Snail及E-cadherin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其意義

張粉娟，王學(xué)春，李傳偉，董兵衛(wèi)，何會(huì)女，張渭波，代曉強(qiáng)

1.陜西省咸陽市中心醫(yī)院病理科 (咸陽712000)；2.泰山醫(yī)學(xué)院(泰安 271000)；

3.陜西省咸陽市中心醫(yī)院腫瘤科(咸陽 712000)

乳腺癌(Mammary cancer)是威脅女性健康的主要病因，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，屬于最常見的惡性腫瘤之一。全世界每年大約有150萬女性發(fā)生乳腺癌，死于乳腺癌的女性占1/3，它的發(fā)病常與遺傳有關(guān)，并且與年齡存在一定的關(guān)系，尤其多發(fā)于40～60歲之間的女性。早發(fā)現(xiàn)乳腺癌，并且實(shí)施早期治療，無疑是乳腺癌防治的最新發(fā)展方向。

目前，乳腺癌患者已經(jīng)趨于年輕化[1]。E-鈣黏素 (E-cadherin)是近年來研究的較多的一類腫瘤抑制因子,屬于鈣離子所依賴細(xì)胞粘附素家族中主要成員之一，是一類單拱橋的跨膜蛋白，大部分分布于胞漿區(qū)，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞中,是乳腺癌的診斷標(biāo)志。Snail是目前研究乳腺癌轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的重要調(diào)控因子。由于Snail可通過上調(diào)波形蛋白、成纖維細(xì)胞特異蛋白和 Rho 蛋白表達(dá)或下調(diào)鈣粘附蛋白E表達(dá)等途徑導(dǎo)致腫瘤上皮間質(zhì)化并促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生，因而 Snail 高表達(dá)往往意味著腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較大，且患者預(yù)后不良。Snail可以在E-cadherin缺失的腫瘤組織中表達(dá)，這就表明Snail可以作為腫瘤發(fā)生、進(jìn)展過程中的重要因子。在組織中發(fā)現(xiàn)上皮-鈣粘素(E-cadherin)與轉(zhuǎn)錄因子Snail的異常表達(dá)，可以判斷腫瘤的良惡性，還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。所以，本研究擬通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法，檢測(cè)乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者癌組織與癌旁組織中Snail及E-cadherin的表達(dá)，分析Snail及E-cadherin表達(dá)之間的相關(guān)性，為臨床對(duì)乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)行早期準(zhǔn)確診斷、干預(yù)及治療提供重要依據(jù)。

材料與方法

1 研究對(duì)象與樣本分組 將我院55例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者作為研究對(duì)象。所有患者都是乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者，并且所有患者均符合乳腺癌的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，全部患者在手術(shù)之前均未經(jīng)過任何放、化療及乳腺癌的相關(guān)治療。55例患者年齡為23～61歲，平均年齡為42歲，病程1～3年，平均病程(1.6±1.4)年。所有患者的一般資料相比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

2 方法及試劑 對(duì)所有患者復(fù)習(xí)原病理診斷資料，找出病理蠟塊組織，重新切片，每例切片4張，進(jìn)行免疫組化染色。根據(jù)Elston和Ellis乳腺癌組織學(xué)分級(jí)法[2-3]進(jìn)行半定量評(píng)測(cè)分級(jí)。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥聯(lián)合會(huì)合作制定的第7版腫瘤TNM分期[4]對(duì)乳腺癌進(jìn)行分期。組織學(xué)分類按照2003年WHO乳腺腫瘤組織學(xué)分類[5]進(jìn)行分類。免疫組化采用SP法，所有試劑來自邁新生物公司和上海達(dá)克生物公司。

3 實(shí)驗(yàn)評(píng)判結(jié)果及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3.1 實(shí)驗(yàn)評(píng)判結(jié)果:患者間E-cadherin及Snail的表達(dá)各不相同，E-cadherin 表達(dá)的陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞間連接和細(xì)胞膜處，以細(xì)胞膜著色為主。其中陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)>90%為(),50%～90%為(),10%～50%為(+)，<10%為(-)，E-cadherin表達(dá)(+、-)均表示陰性表達(dá)，E-cadherin表達(dá)(、)均表示陽性表達(dá)[6]。Snail主要表達(dá)于細(xì)胞核/漿，按染色強(qiáng)度的深淺分為：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無著色，0分。按著色細(xì)胞百分比分為：一個(gè)視野內(nèi)著色細(xì)胞>76%為4分，51%～75%為3分，11%～50%為2分，1%～10%為1分，陰性0分。兩項(xiàng)得分相乘，滿3分為(+)，4分為()，5分以上為()。(-、+)為Snail陰性表達(dá)，(、)為Snail陽性表達(dá)[7]。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)(χ2)，等級(jí)數(shù)據(jù)應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 E-cadherin及Snail的表達(dá)情況以及相關(guān)性

1.1 E-cadherin及Snail表達(dá)情況：E-cadherin在實(shí)驗(yàn)組中陽性表達(dá)率為58.18%(32/55)，對(duì)照組中陽性表達(dá)率為98.18%(54/55)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(圖1～4)。Snail在實(shí)驗(yàn)組中陽性表達(dá)率為87.27%(48/55)，對(duì)照組中陽性表達(dá)率為12.73%(7/55)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(圖5～8)。

1.2 E-cadherin及Snail的相關(guān)性：由癌旁組織到乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織，E-cadherin的陽性表達(dá)降低，而Snail的陽性表達(dá)增加，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中，Snail的陽性表達(dá)明顯高于E-cadherin，因此E-cadherin和Snail的表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.341，P<0.01)。見表1。

