甘藍(lán)型油菜的花期與生育期QTL定位

俎峰 趙凱琴 張?jiān)圃?田正書 劉亞俊 奚俊玉 束正齊 符明聯(lián)

摘要：【目的】對(duì)甘藍(lán)型油菜花期和生育期QTL進(jìn)行定位，為精細(xì)定位和克隆早花基因及開展分子標(biāo)記輔助早熟油菜品種選育提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳詷O早熟甘藍(lán)型油菜G28、甘藍(lán)型油菜H008及以二者為親本構(gòu)建的175個(gè)F1DH株系為材料，利用甘藍(lán)型油菜60K SNP芯片分型技術(shù)繪制高密度遺傳連鎖圖譜，并采用完備復(fù)合區(qū)間作圖法對(duì)2016─2017年度麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下甘藍(lán)型油菜的花期（FT）和生育期（MT）田間調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行QTL掃描分析。【結(jié)果】F1DH株系花期與生育期具有較明顯的超親現(xiàn)象，表明雙親材料控制花期和生育期的位點(diǎn)不同。F1DH株系在麗江生長(zhǎng)環(huán)境下花期與生育期相關(guān)系數(shù)為0.63，在臨滄生長(zhǎng)環(huán)境下二者相關(guān)系數(shù)為0.79，即花期與生育期呈較高的正相關(guān)。利用SNP芯片構(gòu)建的高密度遺傳連鎖圖譜共包含19條連鎖群，7601個(gè)SNPs位點(diǎn)，總長(zhǎng)3838.2 cM。在麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下共檢測(cè)到6個(gè)花期QTL和5個(gè)生育期QTL，分布于A02、A07、C02、C03、C06、C07和C09連鎖群上，可分別解釋2.96%～17.40%和4.98%～11.82%的遺傳變異?；ㄆ赒TL qFTA02-1和qFTC03-2在2生長(zhǎng)個(gè)環(huán)境下均可檢測(cè)到，加性效應(yīng)值相反，其中qFTA02-1具有最高的LOD值（20.43）、貢獻(xiàn)率（17.40%）和加性效應(yīng)值（3.27 d），且與生育期QTL qMTA02-1置信區(qū)間重疊，是最主要的花期主效QTL;qFTC03-2為次要的花期主效QTL。在qFTA02-1置信區(qū)間內(nèi)發(fā)現(xiàn)2個(gè)擬南芥花期調(diào)控關(guān)鍵基因FLC和FY的油菜同源基因拷貝BnaA02g00370D和BnaA02g01670D?！窘Y(jié)論】花期主效QTL qFTA02-1和qFTC03-2可用于分子標(biāo)記輔助選育早熟油菜品種。BnaA02g00370D和BnaA02g01670D可能為qFTA02-1置信區(qū)間內(nèi)控制甘藍(lán)型油菜花期性狀的目標(biāo)基因。

關(guān)鍵詞： 甘藍(lán)型油菜;花期;生育期;QTL定位;SNP芯片

中圖分類號(hào)： S634.303.6 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2019）03-0500-06

