葉下花水煎劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的初探

王曉燕，梁生林

葉下花水煎劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的初探

王曉燕，*梁生林

（井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江西，吉安 343000）

初步探討葉下花水煎劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用。采用二甲苯致小鼠耳腫脹炎癥模型，觀察葉下花水煎劑灌胃給藥對(duì)急性炎癥的作用。采用熱板法和醋酸扭體法致痛，觀察葉下花水煎劑灌胃給藥的鎮(zhèn)痛作用。與模型組相比，葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹具顯著抑制作用（< 0.01）。葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組給藥后明顯延長(zhǎng)熱板所致小鼠的痛閾值，與模型組和自身給藥前比較差異極顯著（< 0.01）；葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，與模型組比較差異極顯著（< 0.01）。葉下花水煎劑灌胃給藥均具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

葉下花；水煎劑；抗炎；鎮(zhèn)痛；初探

葉下花又名追風(fēng)箭、兔耳風(fēng)、地黃連，為菊科兔耳風(fēng)屬植物白背兔耳風(fēng)(Franch. var.Beauverd)，以全草或根入藥，每年5~7月采收，鮮用或切段曬干[1]。性溫、味苦，具有祛風(fēng)除濕、散瘀止血、消腫散結(jié)的功效，主治風(fēng)濕痹痛、血瘀經(jīng)閉、跌打損傷、骨折腫痛等[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，葉下花含有黃酮類(lèi)、萜類(lèi)等化合物[2-3]，具抗氧化[3]、治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[4-5]等作用，但葉下珠的抗炎鎮(zhèn)痛作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用小鼠耳腫法炎癥模型，以及小鼠熱板法、醋酸扭體法疼痛模型，探討葉下花水煎劑灌胃給藥的抗炎鎮(zhèn)痛作用，旨在為其臨床應(yīng)用及進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑

葉下花購(gòu)于云藥網(wǎng)，經(jīng)井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)系周秋貴副教授鑒定為菊科兔耳風(fēng)屬植物白背兔耳風(fēng)(Franch. var.Beauverd.)；鹽酸嗎啡注射液，東北制藥集團(tuán)公司沈陽(yáng)第一制藥廠，規(guī)格10 mg/mL ，批號(hào)080701-2；阿司匹林片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司（進(jìn)口分裝），規(guī)格0.1 g/片，批號(hào)BJ04931；36%醋酸，上海松江佘山化工廠；二甲苯，中國(guó)上海試劑一廠，批號(hào)20120201。

1.2 動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18~22 g，雌雄兼?zhèn)洌?80只，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(湘)2011-0003。

1.3 儀器

YLS-25A電動(dòng)耳腫打耳器，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司；RB-200智能熱板儀，成都泰盟軟件有限公司；循環(huán)水式多用真空泵SHB-ⅢA，上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A，上海亞榮生化儀器廠；JA2003N 電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

2 方法

2.1 葉下花水煎劑的制備

取切成小段的干燥葉下花全草120 g，用蒸餾水浸泡0.5 h，加10倍量蒸餾水（第一次多加2倍量）用文火煎煮3次，第1次為1 h，第2、3次均為0.5 h。合并3次煎出液，靜置去渣，濃縮為200 mL，貯存?zhèn)溆?。用時(shí)用蒸餾水配制。

2.2 葉下花水煎劑的抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.2.1 二甲苯致耳腫法抗炎實(shí)驗(yàn)[6-9]

60只昆明種小鼠，雌雄各半，按性別和體重隨機(jī)分為5組，每組12只：模型組（蒸餾水，10 mL /kg），阿司匹林片（0.5 g/kg）陽(yáng)性對(duì)照組，葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組。葉下花的給藥劑量參考中藥大辭典成人每日用量30 g，按動(dòng)物與人體的每千克體質(zhì)量等效劑量折算系數(shù)（10倍）換算成小鼠的劑量，約為6.0 g/kg，作為高劑量組。小鼠均灌胃給藥，給藥容量均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥5 d。末次給藥后1 h，用二甲苯0.05 mL均勻涂抹每只小鼠右耳廓兩面致炎，左耳作對(duì)照。30 min后脫頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑8 mm耳腫打耳器分別在左右耳的同一部位打下圓形耳片，電子天平稱(chēng)重量，以?xún)啥闹亓坎钭鳛槎[脹度，計(jì)算小鼠腫脹抑制率。

