EB病毒新近感染患者IgG類抗體實驗室檢測分析①

陳禮文 程 娟 王 秀 梁 偉 管世鶴

(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科，合肥230601)

EB病毒(Epstein barr virus,EBV)是一種嗜人類淋巴細胞的γ皰疹病毒，其原發(fā)感染導(dǎo)致淋巴系統(tǒng)和單核-巨噬細胞系統(tǒng)急性增生，同時病毒在記憶B淋巴細胞持續(xù)潛伏并可重新激活致再感染。我國EBV感染非常普遍[1]，嬰幼兒多為隱性感染，兒童(4～6歲高發(fā))則主要表現(xiàn)為傳染性單核細胞增多癥，并增加成年后系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病的發(fā)病風(fēng)險[2]。EBV原發(fā)感染過程中首先產(chǎn)生VCA-IgM和VCA-IgG，前者是EBV新近感染標(biāo)志；在急性感染晚期和恢復(fù)期晚期分別出現(xiàn)EA-IgG和NA-IgG，前者在原發(fā)感染和再感染均為一過性升高，后者可終生存在[3，4]。本研究探討VCA-IgM+EBV新近感染患者NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG表達特點及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1研究對象 選取2016年2月至2018年5月在安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科檢測EBV抗體并且VCA-IgM陽性的住院和門診患者160例，其中男93例，女67例，年齡分布8個月～64歲，中位年齡4.2歲。EBV感染診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會感染學(xué)組和全國兒童EB病毒感染協(xié)作組發(fā)布的《兒童主要非腫瘤性EB病毒感染相關(guān)疾病的診斷和治療原則建議》[5]，綜合臨床和實驗室指標(biāo)確診并排除慢性活動性EBV感染(CAEBV)病例。成人EB感染診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、EB病毒DNA或抗體的檢測結(jié)果并排除外其他感染和鼻咽癌病例。本研究經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 入選病例血液標(biāo)本置入惰性分離膠促凝管內(nèi)，待充分凝固30 min后1 000 g離心15 min，收集血清標(biāo)本待測。

1.2.2EBV抗體檢測 VCA-IgM、VCA-IgG、NA-IgG和EA-IgG抗體檢測在MAGLUMI2000全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(新產(chǎn)業(yè)生物)上進行，采用配套微粒子化學(xué)發(fā)光試劑盒，按照儀器和試劑說明書進行操作。血清樣本用樣本稀釋液1∶11自動預(yù)稀釋，采用低點和高點標(biāo)準(zhǔn)品，借助于由主曲線經(jīng)兩點定標(biāo)而得到一條工作曲線，計算樣本EBV抗體濃度，以AU/ml表示。每批樣本檢測前均進行質(zhì)控品測定，確定其測量值在定值范圍內(nèi)并且符合Westgard質(zhì)控規(guī)則?？贵w濃度截斷值(Cut-off)采用試劑說明書推薦標(biāo)準(zhǔn)：VCA-IgM為3 AU/ml，VCA-IgG、NA-IgG和EA-IgG均為2 AU/ml。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 VCA-IgG與EA-IgG濃度比較采用Mann-WhitneyU檢驗，數(shù)據(jù)以中位數(shù)(四分位間距)表示。NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG陽性率比較采用Pearsonχ2檢驗或連續(xù)校正卡方檢驗(當(dāng)n≥40且有1≤理論頻數(shù)<5時)。數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計軟件SPSS 19.0加權(quán)處理并分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1總體160例VCA-IgM+患者VCA-IgG、NA-IgG和EA-IgG陽性例數(shù)分布 均以2 AU/ml作為NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG抗體濃度的截斷值，統(tǒng)計分析總體160例VCA-IgM+患者中IgG類抗體的陽性例數(shù)分布，見圖1。NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG陽性例數(shù)分別為50例(31.25%)、91例(56.88%)和16例(10%)，全陰性60例(37.5%)，全陽性9例(5.63%)。其中NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG單陽性比例分別為8%(4/50)、47.25%(43/91)和31.25%(5/16)。160例VCA-IgM+患者中，NA-IgG和VCA-IgG、NA-IgG和EA-IgG以及VCA-IgG和EA-IgG雙陽性例數(shù)分別為37例(23.13%)、0例(0%)和2例(1.25%)。另外，50例NA-IgG陽性患者中有46例(92%)VCA-IgG陽性，4例(8%)VCA-IgG陰性。

2.2VCA-IgM+/NA-IgG-和VCA-IgM+/NA-IgG+患者VCA-IgG與EA-IgG濃度與陽性率比較 依據(jù)《EB病毒感染實驗室診斷及臨床應(yīng)用專家共識》[3]，將EB病毒VCA-IgM+界定為EB病毒新近感染狀態(tài)，VCA-IgM+/NA-IgG-界定為EB病毒原發(fā)感染早期/急性期；VCA-IgM+/NA-IgG+界定為原發(fā)感染恢復(fù)期或再感染，比較二類患者VCA-IgG與EA-IgG濃度與陽性率差異，分別見表1和表2。

