低毒力非洲豬瘟病毒豬的同居試驗

禚寶山　章紅軍　范鵬程　歐士利　馮佩平摘譯

摘 ?要：自2007年以來，非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）在東歐的豬群中持續(xù)流行，俄羅斯聯(lián)邦在中部和南部地區(qū)已發(fā)現(xiàn)兩個非洲豬瘟流行區(qū)。中毒力至低毒力ASF病毒分離株在地方性ASF感染區(qū)域中循環(huán)。為了提高人們對于ASF病毒感染恢復動物中病毒傳播的知識，本試驗進行了體內(nèi)研究。用ASF病毒NH/P68毒株感染4只家豬，在感染72 d后在同一豬欄中引入另外2頭健康豬進行同居。ASF感染豬發(fā)展成溫和型ASF，研究人員從感染豬的組織中分離出了ASF病毒，直至感染的第36天、第65天、第99天和第134天安樂死。同居豬表現(xiàn)出輕微的臨床癥狀或沒有臨床癥狀，但血清呈現(xiàn)ASF病毒抗體陽性，研究人員在感染后28 d檢測到短暫的病毒血癥。同居豬的病毒傳播發(fā)生在同居后4周，原發(fā)感染后的3個月。本研究結(jié)果將有助于設計出能夠?qū)笰SF的更好、更有效的控制方案。

關鍵詞：非洲豬瘟;低毒力;感染;抗體;豬

中圖分類號：S855 文獻標志碼：C 文章編號：1001-0769（2019）07-0040-04

一個地區(qū)的豬群一旦確立非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）流行并具有廣泛的臨床癥狀和未來發(fā)病預期，豬群中感染超過一個月的豬可以從感染中恢復過來，但會保持亞臨床感染狀態(tài)。雖然研究人員在過去的幾十年中進行了多次有關ASF的豬體內(nèi)試驗，評估了幸存豬的體內(nèi)為什么能保留該病毒并存活，但仍然不知其中的原因。1960年，ASF在葡萄牙流行，8年后分離到毒株NH/P68，但已經(jīng)是弱毒株，這可能與病毒傳播過程中毒性減弱有關。ASF病毒BA71V毒株于1971年在西班牙分離到，其已經(jīng)能適應Vero細胞培養(yǎng)。

歐洲機構在研究ASF病毒在幸存豬上的傳播時，選擇低毒力的ASF病毒NH/P68株（1968年葡萄牙毒株）進行豬體內(nèi)傳代研究，發(fā)現(xiàn)了感染后無癥狀及未感染的豬，并評估了病毒的傳播。

1 ?材料及方法

西班牙的Gallardo在P3實驗室使用葡萄牙的ASF病毒NH/P68毒株感染豬，編號C1、C2、C3和C4，病毒含量105 TCID50/mL，肌肉注射1 mL，72 d后，編號為CC13和CC14的豬與其同居，每天統(tǒng)計7種癥狀的臨床得分，并匯總每日的臨床得分表（表1）。采血檢測豬的ASF抗體變化。

接種后，分別在第0天、第4天、第8天、第11天、第14天、第18天、第21天、第30天、第37天、第44天、第52天、第58天、第65天、第72天、第79天、第86天、第93天、第100天、第107天、第114天、第121天、第128天和第134天進行觀察。對癥狀明顯并安樂死的豬采用聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）檢測ASF病毒。

2 ?結(jié)果

研究人員對編號為CC13和CC14的豬于同居后的第62天和第42天實施安樂死，感染豬安樂死的時間是感染后的第35天（C1）、第65天（C4）、第99天（C3）和第134天（C2）。同時對這些豬的臨床癥狀進行評分、記錄體溫變化（圖1和圖2）和病毒檢測。

研究人員在肝臟、脾臟、扁桃體、心臟、肺臟、腎臟、關節(jié)和下頜下關節(jié)內(nèi)組織、咽、腹股溝、隱窩、腸系膜、縱隔、脾、腎和淋巴結(jié)等組織或器官中檢測到了ASF病毒。