耳腫脹度＝右耳片重量－左耳片重量

耳腫脹抑制率（%）＝（模型組腫脹度－給藥組腫脹度）/模型組腫脹度×100%

2.2.2 熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)[6-9]

熱板溫度（55 ±0.1）℃，記錄小鼠從放入熱板至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需時(shí)間（s），小于5 s或大于30 s或跳躍的都棄之不用。取篩選合格的雌性小鼠60只，按體重隨機(jī)分為5組，除陽(yáng)性對(duì)照組為嗎啡溶液（0.02 g/kg）外，其余各組同“2.2.1”項(xiàng)。將每只小鼠正常痛閾值各測(cè)2次，每次間隔10 min，取其平均值為給藥前正常痛閾值。給藥除陽(yáng)性對(duì)照組皮下注射鹽酸嗎啡溶液2 d外，其余各組同“2.2.1”項(xiàng)。末次給藥后30、60、90、120 min各測(cè)小鼠痛閾值，如果用藥后放入熱板60 s仍無(wú)反應(yīng)，即將小鼠取出，其痛閾值按60 s計(jì)算。

2.2.3 醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)[6-9]

將雌雄各半小鼠60只，按性別和體重隨機(jī)分為5組，組別及給藥同“2.2.1”項(xiàng)。末次給藥后1 h，各鼠均腹腔注射0.2 mL/只的0.6%醋酸（醋酸溶液臨用前配制）。記錄各組小鼠腹腔注射后15 min內(nèi)扭體反應(yīng)（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢）次數(shù)，并計(jì)算抑制率。

抑制率（%）=（模型組扭體反應(yīng)次數(shù)－給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)）/模型組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與模型組相比較，葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹均有顯著抑制作用（< 0.01），且耳腫脹抑制率與劑量呈正相關(guān)；阿司匹林片0.5 g/kg對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹也具有顯著抑制作用（< 0.01）。與阿司匹林組相比較，葉下花水煎劑高、中、低劑量組作用均弱于阿司匹林組（< 0.05，< 0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 葉下花水煎劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（，n = 12）

注：與模型組比較，**< 0. 01；與阿司匹林組比較，&< 0. 05，&&< 0. 01

3.2 對(duì)熱板法致小鼠疼痛的影響

與模型組相比較，給藥前各組痛閾值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（> 0.05）；葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組，給藥后30、60、90、120 min明顯延長(zhǎng)熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01），且具劑量依賴(lài)性；嗎啡溶液（0.02 g/kg）組給藥后30、60、90、120 min顯著延長(zhǎng)熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01）。

與自身給藥前相比較，葉下花水煎劑高、中、低劑量(6.0、3.0、1.5 g生藥/kg)組和嗎啡溶液（0.02 g/ kg）組，給藥后30、60、90、120 min明顯延長(zhǎng)熱板所致小鼠的痛閾值（< 0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 葉下花水煎劑對(duì)小鼠熱板法致痛的鎮(zhèn)痛作用（，n = 12）

注：與模型組比較，**< 0.01；與自身藥前痛閾比較，&&< 0.01

3.3 對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

與模型組相比較，葉下花水煎劑高、中、低劑量（6.0、3.0、1.5 g生藥/kg）組均能明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（< 0.01），且具有劑量依賴(lài)性；阿司匹林片0.5 g/kg給藥后能顯著減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（< 0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 葉下花水煎劑對(duì)醋酸致小鼠扭體次數(shù)的影響（，n = 12）

注：與模型組比較，**< 0. 01

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用二甲苯致小鼠耳腫法炎癥模型和小鼠熱板法、醋酸扭體法疼痛模型來(lái)考察葉下花水煎劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