0 引言

【研究意義】油菜（Brassica napus）是世界范圍內(nèi)廣泛種植的主要油料作物，也是我國(guó)唯一的冬季油料作物（陳盛等，2017;徐文等，2018）?；ㄆ冢‵lower time，F(xiàn)T）與生育期（Maturity time，MT）高度正相關(guān)是油菜早熟性狀選擇的重要指標(biāo)（Zhao et al.，2005;倪正斌等，2018），但二者作為數(shù)量性狀由多基因控制，且與環(huán)境的互作效應(yīng)顯著（關(guān)周博等，2016;蔡?hào)|芳等，2017），在無(wú)分子標(biāo)記輔助的情況下較難實(shí)現(xiàn)直接選擇。因此，開展油菜花期與生育期的數(shù)量性狀座位（QTL）定位研究，以實(shí)現(xiàn)分子標(biāo)記輔助選擇早熟性狀，對(duì)提高早熟油菜品種選育效率具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】大量研究表明，油菜花期與生育期具有較高的遺傳力，適宜開展QTL定位研究（Zhao et al.，2005;Long et al.，2007;關(guān)周博等，2016;黃吉祥等，2016;姜成紅等，2017）。1995年，F(xiàn)erreira等首次利用甘藍(lán)型油菜DH群體構(gòu)建的RFLP標(biāo)記遺傳連鎖圖譜檢測(cè)花期QTL，在LG9（A09）連鎖群檢測(cè)到1個(gè)在3個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下均穩(wěn)定出現(xiàn)的QTL，貢獻(xiàn)率高達(dá)28%。Zhao等（2005）利用甘藍(lán)型油菜SG-DH群體構(gòu)建的SSR標(biāo)記遺傳連鎖圖譜檢測(cè)花期和成熟期QTL，在3個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下共檢測(cè)到7個(gè)主效QTL，分別位于A01、A02、C01、C02、C04、C06和C09連鎖群上，其中A01、C02和C06連鎖群上的花期QTL與成熟期QTL區(qū)間重疊或一致。Long等（2007）利用甘藍(lán)型油菜TN-DH群體及其衍生的RCF2群體構(gòu)建電泳標(biāo)記遺傳連鎖圖譜，在11個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下累計(jì)檢測(cè)到42個(gè)花期QTL，分布于絕大部分連鎖群上，其中A10和C06連鎖群上的QTL貢獻(xiàn)率最大，不同環(huán)境下可分別解釋26%～52%的遺傳變異，并證實(shí)qFT10-4區(qū)間內(nèi)擬南芥花期關(guān)鍵基因FLC的甘藍(lán)型油菜同源基因拷貝BnFLC10是油菜品種冬、春性分化的關(guān)鍵基因。黃吉祥等（2016）利用分子標(biāo)記加密甘藍(lán)型油菜SG-DH群體構(gòu)建的遺傳連鎖圖譜檢測(cè)9個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下的花期QTL，共檢測(cè)到7個(gè)在3個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下穩(wěn)定出現(xiàn)的花期QTL，QTL加性效應(yīng)值為0.58～3.85 d，累計(jì)解釋遺傳變異的84%，其中位于A02、C02和C06連鎖群上的3個(gè)QTL效應(yīng)值最大?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】雖然前人已針對(duì)油菜花期與生育期開展了大量QTL定位研究，但油菜生長(zhǎng)環(huán)境多為平原或低海拔地區(qū)，至今鮮見(jiàn)有關(guān)高海拔生長(zhǎng)環(huán)境下油菜花期與生育期QTL定位的研究報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】利用甘藍(lán)型油菜60K SNP芯片分型技術(shù)（Raman et al.，2014）繪制F1DH株系群體的高密度遺傳連鎖圖譜，采用完備復(fù)合區(qū)間作圖法對(duì)麗江（海拔1819.5 m）和臨滄（海拔2378.8 m）試驗(yàn)點(diǎn)的F1DH株系群體花期和生育期田間調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行QTL掃描分析，并分析推測(cè)主效QTL位點(diǎn)內(nèi)的候選基因，旨在解析高海拔地區(qū)甘藍(lán)型油菜花期和生育期性狀遺傳規(guī)律，最終實(shí)現(xiàn)花期和生育期性狀主效QTL定位，為今后精細(xì)定位和克隆早花基因及開展分子標(biāo)記輔助早熟油菜品種選育提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試材料為極早熟甘藍(lán)型油菜種質(zhì)G28、早熟甘藍(lán)型油菜種質(zhì)H008及以G28為母本、H008為父本構(gòu)建的175個(gè)F1DH株系，種子由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所油菜中心提供。DNA提取試劑盒DP350購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司;甘藍(lán)型油菜60K SNP芯片及配套試劑（Brassica 60K_Cons_ ParkinAAFC）購(gòu)自美國(guó)Illumina公司;SNP芯片分型試驗(yàn)平臺(tái)購(gòu)自美國(guó)Illumina公司。

