孵化期間淮南麻雞蛋殼鈣磷變化的研究

文│邱敬亭（安徽省池州市貴池區(qū)畜牧獸醫(yī)局）

種蛋能否正常發(fā)育，不僅取決于孵化條件的好壞，蛋內營養(yǎng)成分的吸收情況對其也有很重要的影響，所以探討種蛋各組成成分在孵化期間吸收轉移規(guī)律已受到許多人的關注。蛋殼的質量是衡量蛋雞生產成績好壞的一項十分重要的指標，它與種蛋的入孵率、孵化率、雞苗質量以及商品鮮蛋的質量、經濟效益密切相關。鈣是生物體內重要的元素之一，是影響胚胎發(fā)育的一個重要因素，禽類胚胎發(fā)育所需鈣來源于卵內容物和卵殼，但這兩部分對胚胎發(fā)育的供給在時間和量上存在不同，其中卵殼是禽類胚胎發(fā)育的主要鈣源。在生命活動代謝中，尤其是骨骼的生長發(fā)育，鈣、磷兩種元素存在密切的關系。

蛋殼是一種完美的生物材料，其質量對于蛋的孵化、貯存和運輸均有重要影響。鈣磷是雞體內含量最多的礦物質營養(yǎng)元素，也是孵化期間影響胚胎發(fā)育的重要因素。對孵化過程中胚胎發(fā)育的研究，主要集中在胚胎發(fā)育的形態(tài)學變化研究。目前大多集中在蛋殼超微結構的研究，有通過蛋殼超微結構的異同區(qū)分不同種類，也有從育種學的角度研究蛋殼的超微結構，但對孵化過程中蛋殼理化性質變化的研究則很少。本項目主要通過研究種蛋在孵化期間的鈣磷變化，為進一步研究胚胎的發(fā)育機理提供理論依據(jù)。

表1 淮南麻雞蛋殼顏色的測定結果與試驗分組（按b值大?。?/p>

一、材料與方法

1.材料。

（1）種蛋來源。選擇淮南市農業(yè)科學研究所提供的40周齡淮南麻雞所產的種蛋。種蛋入孵后分別于0天(入孵前）、6天、12天、18天、21天（出雛）取發(fā)育正常的種蛋，解剖分離蛋殼（包括外殼膜）用于鈣、磷測定。

（2）試驗用具、藥品與設備。試驗用具與藥品主要包括：100毫升培養(yǎng)皿、膠頭吸管、鑷子、甲醛、坩堝、容量瓶、電爐、甲醛、甲基紅、氨水溶液（1∶1）、醋酸溶液（1∶4）、4.2%草酸銨溶液、硫酸溶液（1∶3）、高錳酸鉀等；設備主要包括電子天平、CR-10型色差儀（JAPAN）、依愛牌模糊控制EIF/CDM4200型全自動孵化機、出雛器等。

2.試驗分組。選擇3 0 0枚淮南麻雞合格種蛋，用色差儀在同一基準值測量每枚種蛋鈍端的b值（黃度），按b值大小分成淺色組（6.4～20.8）、中色組（2 0.9～2 5.8）和深色組（25.9～34.3）三組，每組為100枚。

3.孵化管理。

（1）孵化條件。1～18天孵化溫度為37.8℃，相對濕度為55%，19～21天孵化溫度37.3℃，相對濕度70%；每2小時自動翻蛋1次，翻蛋角度為90°。第一次（入孵前）消毒和第二次（落盤時）消毒均采用甲醛、高錳酸鉀熏蒸消毒法。第6天照蛋除去無精蛋和死胚蛋；第11天和第18天照蛋除去死胚蛋；第19天落盤；第21天出雛，并進行稱重。

