬種類的不同而有不同的影響。目前,關(guān)于氮、磷、硫影響鉻超富集植物吸收Cr(Ⅵ)的研究未見報道。因此,研究氮、磷、硫?qū)︺t超富集植物李氏禾吸收 Cr(Ⅵ) 的影響,對于提高Cr(Ⅵ)污染土壤的植物修復(fù)效率、進(jìn)一步完善植物修復(fù)技術(shù)都有重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    試驗(yàn)于2016年3月至2017年1月在桂林電子科技大學(xué)花江校區(qū)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院環(huán)境工程實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。

    本試驗(yàn)所用李氏禾幼苗采自桂林市靈川縣靈田鄉(xiāng)花江邊的無污染農(nóng)田。選取生長一致的李氏禾幼苗,用去離子水輕柔洗凈后,放置于人工氣候箱(LRH-550-GSI,珠江牌)中,用25% Hoaglands(霍格蘭氏)營養(yǎng)液進(jìn)行水培培養(yǎng),每3 d更換1次營養(yǎng)液。培養(yǎng)條件如下:光—暗周期為12 h—12 h,白天溫度控制在25 ℃,夜晚溫度設(shè)置為20 ℃,相對濕度控制為75%,光照度為7 000 lx。每天需要加入超純水以補(bǔ)充因水分蒸發(fā)而減少的培養(yǎng)液體積,每3 d更換1次營養(yǎng)液,預(yù)培養(yǎng) 15 d。

    供試土壤取自用含鉻廢水處理的模擬人工濕地試驗(yàn)系統(tǒng)。待土壤自然風(fēng)干、用瑪瑙研缽研磨并過100目尼龍篩后備用。參照HJ 491—2009《土壤 總鉻的測定 火焰原子吸收分光光度法》[8],采用微波消解儀(ETHOS A,Milestone,意大利)對土樣進(jìn)行消解,用原子吸收分光光度計(AA-6300,日本島津)采用火焰法測定消解液中的鉻濃度(mg/L)。供試土壤的總鉻含量為1.80 mg/g。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 N、P、S與Cr(Ⅵ)的競爭吸收試驗(yàn) 試驗(yàn)前,將植物分成7組:(1)對照(用25% Hoaglands溶液培養(yǎng));(2)用NO3-完全缺失的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(3)用含有 5 mmol/L NO3-的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(4)用H2PO4-完全缺失的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(5)用含有5 mmol/L H2PO4-的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(6)用SO42-完全缺失的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(7)用含有5 mmol/L SO42-的25% Hoaglands溶液培養(yǎng)。將培養(yǎng)介質(zhì)的pH值均調(diào)至5.5。48 h后,將K2Cr2O7溶液加入各組植物中,使其Cr(Ⅵ)濃度分別為20、40、60、80、100 μmol/L。每個處理設(shè)3個重復(fù),于處理后4 h收獲植物。

    將收獲后的李氏禾根系先用去離子水沖洗3次,再置于超聲波清洗儀中,用10 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)溶液清洗10 min,以排除植物根系表面吸附的Cr6+離子對試驗(yàn)結(jié)果的影響[9],最后用超純水清洗3次。輕柔地吸干李氏禾根部表面的水分,并用陶瓷刀將根部切下,先于105 ℃殺青 30 min,再于80 ℃烘至恒質(zhì)量。用陶瓷剪將李氏禾根系樣品剪至長度為1~2 mm,得到植物干樣。

    使用微波消解儀(ETHOS A,Milestone,意大利),采用美國環(huán)保局(United States Environmental Protection Agency,簡稱USEPA)的方法3050B[10]對處理好的植物干樣進(jìn)行微波消解。在每個批次的試驗(yàn)中,菠菜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW10015)也用同樣的方法進(jìn)行消解,作為質(zhì)控,僅當(dāng)檢測濃度在標(biāo)定值的95%~105%范圍內(nèi)時,分析結(jié)果方可接受。

    1.2.2 根系分泌物對難溶性鉻的活化試驗(yàn) 試驗(yàn)前,將植物分成4組:(1)對照(用25% Hoaglands溶液培養(yǎng));(2)用NO3-完全缺失的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(3)用H2PO4-完全缺失的25% Hoaglands溶液培養(yǎng);(4)用SO42-完全缺失的25% Hoaglands溶液培養(yǎng)。在試驗(yàn)第10天,光照2 h后將李氏禾取出,先用蒸餾水沖洗根部3遍,在新制備的超純水中加入幾滴0.05%百里酚溶液[11],浸泡李氏禾根部5 min,再用超純水清洗根部3次。將李氏禾放入300 mL 0.5 mmol/L CaCl2溶液中[12],每杯加入3滴0.05%百里酚溶液,放回培養(yǎng)箱中光照收集4 h。4 h后,將收集液用0.45 μm濾膜抽濾后于40 ℃、90 r/min旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,在比色管中定容至25 mL。

