缺血性腦卒中患者MIF基因多態(tài)性檢測的意義

孟麗莉 魯俊華 徐穎

[摘要]目的 探討缺血性腦卒中（CIS）患者MIF基因多態(tài)性檢測的意義。方法 選取2017年12月～2018年11月牡丹江醫(yī)學院附屬紅旗醫(yī)院治療的146例CIS患者和在體檢中心體檢的143例健康人作為研究對象，將其分別納入卒中組和健康組，從MIF-173G/C多態(tài)性位點基因型和等位基因頻率方面，比較兩組的差異。結果 在MIF-173G/C多態(tài)性位點基因型分析結果方面，卒中組GG型基因頻率低于健康組，CC型基因頻率高于健康組。在MIF-173G/C等位基因頻率比較方面，卒中組MIF-173G/C等位基因G的頻率低于健康組，等位基因C的頻率高于健康組，以上比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 攜帶MIF-173CC基因的人群，罹患腦卒中的風險更高，另外等位基因C增加了腦卒中的發(fā)病風險。

[關鍵詞]MIF;基因多態(tài)性;缺血性腦卒中;腦卒中篩查

[中圖分類號] R581.3? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）6（a）-0044-03

[Abstract] Objective To explore the significance of MIF gene polymorphism in patients with ischemic stroke （CIS）. Methods All of 146 patients with CIS who treated in Mudanjiang Medical School Affiliated Hongqi hospital and 143 healthy persons who examined in the physical examination center were selected as object of study from December 2017 to November 2018. They were divided into stroke group and healthy group. The genotype and allele frequency of MIF-173 G/C polymorphic loci were compared between the two groups. Results? In terms of genotype analysis results of MIF-173 G/C polymorphic loci， the GG gene frequency of stroke group was lower than that of healthy group， and the CC gene frequency was higher than that of healthy group. In terms of the frequency comparison results of mif-173 g/C allele， the frequency of MIF-173 G/C allele G in the stroke group was lower than that in the healthy group， and the frequency of allele C was higher than that in the healthy group. The differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion People with MIF-173CC have a higher risk of stroke， and allele C increases the risk of stroke.

[Key words] MIF; Gene polymorphism; Ischemic stroke; Stroke screening

缺血性腦卒中（CIS）是指由于患者頸動脈或椎動脈閉塞、狹窄或供血不足，而導致腦組織壞死的總稱[1-2]，是各神經(jīng)科最常見的疾病?；颊甙l(fā)病后，典型的癥狀表現(xiàn)如一過性局限性神經(jīng)功能障礙、對側肢體突發(fā)性麻木和感覺功能障礙等[3-4]。由于病情進展十分迅速，甚至短至數(shù)分鐘即可死亡，患者的篩查和預防工作尤為重要。近年來，隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，越來越多的臨床試驗證實，遺傳因素是患者出現(xiàn)顱外徑內動脈和動脈硬化根本原因之一，相應的識別出CIS的易感基因，表達出致病的遺傳本質，可進一步提高患者篩查結果的準確性。本研究對巨噬細胞移動抑制因子（MIF）-173G/C多態(tài)性與CIS的關聯(lián)進行研究，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2017年12月～2018年11月在牡丹江醫(yī)學院附屬紅旗醫(yī)院治療的146例CIS患者作為觀察對象。納入標準：①符合《中國急性缺血性腦卒中治療指南2010》中的CIS診斷標準[5]，且經(jīng)頭顱CT或MRI證實;②首次發(fā)病患者;③個人資料完整。排除標準：①出血性腦卒中患者;②因外傷導致的CIS患者;③精神類疾病患者;④肝臟等臟器重度功能障礙患者;⑤免疫系統(tǒng)疾病患者等。將以上患者納入卒中組，其中，男78例，女68例;年齡46～67歲，平均（56.56±6.24）歲。選擇同期在體檢中心體檢的143例健康人員作為比較對象，將其納入健康組，其中男79例，女64例;年齡42～65歲，平均（55.83±5.87）歲。兩組的一般情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會同意，患者知情同意后，開始具體的研究工作。

1.2實驗方法

所有調查對象禁食12 h后，在次日晨抽取靜脈血5 ml進行檢測。具體方法如下。擴增MIF：提取基因組DNA，提取方法為酚氯仿抽提法。應用Primer 5.0軟件設計引物：上游引物為5′-ACTAAGAAAGACCCGAGGC-3′，下游引物為5′-GGGGCACGTTGGTGTTTA-3′，目標片長度為366 bp，引物由上海英俊生物技術有限公司合成。使用PE公司生產(chǎn)的9700型PCR擴增儀擴增。擴增反應體系均為10 μl，PCR反應程序為34個循環(huán)，依次為預變性95℃、變性95℃、退火54℃和延伸72℃，時間分別為5 min、30 s、40 s和45 s。以上完成后，延伸10 min。用濃度為2%的瓊脂糖凝膠電泳觀察PCR產(chǎn)物[6-8];然后進行多態(tài)性分析。酶切體系包括5 μl的PCR擴增產(chǎn)物，5 U的Alu-I限制性內切酶等，酶切溫度為37℃，酶切時間10 h。配置濃度為3.0%的瓊脂糖凝膠，取8 μl酶切產(chǎn)物置于0.5×TBE溶液中電泳，電壓90 V，電泳時間50 min。結束后，觀察結果并拍照。最后進行DNA測序，由上海英俊公司完成測序工作[9-11]。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0溶解性軟件分析結果，計數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組MIF-173G/C多態(tài)性位點基因型的比較