1. 2 田間種植及花期和生育期測(cè)定

2016年10月，175份F1DH株系及其親本分別播種于云南省臨滄市博尚鎮(zhèn)勐準(zhǔn)村（東經(jīng)100o03'19"，北緯23o43'03"，海拔1819.50 m）和麗江市玉龍縣黃山鎮(zhèn)長(zhǎng)水村（東經(jīng)100o11'59"、北緯26o51'54"，海拔2378.8 m）2個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)（以下簡(jiǎn)稱臨滄試驗(yàn)點(diǎn)和麗江試驗(yàn)點(diǎn)）。隨機(jī)區(qū)組排列，設(shè)2次重復(fù)。5葉期每行定植10～12株，行距30 cm，株距20 cm，田間管理按照試驗(yàn)點(diǎn)當(dāng)?shù)氐母弋a(chǎn)栽培措施進(jìn)行。2017年4─5月按照各株系成熟度分批收獲。

花期和生育期2個(gè)性狀的測(cè)定方法：初花時(shí)間判定標(biāo)準(zhǔn)為一行材料中30%植株開第一朵花的時(shí)間，播種到該時(shí)間點(diǎn)的間隔記為花期;成熟時(shí)間判定標(biāo)準(zhǔn)為一行材料中70%植株角果呈黃色、籽粒呈黑色的時(shí)間，播種到該時(shí)間點(diǎn)的間隔記為生育期。

1. 3 DNA提取

將175個(gè)F1DH株系及其雙親（G28和H008）種子置于光照培養(yǎng)箱進(jìn)行發(fā)芽，子葉平展時(shí)進(jìn)行單株取樣。采用DNA提取試劑盒提取樣品DNA，并以瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 4 SNP芯片分析

利用華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室油菜研究團(tuán)隊(duì)的SNP芯片分型試驗(yàn)平臺(tái)，參照甘藍(lán)型油菜60K SNP芯片及配套試劑產(chǎn)品說(shuō)明對(duì)供試材料進(jìn)行SNP芯片基因分型試驗(yàn)。

1. 5 遺傳連鎖圖譜構(gòu)建與QTL分析

利用JoinMap 4.0與MSTMap綜合計(jì)算F1DH株系內(nèi)SNP位點(diǎn)間遺傳距離，繪制遺傳連鎖圖譜。利用IciMapping 4.1中的ICIM-ADD模型對(duì)2016─2017年度F1DH株系在臨滄和麗江試驗(yàn)點(diǎn)的花期和生育期2個(gè)性狀田間調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行QTL掃描分析，參數(shù)設(shè)置為Missing Phenotype：Deletion;Step：1.00;LOD值：3.0（Meng et al.，2015）。不同生長(zhǎng)環(huán)境下檢測(cè)到的同一性狀QTL置信區(qū)間（1-LOD）內(nèi)重疊則視為同一QTL，重疊部分為置信區(qū)間。QTL命名采用“q+性狀英文首字母大寫縮寫（花期即FT;生育期即MT）+連鎖群編號(hào)+QTL個(gè)數(shù)”。如甘藍(lán)型油菜第1連鎖群上的第一個(gè)控制花期的QTL命名為qFTA01-1。

1. 6 SNP芯片探針序列BLAST分析

從NCBI網(wǎng)站上下載甘藍(lán)型油菜參考基因組（Darmor-bzh）和CDS序列V4.1版及擬南芥參考基因組序列TAIR10版。利用blast+2.7.1軟件包的makeblastdb命令搭建甘藍(lán)型油菜參考基因組、CDS和擬南芥基因組的本地化數(shù)據(jù)庫(kù)，參數(shù)設(shè)為-hash_index， -parse_seqids和-dbtype nucl。使用blastn命令提交SNP芯片探針序列到本地化數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST分析，參數(shù)設(shè)為-evalue e-18、-num_alignments 1、 -outfmt 6及50個(gè)探針堿基序列中僅允許有1個(gè)堿基錯(cuò)配。最后使用blastdbcmd命令提取基因序列。