感染的豬出現(xiàn)了不同的臨床癥狀：C2號豬表現(xiàn)出亞臨床感染，其他3頭豬的臨床癥狀強度為C1號豬>C3號豬>C4號豬。主要臨床癥狀有：反復性短暫發(fā)燒（以C1號和C4號豬為主），關節(jié)腫脹（中度至重度），皮膚發(fā)紅的區(qū)域變得僵硬和壞死（圖3），體重逐漸減輕，一個月內(nèi)發(fā)生痙攣性咳嗽等呼吸道癥狀（在C3號豬最明顯）。在病毒接種后第35天（C1號豬）、第65天（C4號豬）、第99天（C3號豬）和第134天（C2號豬）剖檢時都檢測到了ASF病毒（圖4），C1號豬和C4號豬發(fā)現(xiàn)了肉眼可見的病變。

Portugal報道，相關人員在伊比利亞半島對正常豬群接種了40多萬頭份的減毒ASF疫苗，結(jié)果引發(fā)非典型的ASF感染。有證據(jù)表明，ASF病毒陽性血清對ASF的抵抗作用不明，尸檢時可發(fā)現(xiàn)主要由慢性纖維蛋白組成的心包炎和干酪樣壞死以及鈣化的肺部，這與肺炎的存在有關（圖5），Pan指出這樣的慢性病的伴發(fā)癥狀和病變經(jīng)常被認為是細菌繼發(fā)感染引起。感染低劑量或低毒力病毒的豬群在經(jīng)過多年后，將出現(xiàn)與之適應的毒株。

3 ?討論

3.1 全程無癥狀豬

C2號豬在感染ASF病毒后一直無臨床癥狀，在第8天時檢測到抗體反應并持續(xù)到第134天，外觀無臨床癥狀可能與低水平的抗體有關;研究人員未在組織樣本中檢測到ASF病毒，在無癥狀豬檢測到的特異性抗體滴度比在慢性感染豬中檢測到的抗體滴度要低。但是，在生產(chǎn)中，它們的數(shù)量可能比較少。

3.2 發(fā)病后存在感染能力

豬患有慢性ASF癥狀14 d后出現(xiàn)病毒血癥和發(fā)燒，并檢測到高水平的抗ASF病毒特異性抗體和傳播病毒的能力，對生產(chǎn)影響大。通過引入的陰性豬試驗，研究人員發(fā)現(xiàn)慢性ASF病毒感染豬能將ASF傳播給易感豬群，病毒很容易傳播，這可能是由于在豬的呼吸道中存在感染性ASF病毒。Carvalho研究表明，ASF病毒中等毒力株感染后的耐過豬在70 d后仍能通過口咽進行排毒，并有感染能力。

本試驗證明，感染3個月后恢復為無臨床癥狀的豬仍然能夠?qū)SF病毒傳播給抗原檢測為陰性的豬群。一些研究已經(jīng)證明當ASF在當?shù)爻蔀榈胤搅餍行载i病后，亞急性、慢性和亞臨床感染也會發(fā)生，死亡率下降，這可能與獲得性免疫增加有關。Penrith指出，這種癥狀變化后將難以識別，豬群可能表現(xiàn)為發(fā)育遲緩或消瘦，甚至可能出現(xiàn)類似其他疾病的臨床癥狀。Ordas報道，巴西等受影響地區(qū)、伊比利亞半島（1979-1981年）的實地研究揭示新爆發(fā)的疫情分別為3.5%和0.6%，由癥狀剛恢復的血清陽性家豬引起。

3.3 亞臨床感染豬的后續(xù)發(fā)展

目前，多項研究已經(jīng)證明，ASF發(fā)病地區(qū)出現(xiàn)亞急性和慢性病程的病豬數(shù)量在增加，亞臨床感染也會發(fā)生，隨著時間的推移死亡率在下降。Sanchez-Vizcaino證明，ASF發(fā)病地區(qū)也會出現(xiàn)難以識別的感染場，感染可持續(xù)數(shù)月，但無特別明顯的癥狀，甚至可能出現(xiàn)類似豬圓環(huán)病的癥狀，表現(xiàn)為發(fā)育遲緩或消瘦，或類似其他疾病的表現(xiàn)。

4 ?結(jié)論

ASF病毒弱毒株仍有感染力，有的豬天然耐受，但有的豬帶毒不發(fā)病，但能表現(xiàn)感染力，抗體高低與癥狀表現(xiàn)關系不密切，同居豬的ASF病毒抗體產(chǎn)生需要21 d時間，而接種感染豬的抗體產(chǎn)生只需4 d，體溫達到高峰的時間差距達60 d。該試驗證明，人們可以通過加強檢測來辨別豬場的隱性感染，并能進一步降低隱性感染豬形成新的傳染源。