    稱取0.200 g三氧化二鉻[分析純(AR)]、0.200 g鉻酸鉛(AR)、2.000 g土壤樣品,分別倒入裝有根系分泌物的各個比色管中。在室溫下連續(xù)振蕩(振速為150 r/min)3 h后取上清液。用0.45 μm針式過濾器過濾后待測。每組設(shè)3個平行樣。

    1.3 樣品的檢測與統(tǒng)計分析

    用原子吸收分光光度計(AA-6300,日本島津公司)采用火焰法對樣品中的鉻濃度進(jìn)行測定。標(biāo)準(zhǔn)系列使用液采用鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液[GBW(E)080257]配制而成。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以3個平行樣品測定值的算術(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示,數(shù)據(jù)用單因素方差分析法(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計分析,用最小顯著差數(shù)法(LSD)評價數(shù)據(jù)間的差異水平(P<0.05表示差異顯著)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 NO3-與Cr(Ⅵ)的競爭吸收

    在5 mmol/L NO3-和NO3-缺失的條件下,考察氮對李氏禾吸收Cr(Ⅵ)的影響。由圖1可見,李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收速率隨著Cr(Ⅵ)濃度的增加而提高。在本試驗(yàn)的Cr(Ⅵ)濃度范圍內(nèi),缺氮培養(yǎng)條件下李氏禾的鉻吸收速率均高于對照;在5 mmol/L NO3-的培養(yǎng)條件下,李氏禾的鉻吸收速率均低于對照。當(dāng)營養(yǎng)液中的Cr(Ⅵ)濃度為20 μmol/L時,缺氮培養(yǎng)的李氏禾對鉻的吸收速率比對照增加了18.0%;而在 5 mmol/L NO3-培養(yǎng)條件下, 李氏禾對鉻的吸收速率比對照減少了25.4%。說明NO3-抑制了李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的吸收,而氮元素的缺失則明顯促進(jìn)了李氏禾根系對鉻的吸收。

    為了進(jìn)一步研究NO3-與李氏禾根系吸收Cr(Ⅵ)之間的關(guān)系,將缺氮、對照和5 mmol/L NO3-培養(yǎng)條件下李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的吸收速率用Michaelis-Menten方程進(jìn)行擬合(圖2),根據(jù)雙倒數(shù)法求得Michaelis-Menten方程的各參數(shù),列于表1。由圖2、表1可以看出,在5 mmol/L NO3-的培養(yǎng)條件下,李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的最大吸收速率(vmax)比對照降低了16.2%,但米氏常數(shù)(Km)較對照明顯提高,說明在此條件下,NO3-與Cr(Ⅵ)競爭李氏禾根部相同的吸收位點(diǎn)。而在缺氮條件下,李氏禾根系對Cr(Ⅵ)吸收的米氏常數(shù)較對照略小,表明在此條件下,李氏禾根系吸收位點(diǎn)與Cr(Ⅵ)的親和力略微提高。

    2.2 H2PO4-與Cr(Ⅵ)的競爭吸收

    為了研究磷與李氏禾吸收Cr(Ⅵ)之間的關(guān)系,本試驗(yàn)在5 mmol/L H2PO4-和H2PO4-缺失的條件下考察李氏禾根系中的鉻含量。由圖3可見,鉻吸收率隨Cr(Ⅵ)濃度增加而增加;在本試驗(yàn)范圍內(nèi)的任何Cr(Ⅵ)濃度處理中,5 mmol/L H2PO4-培養(yǎng)條件下的鉻吸收速率均高于對照,且在缺磷培養(yǎng)條件下的鉻吸收速率均低于對照。當(dāng)營養(yǎng)液中Cr(Ⅵ)濃度為100 μmol/L時,5 mmol/L H2PO4-培養(yǎng)條件下的鉻吸收速率比對照提高了23.9%,而缺磷培養(yǎng)條件下的鉻吸收速率比對照減少了14.4%。由上述分析得出,H2PO4-有利于李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收。

    將5 mmol/L H2PO4-、對照和缺磷培養(yǎng)條件下李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的吸收用Michaelis-Menten方程進(jìn)行擬合(圖4)。由表2可以看出,用5 mmol/L H2PO4-培養(yǎng)的李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的最大吸收速率(vmax)較對照提高了17.5%,但米氏常數(shù)(Km)較對照明顯降低了17.0%,表明在此條件下,李氏禾根系吸收位點(diǎn)與Cr(Ⅵ)的親和力增加。缺磷條件培養(yǎng)的李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的最大吸收速率(vmax)較對照有所降低,其米氏常數(shù)(Km)與對照接近,表明缺磷對李氏禾吸收Cr(Ⅵ)存在非競爭性抑制作用。