2 結(jié)果與分析

2. 1 F1DH株系及其雙親的花期和生育期測(cè)定結(jié)果

175個(gè)F1DH株系及其雙親的花期與生育期測(cè)定結(jié)果如表1所示。雙親材料（G28和H008）在麗江和臨滄試驗(yàn)點(diǎn)的花期分別相差32和28 d，生育期分別相差30和16 d;F1DH株系在這兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的花期最小值間相差29 d，最大值間相差31 d，生育期最小值間相差33 d，最大值間相差17 d?？梢?jiàn)，在麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下，F(xiàn)1DH株系的花期和生育期具有較明顯的超親現(xiàn)象，表明雙親材料控制花期和生育期的位點(diǎn)不同。通過(guò)計(jì)算性狀間相關(guān)系數(shù)可知，F(xiàn)1DH株系在麗江試驗(yàn)點(diǎn)花期與生育期相關(guān)系數(shù)為0.63，在臨滄環(huán)境下二者相關(guān)系數(shù)為0.79，表明花期與生育期呈較高的正相關(guān)。

2. 2 遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及花期和生育期QTL分析結(jié)果

由175個(gè)F1DH株系及其雙親的SNP芯片基因分型試驗(yàn)結(jié)果可知，雙親材料（G28和H008）間有20183個(gè)SNPs位點(diǎn)。對(duì)175份DH株系SNP數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估后，利用JoinMap 4.0與MSTmap構(gòu)建甘藍(lán)型油菜高密度遺傳連鎖圖譜。該遺傳連鎖圖譜包含19條連鎖群，7601個(gè)SNPs位點(diǎn)，總長(zhǎng)3838.2 cM。

利用IciMapping 4.1中的ICIM-ADD模型在2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境（麗江和臨滄）下共檢測(cè)到8個(gè)花期QTL，其中麗江試驗(yàn)點(diǎn)6個(gè)，臨滄試驗(yàn)點(diǎn)2個(gè)，可解釋2.96%～17.40%（即貢獻(xiàn)率，下同）的遺傳變異;共檢測(cè)到5個(gè)生育期QTL，其中麗江試驗(yàn)點(diǎn)4個(gè)，臨滄試驗(yàn)點(diǎn)1個(gè)，可解釋4.98%～11.82%的遺傳變異。8個(gè)花期QTL分別分布在A02（3個(gè)）、C03（3個(gè)）、C07（1個(gè)）和C09（1個(gè)）連鎖群上，其中，分布在A02連鎖群上的3個(gè)花期QTL中有2個(gè)QTL的置信區(qū)間完全一致，合并為1個(gè)QTL，分布在C03連鎖群上的3個(gè)花期OTL中有2個(gè)花期QTL的置信區(qū)間重疊，合并為1個(gè)QTL，故最終獲得6個(gè)花期QTL，分別命名為qFTA02-1、qFTA02-2、qFTC03-2、qFTC03-1、qFTC07-1和qFTC09-1。5個(gè)生育期QTL分別分布在A02、A07、C02、C03和C06連鎖群上，命名為qMTA02-1、qMTA07-1、qMTC02-1、qMTC03-1和qMTC06-1。值得關(guān)注的是位于A02連鎖群上的qFTA02-1置信區(qū)間與qMTA02-1相重疊（表2）。綜上所述，在麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下均檢測(cè)到2個(gè)穩(wěn)定出現(xiàn)的花期QTL即qFTA02-1和qFTC03-2，加性效應(yīng)值相反，但未檢測(cè)到穩(wěn)定出現(xiàn)的生育期QTL，其中qFTA02-1具有最高的LOD值、加性效應(yīng)值和貢獻(xiàn)率，且置信區(qū)間與qMTA02-1相重疊，推測(cè)qFTA02-1是最主要的花期主效QTL，qFTC03-2為次要的花期主效QTL。