2.3不同年齡段VCA-IgM+患者NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG陽性率比較 我國EBV原發(fā)感染高發(fā)年齡段為4～6歲[5]，因此本研究統(tǒng)計分析160例VCA-IgM+患者中<7歲和≥7歲患者NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG抗體陽性例數(shù)(陽性率)，并分別比較3種抗體陽性率差異，結(jié)果見表3。

圖1 EB病毒IgG類抗體在160例VCA-IgM+患者中的例數(shù)分布Fig.1 Distribution of EB virus IgG antibodies in 160 patients with VCA-IgM+

表1 VCA-IgM+/NA-IgG-和VCA-IgM+/NA-IgG+患者VCA-IgG與EA-IgG濃度比較

Tab.1 Comparison of VCA-IgG and EA-IgG concentrati-ons between VCA-IgM+/NA-IgG-and VCA-IgM+/NA-IgG+patients

GroupsnVCA-IgG (AU/ml)EA-IgG (AU/ml)VCA-IgM+/NA-IgG-1101.27 (0.32-3.90)0.80 (0.50-1.35)VCA-IgM+/NA-IgG+5022.93 (7.26-50)0.76 (0.54-1.61)P value0.0001)0.5461)

Note：1)Mann-WhitneyUtest,the data are presented as median (interquartile range).

表2 VCA-IgM+/NA-IgG-和VCA-IgM+/NA-IgG+患者VCA-IgG與EA-IgG陽性率比較

Tab.2 Comparison of positive rates of VCA-IgG and EA-IgG between VCA-IgM+/NA-IgG-and VCA-IgM+/NA-IgG+patients

GroupsnVCA-IgGEA-IgGVCA-IgM+/NA-IgG-11045 (40.91%)7 (6.36%)VCA-IgM+/NA-IgG+5046 (92%)9 (18%)P value0.0001)0.0231)

Note：1)Pearsonχ2test.

表3 不同年齡段VCA-IgM+患者NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG陽性率比較

Tab.3 Comparison of positive rates of NA-IgG,VCA-IgG and EA-IgG between VCA-IgM+patients from two different age groups

GroupsnNA-IgGVCA-IgGEA-IgG<7 year12630 (23.81%)70 (55.56%)13 (10.32%)≥7 year3420 (58.82%)21 (61.76%)3 (8.82%)P value0.0001)0.5171)1.0002)

Note：1)Pearsonχ2test；2)Continuity correction forχ2(Yates′ correction).

3 討論

不同患者感染EBV后到實驗室檢測抗體的時間間隔存在較大差異，并且EBV抗體隨著感染病程的進展此消彼長，不同抗體都有其獨特的動力學(xué)特點和窗口期，這為探索EBV抗體表達規(guī)律帶來一定的困擾和難度。如VCA-IgM在患者出現(xiàn)臨床癥狀時即可出現(xiàn)，但持續(xù)時間僅為4～8周；EA-IgG在急性感染晚期(發(fā)病后3～4周)出現(xiàn)，持續(xù)3～6月后消失；VCA-IgG稍晚于VCA-IgM出現(xiàn)，其與恢復(fù)期晚期(5～6周)才出現(xiàn)的NA-IgG均可終生存在[3，4]。本研究選擇門診或住院的EB病毒VCA-IgM+患者160例，分析NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG等IgG類抗體表達，結(jié)果顯示NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG陽性例數(shù)分別為50例(31.25%)、91例(56.88%)和16例(10%)。其中NA-IgG陽性率遠低于文獻報道的EBV感染患者和健康人群(均超過90%)[1,6]，EA-IgG陽性率也低于朱耀武等[6]在EB病毒相關(guān)疾病中報道的42.0%，略高于健康對照人群(7.5%)。NA-IgG和EA-IgG陽性率較其他研究偏低可能與本研究所選擇的研究對象有關(guān)：VCA-IgM+新近感染患者大多為兒童(中位年齡4.2歲)，是EB病毒原發(fā)感染的高發(fā)年齡段，而且抗體檢測時間大多處于EBV原發(fā)感染的早期/急性期，此時尚未產(chǎn)生EA-IgG和NA-IgG或濃度較低達不到檢測限值。并且，本研究中單獨VCA-IgM陽性，NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG全陰性病例達到60例(37.5%)，進一步表明研究對象大多處于EBV原發(fā)感染的早期/急性期，是導(dǎo)致NA-IgG和EA-IgG陽性率低于其他研究的主要原因。而VCA-IgG陽性率與王曉亮等[7]在兒童傳染性單核細胞增多癥(IM)報道的57.06%(97/170)較為接近，但低于馬閃珊等[8]報道的86.8%陽性率。需要指出的是，以上抗體陽性率差異也可能與各實驗室所使用的試劑和檢測方法差異有關(guān)。

