單核細胞增生李斯特菌檢測技術(shù)是什么

周林

單核細胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范圍當(dāng)中。就目前來看，免疫學(xué)檢測方法和分子學(xué)檢測方法是很多單增李斯特菌檢測方法中使用最頻繁的兩種方法。免疫學(xué)檢測方法具有操作簡便、時間短的特點，然而其非常依賴高特異性的抗體，結(jié)果容易出現(xiàn)失誤，需要對檢測結(jié)果進行詳細判定。和免疫學(xué)檢測法相比，分子學(xué)檢測方法具有靈敏度高、省時省力等特點，然而分子學(xué)檢測方法在使用過程中需要較多的操作經(jīng)驗，同時不能在大批量檢測中應(yīng)用。

一、單核細胞增生李斯特菌概述

（一）生物學(xué)特征

單核細胞增生李斯特菌是一種革蘭陽性短桿菌，其對營養(yǎng)的需求量較少，生長溫度通常最低不能低于2攝氏度，最高不能超過42攝氏度，同時可以在弱酸、弱堿和6.5%NaCl肉湯中得到快速成長，并且能夠形成β-溶血。在其生長過程中還可以發(fā)酵出很多種糖類物質(zhì)，按照O抗原以及H抗原能夠分解成十三中血清型，其中1/2a與4b這兩種類型在致病菌株中的占比最大。

（二）污染源及流行病學(xué)

單核細胞增生李斯特菌是自然界中常見的一種致病菌，抗凍能力非常強，其主要傳播路徑是通過糞-口這種方式進行。健康人糞便中的單核細胞增生李斯特菌攜帶率通常為0.6%至16.0%，然而奶制品、水產(chǎn)品以及家禽中均攜帶相應(yīng)的單核細胞增生李斯特菌。另外，單核細胞增生李斯特菌通過胎盤、黏膜、性以及產(chǎn)道鞥部位都可以進入到體內(nèi)，從而導(dǎo)致感染。單核細胞增生李斯特菌的致病性與其具有的毒作用、宿主的免疫狀況以及年齡具有密不可分的關(guān)系，宿主的細胞免疫可以有效的解除單核細胞增生李斯特菌中存在的病菌。各種免疫力弱的人群都屬于易感人群，比如新生兒、四十歲以上的成人等。健康成人感染后會出現(xiàn)和感冒相似的情況，然而其他免疫力功能較低的人可能會出現(xiàn)更加嚴重的癥狀，乃至?xí)苯铀劳觥?/p>

二、相關(guān)檢測技術(shù)

（一）聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

就目前來看，聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)得到了廣泛的普及與運用。近年來，伴隨著時代的進步，科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，多重聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、多重實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)以及實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)等在這種發(fā)展背景下得到快速發(fā)展。Ryu等人通過使用多重聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)選擇李斯特菌屬的屬特異性基因詳細的檢測了肉制品中分離出來的93株李斯特菌，通過檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)有79株屬于安全的李斯特菌，3株是威氏李斯特菌。CHIANG等人通過相關(guān)研究，使用多種聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對牛奶與肉制品中含有的多種致病菌進行了檢測，如大腸桿菌、金葡等，其靈敏度達到了103至104CFU/ml。邵美麗等人通過運用雙重?zé)晒舛烤酆厦告湻磻?yīng)技術(shù)檢測方式對人工染菌肉樣中的單核細胞增生李斯特菌，檢出濃度最低不能低于102CFU/g。黃偉華，李倫等人論述了運用單核細胞增生李斯特菌的聚合酶鏈反應(yīng)-酶聯(lián)免疫吸附試驗方法，檢測敏感性與以往聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)相比要高出十倍甚至上百倍。

（二）環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)通常采用四條特異性引物辨別靶基因的六個區(qū)域設(shè)計，DNA聚合酶有鏈置換型活性的特點，在65攝氏度恒溫條件下能夠飛速放大核酸的一種技術(shù)，通常在幾十分鐘以內(nèi)就可以實現(xiàn)DNA的放大。黃朱梁等人通過運用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)方法對食品中的單核細胞增生李斯特菌進行檢測，在檢測結(jié)果中可以明確的看出環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)存在較高的特異性，單核細胞增生李斯特菌的檢測不能低于32CFU/ml，能夠在一分鐘之內(nèi)就可以出現(xiàn)放大的反應(yīng)。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)在檢驗期間不需要使用價格較高的設(shè)備和特殊試劑，并且在直接檢測過程中就可以判定反應(yīng)產(chǎn)物。

（三）ELISA

在1971年，Engvail和Perlmann探究出ELISA檢測方法，該方法具有多方面的優(yōu)勢，比如高特異性、高靈敏度等，在多種細菌檢測中得到大量的使用。段霞等人使用雙抗夾心ELISA方法對食品中含有的單核細胞增生李斯特菌進行檢測，通過檢測結(jié)果可以看出，單核細胞增生李斯特菌的純培養(yǎng)液的檢測量不能低于1.7×10 5 CFU/ml。

（四）免疫磁性分離技術(shù)

免疫磁性分離技術(shù)屬于一種磁性顆粒吸附特異性抗體，和目標均特異進行系統(tǒng)整合，進而促使致病菌逐漸的分離，然后濃縮。免疫磁性分離技術(shù)的特異快速分離替代了耗時的增菌培養(yǎng)過程。范龍興等人通過把ELISA、化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)以及磁分離技術(shù)進行系統(tǒng)的整合逐漸形成一種飛速靈敏的食源性致病菌檢測方式，其檢測結(jié)果不能低于104CFU/ml，具有優(yōu)良的特異性，檢測時間控制在三至四小時之間。

結(jié)論

近年來，隨著社會的不斷進步，時代的快速發(fā)展，在科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展的背景下，食源性致病菌檢測技術(shù)的檢測方式主要朝著自動化程度高、方便快捷、特異性較高等方向發(fā)展。就目前來看，在具體實踐中，能夠使用已經(jīng)發(fā)展成熟的有關(guān)檢測方式，提升單核細胞增生李斯特菌的檢測效率，確保檢測結(jié)果的精準性。與此同時，在科學(xué)技術(shù)不斷提升的基礎(chǔ)上，很多檢測手段應(yīng)運而生，多學(xué)科與多技術(shù)的結(jié)合發(fā)展會逐漸成為食源性致病菌檢測技術(shù)未來的發(fā)展方向。