2. 3 花期主效QTL qFTA02-1的物理圖譜映射及候選基因分析結(jié)果

由表2可知，qFTA02-1在麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下均可檢測(cè)到，其LOD值最高可達(dá)20.43，可解釋高達(dá)17.40%的遺傳變異，加性效應(yīng)值也高達(dá)3.27 d，且與qMTA02-1置信區(qū)間重疊，是花期性狀最主效QTL。提交qFTA02-1兩側(cè)SNP標(biāo)記（Bn-A02-p1264906和Bn-A02-p3344176）探針序列到本地化數(shù)據(jù)庫(kù)，BLAST比對(duì)分析結(jié)果顯示，qFTA02-1置信區(qū)間位于參考基因組A02染色體0.11～0.84 M（表3）。依據(jù)參考基因組注釋信息發(fā)現(xiàn)，該置信區(qū)間內(nèi)存在260個(gè)基因，將基因序列提交至本地化擬南芥基因數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)BnaA02g00370D和BnaA02g01670D分別與擬南芥花期控制基因FLC（AT5G10140）和FY（AT5G13480）高度同源，序列相似度高達(dá)89.61%和89.62%，將二者命名為BnFLC-A2和BnFY-A2，可作為花期QTL qFTA02-1置信區(qū)間內(nèi)的候選基因進(jìn)行深入研究。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)在麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下雙親材料（G28和H008）花期分別相差32和28 d，生育期分別相差30和16 d;F1DH株系在這兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)花期相差29～31 d，生育期相差17～33 d，其原因可能是麗江與臨滄的自然環(huán)境差異較大，與黃吉祥等（2016）的研究結(jié)果相似。黃吉祥等（2016）在9個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下對(duì)油菜F1DH株系及其親本的花期進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)晚熟親本2001年在德國(guó)生長(zhǎng)環(huán)境下的花期與2013年在我國(guó)杭州生長(zhǎng)環(huán)境下的花期相差59 d，早熟親本2001年在德國(guó)生長(zhǎng)環(huán)境下的花期與2007年在我國(guó)杭州生長(zhǎng)環(huán)境下的花期相差69 d。由此可見(jiàn)，雖然大量研究證實(shí)植物的花期和生育期遺傳力較高（Zhao et al.，2005;Long et al.，2007），但二者作為數(shù)量性狀仍受自然環(huán)境的嚴(yán)重影響。

QTL定位是結(jié)合性狀表型數(shù)據(jù)，利用分子標(biāo)記技術(shù)將控制數(shù)量性狀的基因或基因簇作為一個(gè)整體定位到連鎖群上，并估計(jì)其遺傳效應(yīng)，結(jié)果準(zhǔn)確性主要由性狀的遺傳復(fù)雜度與性狀表型數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性共同決定（李慧慧等，2010;任照彬等，2018）。本研究在麗江和臨滄2個(gè)生長(zhǎng)環(huán)境下檢測(cè)到2個(gè)穩(wěn)定出現(xiàn)的花期QTL（qFTA02-1和qFTC03-2），但未檢測(cè)到穩(wěn)定出現(xiàn)的生育期QTL。這可能與田間測(cè)定生育期的標(biāo)準(zhǔn)（70%植株角果皮呈黃色、籽粒呈黑色）易受主觀因素影響，而花期判定標(biāo)準(zhǔn)（30%植株開出第一朵花）易分辨，受主觀因素影響較小。此外，雖然花期與生育期高度正相關(guān)（Zhao et al.，2005;關(guān)周博等，2016），是早熟性狀選擇的重要指標(biāo)，但初花過(guò)后應(yīng)還有其他基因參與植株的生殖生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程，與花期相比，生育期遺傳更復(fù)雜。因此，在今后QTL定位研究中需盡可能分解性狀，量化性狀判定指標(biāo)，從而降低性狀的遺傳復(fù)雜度，減少主觀因素影響，提高性狀判定的準(zhǔn)確度，有助于檢測(cè)出穩(wěn)定的QTL。