在EBV原發(fā)感染過程中VCA-IgG緊隨VCA-IgM出現(xiàn)，一般早于NA-IgG并可持續(xù)存在，與NA-IgG一起作為EBV既往感染的標(biāo)志。但本研究50例NA-IgG陽性患者中有4例(8%)出現(xiàn)VCA-IgG陰性。究其原因，有以下兩種可能：①微粒子化學(xué)發(fā)光免疫法相較于傳統(tǒng)酶免疫測定法敏感性和特異性均有較大提高，但在NA-IgG和VCA-IgG檢測中仍存在一定的假陽性和假陰性[9]。Guerrero-Ramos等[10]使用線性免疫分析技術(shù)(Line immunoassays,LIA)作為參考檢測標(biāo)準(zhǔn)(Reference standard)，在58例經(jīng)參考標(biāo)準(zhǔn)檢測歸類為原發(fā)EBV感染的患者(VCA-IgM陽性/弱陽性，NA-IgG陰性/弱陽性和VCA-IgG陽性/弱陽性)中有6例(10.34%)使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法未檢出VCA-IgG陽性；②與EBV感染后血清學(xué)反應(yīng)的個體差異有關(guān)。文獻報道EBV抗體表達規(guī)律復(fù)雜多樣，例如5%～10%健康個體感染EBV后并不出現(xiàn)NA-IgG抗體，在免疫功能低下人群NA-IgG陰性比例更高[11]；在有的EBV既往感染個體中，采用基因重組免疫印跡RecomLine法不能檢測出VCA-IgG表達[12]。

EA-IgG在EBV感染中的診斷價值尚有爭議[13]。本研究依據(jù)《EB病毒感染實驗室診斷及臨床應(yīng)用專家共識》[3]，將VCA-IgM+/NA-IgG-界定為EB病毒原發(fā)感染早期/急性期；VCA-IgM+/NA-IgG+界定為原發(fā)感染恢復(fù)期或再感染，分析比較兩類患者EA-IgG濃度(中位數(shù))分別為0.80 (四分位間距0.50～1.35) AU/ml和0.76 (四分位間距0.54～1.61) AU/ml(P=0.546)；EA-IgG陽性率分別為6.36%和18%(P=0.023)。以上結(jié)果提示雖然EBV原發(fā)感染恢復(fù)期或再感染患者的EA-IgG陽性率顯著高于原發(fā)感染早期/急性期患者，但其濃度升高幅度不大，導(dǎo)致濃度之間無顯著差異。另一方面，兩類患者VCA-IgG濃度(中位數(shù))分別為1.27 (四分位間距0.32～3.90) AU/ml和22.93 (四分位間距7.26～50) AU/ml(P=0.000)，VCA-IgG陽性率分別為40.91%和92%(P=0.000)，提示VCA-IgG在鑒別原發(fā)感染早期/急性期和原發(fā)感染恢復(fù)期或再感染中的顯著作用，與EA-IgG形成鮮明對比。

兒童非腫瘤性EBV原發(fā)感染疾病主要為IM，國內(nèi)兒童IM發(fā)病的高峰年齡為4～6歲[5]。因此本研究比較了<7歲(126例)和≥7歲(34例)VCA-IgM+患者IgG類抗體的陽性率差異。結(jié)果顯示<7歲和≥7歲患者的NA-IgG陽性例數(shù)分別為30例(23.81%)和20例(58.82%)(P=0.000)；VCA-IgG陽性例數(shù)分別為70例(55.56%)和21例(61.76%)(P=0.517)；EA-IgG陽性例數(shù)分別為13例(10.32%)和3例(8.82%)(P=1.000)。其中與年齡相關(guān)的NA-IgG陽性率差異與Xiong等[1]對1 778 例0～10歲健康兒童進行的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)論基本一致，因為NA-IgG是EBV既往感染的主要標(biāo)志物，陽性率隨著年齡的增加而逐步提高。雖然VCA-IgG陽性率也與年齡相關(guān)[1]，但本研究顯示<7歲和≥7歲年齡組之間VCA-IgG陽性率差異無顯著意義，可能與VCA-IgG在EBV原發(fā)感染過程中出現(xiàn)較早且持續(xù)存在有關(guān)。而研究對象的特性(VCA-IgM+早期/急性期患者)和EA-IgG表達特點(出現(xiàn)遲、消失快)導(dǎo)致EA-IgG陽性率與年齡無關(guān)。

總之，本研究對EBV VCA-IgM+新近感染患者的NA-IgG、VCA-IgG和EA-IgG抗體實驗室檢測結(jié)果進行分析，結(jié)果表明IgG類抗體在EBV新近感染患者具有顯著的分布特征，聯(lián)合檢測EBV抗體有助于EB新近感染的實驗室確診以及感染時相判斷，從而裨益于EBV感染的基礎(chǔ)研究與臨床診治。