    2.3 SO42-與Cr(Ⅵ)的競爭吸收

    在5 mmol/L SO42-和SO42-缺失的條件下,考察硫?qū)钍虾涛誄r(Ⅵ)的影響。由圖5可見,鉻吸收素速率隨著Cr(Ⅵ)濃度增加而提高。在本試驗(yàn)的Cr(Ⅵ)濃度范圍內(nèi),缺硫條件培養(yǎng)的李氏禾對鉻的吸收速率均高于對照,5 mmol/L SO42-條件下培養(yǎng)的李氏禾對鉻的吸收速率均低于對照。當(dāng)營養(yǎng)液中Cr(Ⅵ)濃度為20 μmol/L時,缺硫條件培養(yǎng)的李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收速率較對照提高了29.8%,而5 mmol/L SO42-條件下培養(yǎng)的李氏禾對鉻的吸收速率比對照減少了18.8%。

    將缺硫、5 mmol/L SO42-和對照培養(yǎng)條件下李氏禾根系對Cr(Ⅵ)的吸收用Michaelis-Menten方程進(jìn)行擬合(圖6)。由表3可以看出,5 mmol/L SO42-條件培養(yǎng)的李氏禾對 Cr(Ⅵ) 的最大吸收速率(vmax)與對照相近,但米氏常數(shù)(Km)較對照提高了27.7%。這表明添加SO42-對李氏禾吸收 Cr(Ⅵ) 存在競爭性抑制。在缺硫培養(yǎng)條件下,李氏禾根系對Cr(Ⅵ)吸收的米氏常數(shù)較對照減少了26.8%,表明在此條件下, 李氏禾的根系吸收位點(diǎn)與Cr(Ⅵ)的親和力增加, 即缺硫促進(jìn)了李氏禾根細(xì)胞對Cr(Ⅵ)的吸收。

    2.4 缺N/S/P培養(yǎng)對根系分泌物活化難溶性鉻的影響

    為了進(jìn)一步驗(yàn)證李氏禾吸收Cr(Ⅵ)與非金屬營養(yǎng)元素氮、硫和磷之間的競爭關(guān)系,取缺氮、缺硫和缺磷培養(yǎng)條件下的李氏禾根系分泌物,對難溶性鉻進(jìn)行活化試驗(yàn),并與全素培養(yǎng)條件下的李氏禾根系分泌物對難溶性鉻的活化效果進(jìn)行對比。由圖7可以看出,與全素培養(yǎng)的李氏禾根系分泌物相比,缺氮、缺硫條件培養(yǎng)的根系分泌物對Cr2O3的活化量雖略微增加,但并無顯著差異(P<0.05),而缺磷條件培養(yǎng)的根系分泌物對Cr2O3的活化量顯著降低,較全素條件培養(yǎng)的根系分泌物活化量減少了29.8%。缺氮和缺硫條件培養(yǎng)的根系分泌物對PbCrO4的活化量與全素條件培養(yǎng)的根系分泌物相比的顯增加,而缺磷條件培養(yǎng)的根系分泌物對PbCrO4的活化量僅為全素條件培養(yǎng)的根系分泌物活化量的43.4%。在不同培養(yǎng)條件下,根系分泌物對于鉻污染土壤中鉻的活化量也存在顯著差異。缺氮和缺硫條件培養(yǎng)的根系分泌物比全素條件培養(yǎng)的根系分泌物活化效果明顯增加,而缺磷條件培養(yǎng)的根系分泌物校全素條件培養(yǎng)的根系分泌物的活化效果顯著降低。

    3 討論與結(jié)論

    土壤中存在的各種螯合劑及活性功能團(tuán)可與重金屬競爭吸附位點(diǎn),從而影響重金屬的生物有效性[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,NO3-與Cr(Ⅵ)競爭李氏禾根部相同的吸收位點(diǎn),缺氮有利于李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收。據(jù)報道,森林生態(tài)系統(tǒng)中的植物對Pb的吸收會因?yàn)镹O3-的存在而受到明顯抑制,從而減少Pb對植物的毒害作用[14]。還有研究表明,氮可以影響玉米根系對鉻的吸收,且兩者呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),即當(dāng)?shù)吭黾訒r,玉米根系中的鉻含量不斷下降[15],這說明氮的存在可能會抑制玉米根系對鉻的吸收。以上結(jié)論都與本試驗(yàn)的結(jié)果一致。當(dāng)植物吸收NO3-時,會促使根系分泌OH-或HCO3-,使根際環(huán)境pH值升高,造成根際土壤堿化,從而降低土壤中的重金屬溶解度,減少根系對重金屬的吸收[2]。這有可能是NO3-抑制李氏禾吸收Cr(Ⅵ)的原因。