用二甲苯致小鼠耳廓腫脹是以滲出和水腫為主的急性炎癥反應(yīng)[10-11]，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示葉下花水煎劑灌胃給藥均明顯減輕二甲苯所致小鼠耳廓的腫脹，表明葉下花水煎劑灌胃給藥對(duì)急性炎癥具有顯著抑制作用。

小鼠熱板實(shí)驗(yàn)是通過(guò)一定溫度（55 ℃）刺激小鼠的足跖部以產(chǎn)生疼痛反應(yīng)。常以熱刺激開(kāi)始到小鼠出現(xiàn)舔后足反應(yīng)的時(shí)間為測(cè)痛指標(biāo)[6,11]，并以此評(píng)價(jià)藥物的鎮(zhèn)痛作用。熱板反應(yīng)有高位中樞參與[12]。醋酸扭體實(shí)驗(yàn)是通過(guò)小鼠腹腔注射醋酸來(lái)刺激小鼠腹膜引起腹膜炎癥反應(yīng)而產(chǎn)生疼痛，表現(xiàn)為腹部?jī)?nèi)凹、臀部高起、軀干與后肢伸張等扭體反應(yīng)[7]。小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)是篩選弱鎮(zhèn)痛藥的一種簡(jiǎn)便、敏感、重復(fù)性好的方法[12]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示葉下花水煎劑灌胃給藥對(duì)熱板法所致小鼠的痛閾值能明顯延長(zhǎng)，醋酸刺激所致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)明顯減少，這說(shuō)明葉下花水煎劑灌胃給藥對(duì)溫度和醋酸刺激導(dǎo)致的疼痛具有明顯鎮(zhèn)痛作用。

研究報(bào)道黃酮類(lèi)化合物[13]能提高熱板法致痛小鼠痛閾值、減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)、抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度、抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹，這些作用可能與其抑制神經(jīng)組織鈣通道和非神經(jīng)組織鈣通道，減少致炎致痛介質(zhì)釋放等有關(guān)。葉下花含有黃酮類(lèi)化合物，且含量較高[3]，推測(cè)其抗炎鎮(zhèn)痛作用可能與其含有黃酮類(lèi)化合物有關(guān)。但其抗炎鎮(zhèn)痛的真正活性成份，以及作用機(jī)制等今后有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，葉下花灌胃給藥對(duì)急性炎癥具有良好的抑制作用，對(duì)物理性和炎性疼痛也具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。這為其臨床應(yīng)用和綜合開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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PRELIMINARY STUDY ON THE ANTI-INFLAMMATORT AND ANALGESIC EFFECTS OFDECOCTION

WANG Xiao-yan,*LIANG Sheng-lin

(School of Medicine, Jinggangshan University, Ji′an, Jiangxi 343009, China)

:To investigate the anti-inflammatory and analgesic effects ofdecoction in mice.: The models of mouse ear swelling caused by xylene and the models of mouse pain caused by hot plate and acetic acid were used to observe the anti-inflammatory effects and the analgesic effects ofdecoction respectively.: Compared with the model group, high, medium and low doses ofdecoction could significantly inhibit ear swelling in mice (< 0.01). Moreover, the pain threshold with hot plate method was significantly prolonged (< 0.01) compared with the model group and the data before the drugs administration of high, medium and low doses ofdecoction. And the writhing number was significantly reduced (< 0.01) when contrasted to the model group after decoction administration.: The results showeddecoction possesses the anti-inflammatory and analgesic effects.

; decoction; mice; anti-inflammatory; analgesia; primary investigation

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2019.05.016

1674-8085(2019)05-0082-04

2019-01-12；

2019-03-06

國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目子課題項(xiàng)目(2012BAC11B02-6)

王曉燕(1977-)，女，江西吉安人，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事實(shí)驗(yàn)教學(xué)及中草藥藥理研究(E-mail：513367942@qq.com);

*梁生林(1962-)，男，江西吉安縣人，教授，主要從事中草藥藥理及毒理研究(E-mail: slliang1962@163.com).