健康組和卒中組在GG、GC和CC基因型頻率整體比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在任意一項基因型頻率方面比較，兩組在GC型基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.469，P=0.493），但卒中組GG型基因頻率低于健康組（χ2=7.624，P=0.006），CC型基因頻率高于健康組，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.393，P=0.002）（表1）。

2.2兩組MIF-173G/C等位基因頻率的比較

卒中組MIF-173G/C等位基因G的頻率低于健康組，等位基因C的頻率高于健康組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表2）。

3討論

CIS是我國最為常見的一類腦血管疾病，指由于腦部供血不足而導致腦組織壞死的總稱。其致病因素較為復雜，如顱外徑內動脈或椎動脈狹窄、閉塞或血栓形成等，均可導致發(fā)病[12-14]。患者發(fā)病后，典型的癥狀表現(xiàn)如突發(fā)性眩暈、單側肢體或面部麻木、全身乏力和血壓異常波動等，由于CIS具有病情進展迅速的特點，即使患者立刻接受治療，仍有80%的患者因病致殘，如偏癱和吞咽功能障礙等，嚴重影響患者后期的生存質量，死亡率高達40%左右[15-16]。因此對CIS患者來說，疾病的篩查和預防工作，意義尤為重要。

近年來，隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，已經(jīng)證實高血壓、糖尿病和肥胖癥等患者是腦卒中發(fā)病的高危人群，以上患者也成為了腦卒中篩查的重點對象。但高血壓等疾病可以說是“表”，其遺傳因素才是內在的“本”，患者的發(fā)病是基因與環(huán)境和生活習慣等因素綜合導致的結果。

在基因的研究方面，美國杜克大學醫(yī)學中心醫(yī)學研究所1995年成功克隆了MIF基因。其定位于22號染色體ql1.23區(qū)，全長為2119 bp，含有3個外顯因子和2個內含子。高顯示液相染色體圖譜對MIF進行分析，發(fā)現(xiàn)MIF基因在+254T/C、+656C/G和-173G/C存在多態(tài)性位點。其中前兩者位于內含子區(qū)，不表達，而-173G/C位于外顯子區(qū)，因此MIF-173G/C具有更高的研究意義和價值，也成為現(xiàn)階段醫(yī)學研究的熱點和重點。袁琳等[17]以130例卵巢癌患者作為研究對象，研究MIF-173G/C多態(tài)性與患者遺傳易感性間的關系，發(fā)現(xiàn)與攜帶MIF-173GG基因的人群比較，攜帶MIF-173GC/CC基因的人群罹患卵巢癌的風險降低了43.2%;蔡科科[18]將98例前列腺癌患者與80例正常人群進行MIF-173G/C基因型比對，證實等位基因C增加了前列腺癌的發(fā)病風險等;周發(fā)瓊等[19]對恩施地區(qū)土家族銀屑病患者MIF-173G/C多態(tài)性與銀屑病的發(fā)病進行了關聯(lián)研究，分析結果表明，銀屑病患者CC基因型和C等位基因頻率顯著高于非銀屑病患者。

根據(jù)以上研究結果，可見MIF-173G/C多態(tài)性與多種疾病的發(fā)病密切相關，本研究將其引入到腦卒中的研究中，從遺傳因素的角度，進一步篩查出重點的防治對象。本研究結果顯示，在MIF-173G/C多態(tài)性位點基因型分析結果方面，卒中組GG型基因頻率低于健康組，CC型基因頻率高于健康組（P<0.05）;在MIF-173G/C等位基因頻率比較結果方面，卒中組MIF-173G/C等位基因G的頻率低于健康組，等位基因C的頻率高于健康組（P<0.05）。

另外考慮到腦卒中的發(fā)病在我國具有一定的地域性特點，相關資料統(tǒng)計，黑龍江腦卒中的發(fā)病率位于全國榜首，發(fā)病率是南方各省市平均值的5～6倍，是北方各省市平均值的2～3倍[20-22]。而不同省份的患者和人群在基因角度本身就具有一定的區(qū)別，袁寧[23]通過DNA測序技術和PCR-RFLP技術，對我國多個省份居民的MIF-173G/C進行研究和比較，發(fā)現(xiàn)湖南與浙江和廣東居民MIF-173G/C等位基因頻率分布趨勢明顯不同，卻與日本人基因頻率分布趨勢相似。因此本研究結果同樣僅對黑龍江較為適用。另外由于本實驗例數(shù)和實驗設備等條件的制約，在實驗結果方面，有待其他專家或同行進一步驗證。

綜上所述，攜帶MIF-173CC基因的人群罹患腦卒中的風險更高，另外等位基因C增加了腦卒中的發(fā)病風險，建議在未來的腦卒中臨床篩查中，將以上人群納入重點的觀察和防治對象。

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（收稿日期：2019-01-14? 本文編輯：崔建中）