肺泡灌洗液結(jié)核桿菌RNA和DNA檢測(cè)在痰菌陰性肺結(jié)核診斷中的臨床應(yīng)用

陳 皋，鄔碧波，吳孟征，羅萬(wàn)蓉，秦春俊，劉舒舒，劉建英，劉 麗

肺結(jié)核是結(jié)核桿菌感染引發(fā)的一種呼吸系統(tǒng)疾病，發(fā)病患者癥狀以低熱、納差、消瘦、咳嗽、咯痰、咯血等為主[1-2]。肺結(jié)核病程長(zhǎng)，部分患者可呈進(jìn)行性發(fā)展，早期診斷及治療對(duì)改善疾病癥狀，提升患者生活質(zhì)量具有重要意義[3]。痰結(jié)核桿菌培養(yǎng)是診斷該病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但該檢測(cè)需要較長(zhǎng)時(shí)間，并且對(duì)于痰檢未發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌的痰菌陰性肺結(jié)核而言，其診斷效能嚴(yán)重不足。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，以RNA、DNA為檢測(cè)標(biāo)靶的分子生物檢測(cè)技術(shù)可快速、高效診斷肺結(jié)核[4]。為分析這2種檢測(cè)方法在痰菌陰性肺結(jié)核中的陽(yáng)性率，本文選取我院接受檢查和治療的300例痰菌陰性肺結(jié)核患者進(jìn)行了如下研究。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2017年3月—2019年3月在我院接受檢查和治療的痰菌陰性肺結(jié)核患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：①年齡≥18周歲；②診斷為痰菌陰性的肺結(jié)核患者；③無(wú)其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)[6]：①臨床資料不全者；②合并其他呼吸系統(tǒng)疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入患者300例，男155例，女145例，年齡23～58歲，平均（39.35±4.24）歲。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)，且患者均知情同意。

1.2 方法 抽取患者肺泡灌洗液后，對(duì)樣本進(jìn)行結(jié)核桿菌RNA和DNA檢測(cè)。結(jié)核桿菌RNA檢測(cè)試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供，檢測(cè)參照說(shuō)明書(shū)操作，注意樣本取出后30 min內(nèi)送檢，避免污染。結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)試劑盒選用蘇州天隆生物科技公司檢測(cè)試劑盒，同時(shí)選用Roche LightCycle 480進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 計(jì)算結(jié)核桿菌RNA和DNA陽(yáng)性檢出率，公式為：檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)/300×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)和百分率，并計(jì)算相應(yīng)的陽(yáng)性檢出率。

2 結(jié) 果

結(jié)核桿菌RNA陽(yáng)性檢出率為63.33%，DNA陽(yáng)性檢出率為33.33%，前者高于后者，見(jiàn)表1。

3 討 論

RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)是一種直觀、快速的結(jié)核桿菌檢測(cè)技術(shù)，不但可有效檢出結(jié)核桿菌，還可對(duì)結(jié)核桿菌存活狀態(tài)進(jìn)行鑒定[7]。結(jié)核桿菌死亡后其RNA將會(huì)降解，而DNA則不會(huì)降解，因此，如RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)顯示RNA陽(yáng)性則意味著結(jié)核桿菌是活菌[8-9]。此外，RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)還可對(duì)結(jié)核病是否進(jìn)展以及相關(guān)藥物療效進(jìn)行評(píng)估[10]。結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)是通過(guò)對(duì)DNA片段進(jìn)行放大擴(kuò)增，并借助熒光標(biāo)記探針對(duì)結(jié)核桿菌DNA擴(kuò)增序列進(jìn)行定量檢測(cè)的一種檢測(cè)方法，可有效診斷結(jié)核病[11]。但結(jié)核桿菌DNA無(wú)法鑒別菌體存活狀態(tài)，也無(wú)法對(duì)結(jié)核病進(jìn)展情況進(jìn)行鑒別，并且結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)時(shí)容易出現(xiàn)交叉污染[12-13]。本研究中，結(jié)核桿菌RNA檢測(cè)痰菌陰性肺結(jié)核的陽(yáng)性檢出率為63.33%，DNA陽(yáng)性檢出率為33.33%，前者高于后者，表明結(jié)核桿菌RNA檢測(cè)對(duì)痰菌陰性肺結(jié)核診斷的靈敏度高于結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)。

表1 2種檢測(cè)方法對(duì)痰菌陰性肺結(jié)核陽(yáng)性檢出率Table 1 Positive rate of 2 detection methods in sputum negative pulmonary tuberculosis

有研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核桿菌RNA檢測(cè)在肺結(jié)核中的檢測(cè)靈敏度以及陽(yáng)性、陰性預(yù)測(cè)值均高于DNA檢測(cè)，并且ROC曲線下面積最大[14]。還有研究通過(guò)痰樣本結(jié)核桿菌RNA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該種檢測(cè)方案所需時(shí)間短，靈敏度、陽(yáng)性率均較高，與結(jié)核桿菌培養(yǎng)結(jié)果具有較高相似性[15]，這也佐證了本研究結(jié)論。

本研究通過(guò)對(duì)比檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌RNA檢測(cè)對(duì)痰菌陰性肺結(jié)核具較高靈敏度，優(yōu)于DNA檢測(cè)。須要注意的是，RNA檢測(cè)結(jié)果還可能受患者癥狀，灌洗液取樣沖洗位置，樣本送檢時(shí)間以及樣本污染與否等因素影響，這需要檢測(cè)人員嚴(yán)格操作，或待患者癥狀改善后檢測(cè)，以提高RNA檢測(cè)效能。因?yàn)闃颖玖啃。狙芯可写嬖谝恍┎蛔阒?，有待納入更多樣本進(jìn)行驗(yàn)證。