    由于磷自身形態(tài)的復(fù)雜性,使得關(guān)于磷影響植物對土壤中重金屬吸收的研究存在爭議。關(guān)于磷影響植物對重金屬吸收的報道也有不同結(jié)論。本試驗(yàn)結(jié)果表明,H2PO4-有利于李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收。這與一些學(xué)者的研究結(jié)論一致。如Singh的試驗(yàn)結(jié)果表明,在含鎘土壤中加入過量的磷,可以促進(jìn)油菜和燕麥對鎘的吸收[16]。黃化剛等通過盆栽試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)高濃度的磷有助于東南景天對鎘、鋅的積累[17]。陳同斌等的研究發(fā)現(xiàn),添加大量磷(含量為400 mg/kg以上)會使超富集植物蜈蚣草地上部、地下部的含砷量明顯升高,磷過量對蜈蚣草富集砷具有明顯的促進(jìn)作用[18]。其原因有可能是磷的加入降低了土壤pH值,從而提高了土壤重金屬的有效性[19]。此外,也有研究認(rèn)為,磷對植物吸收重金屬存在抑制作用。劉世亮等研究發(fā)現(xiàn),磷抑制了油麥菜對鎘的吸收[20],這與本研究結(jié)論相反。由此可見,添加磷對植物吸收重金屬的影響與植物品種、重金屬種類以及磷化合物組成的不同有密切關(guān)系。

    硫不僅是植物必需的營養(yǎng)元素,也對植物重金屬吸收調(diào)控具有重要影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明,缺硫促進(jìn)了李氏禾根細(xì)胞對Cr(Ⅵ)的吸收,添加SO42-對李氏禾吸收Cr(Ⅵ)存在競爭性抑制。這與前人的研究結(jié)論一致。如Hu等研究了SO42-對水稻吸收砷的影響,發(fā)現(xiàn)隨著硫施加量的增加,水稻地上部分的砷累積量減少[21]。Fan等研究發(fā)現(xiàn),施加過量硫能顯著降低水稻糙米中鎘的累積量[22]。Shewry等認(rèn)為,硫酸根離子對大麥幼苗吸收Cr(Ⅵ)起到抑制作用[23]。其原因有可能是因?yàn)镾O42-常被還原成S2-,并與土壤中其他金屬離子如Hg2+、Cu2+、Cd2+等形成金屬硫化物沉淀,從而降低金屬的移動性[24]。

    根分泌現(xiàn)象是植物根系為適應(yīng)環(huán)境變化而作出的反應(yīng)[25],植物的根分泌活動會受到一些因素(如本身基因型、生長環(huán)境等)的影響,其活動過程十分復(fù)雜。上述試驗(yàn)結(jié)果充分證明,李氏禾在不同營養(yǎng)條件(缺氮、缺硫或缺磷)下,其根系分泌物具有一定的特異性,其對特定物質(zhì)的活化能力也有所不同。McGrath等通過根袋試驗(yàn)證明,超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜(Thlaspi caerulescens)能夠?qū)⑼寥乐须y溶態(tài)的鋅轉(zhuǎn)化為可溶態(tài)鋅,從而有利于植物對鋅的吸收[26]。本試驗(yàn)表明,在缺氮條件下,李氏禾根系分泌物能有效活化土壤中的鉻,使其活性提高,這與樓玉蘭等認(rèn)為的施用硝態(tài)氮會促使根系分泌OH-或HCO3-,從降低土壤重金屬活性的研究結(jié)論[2]相符。在缺氮、缺硫培養(yǎng)條件下,李氏禾根系分泌物通過活化土壤中的難溶性鉻,促進(jìn)植物對鉻的吸收,與本研究中缺氮、缺硫條件有利于李氏禾根系對Cr(Ⅵ)吸收的試驗(yàn)結(jié)果一致,與全素培養(yǎng)條件相比,缺磷培養(yǎng)條件下的根系分泌物不利于土壤中難溶性鉻的溶出,因此不利于李氏禾根系對鉻的吸收,與本研究中缺磷對李氏禾吸收Cr(Ⅵ)存在非競爭性抑制作用的結(jié)論一致,也與趙晶等認(rèn)為的磷的加入降低了土壤pH值,提高了土壤重金屬有效性的研究結(jié)論[19]相符。

    綜上所述,缺氮、缺硫有利于李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收,缺磷不利于李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收,適當(dāng)添加H2PO4-有利于李氏禾對Cr(Ⅵ)的吸收。在后續(xù)工作中有必要進(jìn)一步研究添加不同濃度的磷對李氏禾吸收Cr(Ⅵ)的影響,以確定H2PO4-的最佳施用量。試驗(yàn)結(jié)果對促進(jìn)鉻超富集植物李氏禾對污染土壤中Cr(Ⅵ)的吸收,從而進(jìn)一步提高鉻污染土壤的植物修復(fù)效率和完善植物修復(fù)技術(shù)有著重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

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