（2）孵化期間種蛋的剖檢。在入孵的第0、6、12、18、21天分別從蛋色組中取10枚發(fā)育正常種蛋進行測定蛋殼的鈣磷含量。

◎圖1 不同胚齡蛋殼重量的變化

◎圖2 不同胚齡蛋殼鈣含量變化

4.測定方法。中國農業(yè)大學主編《家畜飼養(yǎng)學實驗指導》中所述方法，其中鈣采用“高錳酸鉀法”，磷采用比色法。

（1）蛋殼中鈣含量的測定。試樣制備：在灰化后的坩堝灰分中加10毫升鹽酸（1∶3），用滴管滴幾滴濃HNO3，在電爐上煮沸后過濾至100毫升容量瓶中，用蒸餾水沖洗坩堝與漏斗濾紙，冷卻后定容。

鈣沉淀：用20毫升的移液管準確移取20毫升試樣于250毫升燒杯中，加蒸餾水100毫升，加2滴甲基紅指示劑，用滴管滴加氨水溶液（1∶1）使溶液變成黃色，再用滴管滴加使溶液呈紅色，將燒杯放在電爐上加熱煮沸，緩慢加入10毫升4.2%草酸銨溶液。沖洗煮沸后取下，靜置12小時，將燒杯中草酸鈣無損地轉移到濾紙上，用熱蒸餾水沖洗燒杯和玻璃棒3～5次，然后用熱蒸餾水沖洗濾紙9～10次，將濾紙連同沉淀物重新放入原燒杯中。

滴定:在燒杯中加入10毫升硫酸溶液（1∶3），蒸餾水50毫升，在電爐上加熱至75～85℃，立即用0.052摩爾/升高錳酸鉀溶液滴定至溶液呈微紅色，30秒不褪色，記錄消耗高錳酸鉀的體積數(shù)。

空白測定：除不加試樣分解液外，其他操作同上。

（2）蛋殼中磷含量的測定。定容：用2毫升吸管準確吸取試樣分解液2毫升，放入25毫升比色管中，分別用吸管加2毫升鉬酸銨溶液，1毫升20%亞硫酸鈉溶液，1毫升0.5%對氫醌溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，靜置（30分鐘）。

空白測定：除不加試樣分解液外，其他操作同上。

磷比色測定：在752N紫外可見分光光度計中，波長設定650納米，以空白液調零，測定并記錄試樣的吸光度。

5.數(shù)據(jù)處理。采用SPSS10.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行處理和顯著性檢驗。根據(jù)測定的蛋殼的重量、蛋殼鈣含量和磷含量換算成百分比的形式表示蛋殼的含鈣和含磷量。

二、結果分析

1.不同胚齡蛋殼重量的變化。從結果可知，在淺色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在中色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在深色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）。從不同蛋色組來看，在0、6、12、、18、21胚齡時，深色組與淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05），淺色組和中色組差異不顯著（P＜0.05）。

由圖1可看出，在孵化期間，隨著胚齡的增加，不同蛋色組的平均蛋殼重量都是呈現(xiàn)降低的趨勢。不同胚齡、不同蛋色組之間，蛋殼重量明顯不同，從大到小依次是：深色組、淺色組、中色組。

2.不同胚齡蛋殼鈣含量的變化。從結果可知，在淺色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在中色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在深色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）。從不同蛋色組來看，在0、6、12、18、21胚齡時，深色組與淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05），淺色組和中色組差異不顯著（P＜0.05）。

由圖2可看出，在整個孵化過程中，不同蛋色組在不同胚齡階段蛋殼的鈣含量總體呈現(xiàn)下降的趨勢。在0～12胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度較慢；在12～21胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度相對較快。從不同蛋色組蛋殼鈣含量情況來看，深色組蛋殼鈣含量顯著高于中色組和淺色組（P＜0.05），中色組和淺色組之間差異不顯著（P＞0.05）。

3.不同胚齡蛋殼磷含量的變化。從結果可知，在淺色組，0胚齡與6胚齡差異不顯著（P＞0.05），與12胚齡、18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05），其中，12胚齡與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在中色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在深色組，0胚齡與6胚齡差異不顯著（P＞0.05），與12胚齡、18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）。從不同蛋色組來看，在0、6、12、18、21胚齡時，深色組與淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05），其中，淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05）。

