2017-2018年貴州省畢節(jié)市羊小反芻獸疫診斷及血清學監(jiān)測調查

張平 賀志昊 宋德榮 周大榮 彭華

摘要：為切實掌握畢節(jié)市羊小反芻獸疫疫情發(fā)展趨勢，增強小反芻獸疫情預警預報能力，研究對2017-2018年畢節(jié)地區(qū)部分發(fā)病羊場的小反芻獸疫羊只進行臨床及實驗室診斷，同時對縣區(qū)利用春、秋兩季集中監(jiān)測及專項監(jiān)測對羊小反芻獸疫免疫抗體進行血清學監(jiān)測。結果顯示，實驗室利用熒光定量PCR方法檢測更為準確。2017-2018年畢節(jié)市小反芻獸疫免疫抗體陽性率平均達80%以上，總體處于較高水平，各縣區(qū)免疫抗體水平略有差異。研究調查為畢節(jié)市科學、有效防范小反芻獸疫病疫情發(fā)展趨勢提供理論依據(jù)。

關鍵詞：小反芻獸疫;抗體水平;監(jiān)測評估

中圖分類號：S858.26

文獻標識碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.001

0引言

小反芻獸疫（PestedesPetitsRuminants，PPR）是一種急性或者亞急性的接觸性傳染病，潛伏期為3～6d，最長可長21d，山羊發(fā)病時癥狀較綿羊嚴重。該病是由于感染小反芻獸疫病毒（PestedesPetitsRuminantsVirus，PPRV）而導致發(fā)病率和死亡率都較高。病羊主要是發(fā)熱、水樣腹瀉、黑痢，口鼻有粘性、膿性分泌物，口腔黏膜潰瘍、壞死，消瘦。小反芻獸疫首次在我國西藏發(fā)生。目前畢節(jié)已有該疫情發(fā)生，對畢節(jié)市畜牧業(yè)發(fā)展造成極其嚴重的影響。

小反芻獸疫常用的檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和熒光定量RT-PCR方法。研究通過2017-2018年，對畢節(jié)市9個縣（區(qū)）開展小反芻獸疫血清學與實驗室診斷檢測。監(jiān)測結果為掌握畢節(jié)羊群小反芻獸疫免疫接種效果和感染情況，制定小反芻獸疫的防控決策提供科學依據(jù)。

1材料

1.1疫苗與診斷試劑

新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫（Nigeria75/1株）弱毒活疫苗，為政府招標采購疫苗[1]。小反芻獸疫競爭ELISA檢測試劑盒、小反芻獸疫熒光RT-PCR檢測試劑盒，均購自中國動物衛(wèi)生與流行病學中心[2]。

1.2樣品采集與保存

2017-2018年，在畢節(jié)全市范圍內(nèi)，重點對規(guī)模養(yǎng)殖場、活畜交易市場和發(fā)生過小反芻獸疫疫情的區(qū)域采集羊血液、鼻拭子和部分病料樣品。

1.3主要器材

酶標儀（美國伯樂BIO-RADiMark）、洗板機（美國伯樂BIO-RAD1575）、熒光PCR擴增儀（美國伯樂BIO-7500）等。

2方法

2.1臨床癥狀觀察

研究對2017-2018年畢節(jié)市各縣區(qū)發(fā)生的6起小反芻獸疫疫情病例進行現(xiàn)場解剖及臨床診斷。

2.2實驗室RT-PCR檢測

提取病死羊組織臟器或羊鼻腔拭子的RNA，利用熒光定量RT-PCR方法進行病毒核酸檢測[3]。試驗結果成立條件為，陰性對照無Ct值，同時無特定擴增曲線，陽性對照Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴增曲線[4]。待檢樣品Ct值≤30，且出現(xiàn)特定的擴增曲線判為PPRV陽性;待檢樣品30<Ct<37并出現(xiàn)特定擴增曲線判為可疑，需要重新復檢，再擴增后進行檢測結果判定，如仍為可疑，則可判定為陽性;被檢樣品Ct值≥37時，判定為陰性[5-7]。

2.3血清學監(jiān)測

調查研究利用畢節(jié)市春秋防集中監(jiān)測及專項監(jiān)測，對畢節(jié)2017-2018年4300份羊血清進行免疫抗體監(jiān)測。其中商品代養(yǎng)殖場2563份血清、散養(yǎng)戶1737份血清。

3結果與分析

3.1臨床癥狀

畢節(jié)發(fā)生的小反芻獸疫病例均出現(xiàn)精神倦怠，站立不穩(wěn)，眼結膜發(fā)炎并附著有黃色粘稠物，腸系膜出血，水樣腹瀉，部分出現(xiàn)紅色糞便臨床癥狀。見圖1。

3.2實驗室RT-PCR檢測結果

2017-2018年采集鼻拭子和組織，應用RT-PCR檢測PPRV病原。病原學監(jiān)測樣品總數(shù)量為6份，陽性數(shù)3份，陽性率為50%，見圖2。