表1 E-cadherin及Snail在對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)

2 E-cadherin和Snail分別與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系

2.1 E-cadherin的表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系:E-cadherin的表達(dá)與患者是否絕經(jīng)、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤大小、ER無關(guān)聯(lián)(P>0.05)，與患者年齡、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織學(xué)分級(jí)、HER-2相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

2.2 Snail的表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系:Snail的表達(dá)與患者年齡、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤大小無關(guān)聯(lián)(P>0.05)，與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織學(xué)分級(jí)、ER、HER-2相關(guān)，且差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表2 E-cadherin的表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系

臨床病理特征分組 E-cadherin[例(%)]-級(jí)、+級(jí)級(jí)、級(jí)(%) χ2值P值年齡(歲)大于35歲 2(3.64)14(25.45) 7.9710.005小于35歲 21(38.18)18(32.73)月經(jīng)情況絕經(jīng)前 12(21.82)19(34.55) 0.2820.595絕經(jīng)后 11(20.00)13(23.64)乳腺癌腫瘤大小(cm)小于5 9(16.36)18(32.73) 1.5690.210大于5 14(25.45)14(25.45)組織學(xué)分級(jí)I級(jí) 8(14.55)2(3.64) 9.4940.009II級(jí) 12(21.82)17(30.91)III級(jí) 3(5.45)13(23.64)ER— 7(12.73)10(18.18) 0.8410.840+ 11(20.00)17(30.91) 3(5.45)4(7.27) 2(3.64)1(1.82)HER-2陽性 2(3.64)15(25.47) 9.1340.001陰性 21(38.18)17(32.73)

表3 Snail的表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系

討 論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移為一種多因素所造成的分階段過程。腫瘤細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移是腫瘤患者死亡的重要因素。超過80%的腫瘤來源于上皮組織，在上皮源性的腫瘤中可以看到細(xì)胞間粘附和細(xì)胞極性的缺失。如用免疫組化法對(duì)頭頸部腫瘤進(jìn)行研究，結(jié)果會(huì)發(fā)現(xiàn)這些腫瘤組織中存在E-cadherin的表達(dá)減少，甚至缺失[8]。

E-cadherin是上皮細(xì)胞表面最重要的細(xì)胞間粘附分子之一，是典型的上皮性腫瘤的形成和浸潤轉(zhuǎn)移的抑制基因。E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞粘附功能的缺失與所有上皮源性腫瘤細(xì)胞的分化、侵襲鄰近組織和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的過程有關(guān)，而且可能在腫瘤的早期發(fā)生發(fā)展階段中產(chǎn)生重要的作用。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesen-chymal transition,EMT)[9-10]可以減弱E-cadherin的細(xì)胞間的黏附，并且增加細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性，使細(xì)胞侵入周圍組織。E-cadherin與乳腺癌諸多生物學(xué)標(biāo)記因子的關(guān)系尚不十分明確[11]，與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)具有一定的相關(guān)性[12]。

Rakha EA等利用免疫組化和組織芯片技術(shù)檢測(cè)了E-cadherin在1665例乳腺侵襲性非小葉癌患者的表達(dá)水平，并且長期臨床隨訪[13]。單因素分析顯示，E-cadherin的表達(dá)與腫塊體積大、組織學(xué)分級(jí)等不良預(yù)后因素有關(guān)系，與雌激素受體表達(dá)陰性和遠(yuǎn)處是否轉(zhuǎn)移存在關(guān)系[14]。這個(gè)觀點(diǎn)在本次實(shí)驗(yàn)中也得到了證實(shí)。

Snail已經(jīng)被證明抑制E-cadherin的表達(dá)，在進(jìn)展過程中觸發(fā)EMT的發(fā)生,并且認(rèn)為對(duì)Snail直接作用的靶基因是E-cadherin。Blanco等[15]分析了乳腺導(dǎo)管癌中的E-cadherin失活的不同機(jī)制，從而提出了Snail在人原位癌中的表達(dá)。EMT在腫瘤細(xì)胞的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起著重要作用，因而成為腫瘤研究中的一個(gè)熱點(diǎn)[16]。EMT的中心環(huán)節(jié)是細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力和細(xì)胞間連接的崩解，其最重要的標(biāo)志是上皮性標(biāo)志物E-cadherin的丟失[17]。有研究表明，在上皮細(xì)胞去分化中，E-cadherin表達(dá)往往下降，而這種下降受轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控[18]，E-cadherin在EMT的過程中具有雙重作用：細(xì)胞的粘附和信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。Snail可能通過抑制E-cadherin的表達(dá)誘發(fā)EMT[19]，從而使上皮間連接破壞，導(dǎo)致癌細(xì)胞間黏附松散，容易脫離原發(fā)灶而發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。復(fù)習(xí)相關(guān)文獻(xiàn)，可知Snail高度表達(dá)于乳腺癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、宮頸癌[20]中。本文研究可提示Snail在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)是升高的，E-cadherin 的表達(dá)是降低的，兩者呈顯著的負(fù)相關(guān)，且二者均與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的病理分級(jí)、HER-2的表達(dá)密切相關(guān)。

綜上所述，Snail 及E-cadherin 的高表達(dá)是患者乳腺浸潤性導(dǎo)管癌發(fā)生、進(jìn)展以及轉(zhuǎn)移的重要生物學(xué)標(biāo)志。Snail 及E-cadherin 的有效檢測(cè)，對(duì)于乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的轉(zhuǎn)移與預(yù)后，具有非常重要的意義，并且安全性較高。