由圖3可看出，在整個孵化期間，不同蛋色組蛋殼磷含量隨著胚齡的增加呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢。在0～6胚齡和12～18胚齡，蛋殼磷含量下降緩慢；在6～12胚齡蛋殼磷含量下降速度最快。從不同蛋色組蛋殼磷含量情況來看，淺色組蛋殼磷含量顯著高于中色組和深色組（P＜0.05），以中色組蛋殼磷含量最低。

◎圖3 不同胚齡蛋殼磷含量的變化

三、討論與小結

1.孵化過程中蛋殼鈣含量的變化。試驗研究結果表明，在整個孵化過程中，不同蛋色組在不同胚齡階段蛋殼的鈣含量總體呈現(xiàn)下降的趨勢。在0～12胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度較慢；在12～21胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度相對較快。從不同蛋色組蛋殼鈣含量情況來看，深色組蛋殼鈣含量顯著高于中色組和淺色組（P＜0.05），中色組和淺色組之間差異不顯著（P＞0.05）。孵化早期胚胎處于卵裂和器官初步形成期，所需鈣數(shù)量較少，主要由卵內容物供給；中后期胚胎發(fā)育處于器官形成和生長發(fā)育期，尤其是骨骼的快速生長發(fā)育，形成了對鈣的大量需求。蛋殼是雞胚胎發(fā)育的重要鈣源，提供了鈣總需求量的89.12%，約為每克卵內容物提供胚胎鈣量的7.19倍。早期胚胎處于卵裂和組織器官的初步形成期，所需鈣量較少，主要由卵內容物供給，中、后期是器官形成和生長發(fā)育期，尤其是骨骼的生長，再加上出雛前卵黃對鈣的富集作用，形成了對鈣源的大量需求，僅靠卵內容物中的鈣就滿足不了胚胎發(fā)育的需要，卵殼就成為主要的鈣源。詳細機理尚需進一步研究。

2.孵化過程中蛋殼磷含量的變化。試驗研究結果表明，不同蛋色組蛋殼磷含量隨著胚齡的增加呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢。在0～6胚齡和12～18胚齡，蛋殼磷含量下降緩慢；在6～12胚齡蛋殼磷含量下降速度最快。從不同蛋色組蛋殼磷含量情況來看，淺色組蛋殼磷含量顯著高于中色組和深色組（P＜0.05），以中色組蛋殼磷含量最低。磷含量的急劇降低是從9胚齡開始，而早于鈣，到12胚齡達到高峰。孵化期間各階段蛋殼中鈣、磷比例看，淮南麻雞發(fā)育階段對鈣、磷的吸收利用情況不同于胚后發(fā)育，這主要是因為胚胎期重點在組織器官的形成，而胚后發(fā)育重點在于個體生長。

磷含量低會降低產蛋率，影響蛋殼質量，降低種蛋的孵化率，但日糧中的磷含量過高時，也會影響蛋殼質量。磷孵化前期變化不明顯，中期較為明顯，后期趨于穩(wěn)定。該研究符合禽類胚胎發(fā)育規(guī)律。從蛋色組來看，深色組無論是在蛋殼重量上，還是鈣磷含量上，都要比淺色組和中色組要高，但是隨著孵化的進行，三個蛋色組在蛋殼重量、鈣磷上都呈現(xiàn)規(guī)律性變化。中期是胚胎各種組織器官的形成、發(fā)育時期，而磷除了參與骨骼的形成外，還參與各種代謝活動，尤其是生物膜的形成、遺傳信息的傳遞、能量的供應等，所以中期磷的供給尤為重要。但卵內物質含磷量較高，在供給胚胎發(fā)育需要的時間量上與卵殼有何互補關系。詳細機理尚需進一步研究。

四、結論

在整個孵化過程中，不同蛋色組在不同胚齡階段蛋殼的鈣、磷含量總體呈現(xiàn)下降的趨勢，其中：深色組蛋殼鈣含量最高，淺色組蛋殼磷含量最高。