3.3抗體監(jiān)測結果

2017-2018年連續(xù)2年對畢節(jié)市免疫小反芻獸疫羊的抗體水平進行了監(jiān)測。38個規(guī)模場（戶）55個散養(yǎng)戶開展小反芻獸疫抗體監(jiān)測工作，檢測血清樣品4300份，免疫抗體合格樣品3746份，免疫抗體合格率87.11%。結果顯示，各年份抗體陽性率平均達到80%以上，均已經(jīng)達到國家規(guī)定的70%的標準。

比較規(guī)模場和散養(yǎng)戶免疫后抗體的陽性率，發(fā)現(xiàn)各年度二者之間的差異均不顯著。其中2017年養(yǎng)殖場與散戶的免疫抗體水平低于2018年養(yǎng)殖場與散戶的免疫抗體水平近10個百分點，見圖3，2018年呈上升態(tài)勢。2017年散養(yǎng)戶高于規(guī)模場PPR抗體陽性率近3%，2018年畢節(jié)規(guī)模場和散養(yǎng)戶PPR抗體陽性率基本接近。

比較畢節(jié)市各個縣區(qū)的免疫抗體陽性率，發(fā)現(xiàn)2017-2018年各個縣區(qū)免疫抗體水平都在70%以上，七星關區(qū)PPR抗體水平略有下降，其中威寧縣PPR抗體水平整體高于其他縣，黔西縣PPR抗體水平相對低于其他縣區(qū)10%～26%。總體上小反芻獸疫免疫抗體水平達到農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準。見圖4。

4討論

研究對6例送檢樣品進行熒光定量PCR檢測，其中3例呈現(xiàn)小反芻獸疫陽性，3例呈現(xiàn)陰性。通過對2年的血清學樣品進行監(jiān)測統(tǒng)計分析。結果顯示畢節(jié)本地區(qū)2017年小反芻獸疫免疫抗體水平低于2018年，整體免疫抗體水平達到80%以上，呈現(xiàn)逐年上升趨勢，商品代養(yǎng)殖場抗體水平整體高于散戶抗體水平近10%。另外各縣區(qū)免疫抗體水平參差不齊。

5結束語

PPR在畢節(jié)地區(qū)是一種新傳入的動物疫病，近年由于混合感染疫病的不斷出現(xiàn)，小反芻獸疫疫病已經(jīng)不能簡單的通過臨床癥狀進行診斷，熒光定量PCR檢測是一種準確、有效的診斷方法[8-9]。受于檢測設備的限制，各縣區(qū)實驗室目前還不能進行實驗室診斷，羊只發(fā)生不明原因死亡，采樣送檢，進行實驗室檢測，是確診小反芻獸疫最直接的方式。隨著小反芻獸疫免疫抗體水平逐年上升以及防疫人員免疫操作技能的不段加強，畢節(jié)地區(qū)爆發(fā)大規(guī)模的疫情的風險也隨之降低。畢節(jié)堅持政府主導、社會參與、部門合作、區(qū)域協(xié)作的原則，強化省際間合作，對發(fā)現(xiàn)疫區(qū)運出的羊只，在采取撲殺等措施同時，及時通報相關?。▍^(qū)）獸醫(yī)部門，防止動物疫病跨區(qū)域傳播。

參考文獻

[1]劉永宏，趙麗，曹勝波，等.小反芻獸疫在中國的流行趨勢及應對措施[J].動物醫(yī)學進展，2015，36（1）：110-113.

[2]印春生，支海兵，王樂元，等.小反芻獸疫活疫苗臨床試驗研究[J].中國獸藥雜志，2010，44（7）：1-5.

[3]周子濤.國內(nèi)小反芻獸疫流行現(xiàn)狀及防控對策[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（10）：246.

[4]次仁羅布，西藏阿里地區(qū)小反芻獸疫的流行情況與綜合防控[J].山東畜牧獸醫(yī)，2013（5）：44-45.

[5]周海寧，寧夏羊小反芻獸疫疫情監(jiān)測及防控研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學，2017.

[6] Diallo A. Control of peste des petits ruminants： classical andnew generation vaccines[J]. Developmental Biology，2003，114： 113-119.

[7]貴州安順和寧夏吳忠分別發(fā)生H5N1流感疫情和小反芻獸疫疫情[EB/OL].http：//www.farmer.com.cn/jjpd/xm/slyfk/2014/3/t20140310-945250.

[8]陸則基，王志亮，劉雨田，等.西藏阿里地區(qū)小反芻獸疫流行病學調查研究[J].中國動物檢疫，2008，25（12）：4447.

[9]羅靜，何宏軒.小反芻獸疫病毒的分子生物學特性及其在全球的流行[J].河北師范大學學報（自然科學版），2009，33（4）：543-550.