對(duì)模式植物擬南芥功能基因組學(xué)研究較深入，基因注釋信息詳盡，能為同為十字花科的油菜相關(guān)研究提供豐富參考信息（Parkin et al.，2005;王釗輝等，2017）。甘藍(lán)型油菜參考基因組序列的公布有助于研究人員在QTL定位后通過(guò)BLAST比對(duì)查詢QTL置信區(qū)間內(nèi)擬南芥基因的油菜同源基因拷貝。Xu等（2016）利用SNP芯片技術(shù)對(duì)523個(gè)甘藍(lán)型油菜品系進(jìn)行花期性狀全基因組關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果檢測(cè)到41個(gè)與油菜花期顯著關(guān)聯(lián)的SNP，提取最顯著關(guān)聯(lián)SNP位點(diǎn)兩側(cè)的油菜基因組序列到擬南芥基因組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)距離該SNP位點(diǎn)13 kb的位置存在一個(gè)重要的擬南芥光周期控制基因CONSTANS（CO）的同源基因拷貝BnaC09g41990D。本研究利用上述相同的研究思路，在qFTA02-1置信區(qū)間內(nèi)發(fā)現(xiàn)2個(gè)控制擬南芥花期基因（FLC和FY）的油菜同源基因拷貝BnaA02g00370D和BnaA02g01670D，命名為BnFLC-A2與BnFY-A2。FLC作為春化途徑中的關(guān)鍵基因，編碼MADS-box基因家族轉(zhuǎn)錄因子，負(fù)向調(diào)控開花性狀，晚花植株低溫春化前FLC基因高效表達(dá)會(huì)抑制植株開花，春化后FLC基因甲基化，表達(dá)水平下降，植株開花（Sanda and Amasino 1996;Helliwell et al.，2006）。該基因在大白菜和甘藍(lán)型油菜上的同源基因拷貝功能與擬南芥FLC基因功能相似，均能調(diào)控植株花期（Kim et al.，2007;Hou et al.，2012）。FY是花期自主調(diào)控途徑的重要基因，編碼mRNA編輯因子，對(duì)FLC基因具有雙向調(diào)控功能，通過(guò)抑制或誘導(dǎo)FLC基因表達(dá)以調(diào)控開花時(shí)間（Feng and Michaels，2011）。但目前鮮見(jiàn)有關(guān)FY基因油菜同源基因拷貝的研究報(bào)道。推測(cè)FLC和FY基因的油菜同源基因拷貝BnaA02g00370D和BnaA02g01670D均為qFTA02-1置信區(qū)間內(nèi)控制甘藍(lán)型油菜花期性狀的目標(biāo)基因，需進(jìn)行深入研究。

4 結(jié)論

花期主效QTL qFTA02-1和qFTC03-2可用于分子標(biāo)記輔助選育早熟油菜品種。BnaA02g00370D和BnaA02g01670D可能為qFTA02-1置信區(qū)間內(nèi)控制甘藍(lán)型油菜花期性狀的目標(biāo)基因。

參考文獻(xiàn)：

蔡?hào)|芳，張書芬，何俊平，朱家成，王建平，文雁成，曹金華，趙磊，王東國(guó). 2017. 甘藍(lán)型油菜抗旱機(jī)制及育種研究進(jìn)展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，46（3）：8-12. [Cai D F，Zhang S F，He J P，Zhu J C，Wang J P，Wen Y C，Cao J H，Zhao L，Wang D G. 2017. Research progress on drought resistance mechanism and breeding in rapeseed（Brassica napus L.）[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，46（3）：8-12.]

陳盛，王寧寧，王玉康，陳松，曹維，李明，朱克明，彭琦，王政，譚小力. 2017. 一種快速高效篩選甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)化植株的方法[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，33（5）：982-985. [Chen S，Wang N N，Wang Y K，Chen S，Cao W，Li M，Zhu K M，Peng Q，Wang Z，Tan X L. 2017. A rapid and efficient approach to screening transformed plants of Brassica napus[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，33（5）：982-985.]

關(guān)周博，董育紅，趙小光，韋世豪，鄭磊，張耀文，田建華，趙衛(wèi)國(guó). 2016. 甘藍(lán)型油菜生育期性狀的遺傳研究[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，32（5）：28-32. [Guan Z B，Dong Y H，Zhao X G，Wei S H，Zheng L，Zhang Y W，Tian J H，Zhao W G. 2016. Genetic investigation on traits related to growth petiod in Brassica napus L[J]. Acta Agriculturae Shanghai，32（5）：28-32.]

黃吉祥，熊化鑫，潘兵，倪西源，張曉玉，趙堅(jiān)義. 2016. 油菜開花期QTL定位及與粒重的遺傳關(guān)聯(lián)性[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，49（16）：3073-3083. [Huang J X，Xiong H X，Pan B，Ni X Y，Zhang X Y，Zhao J Y. 2016. Mapping QTL of flowering time and their genetic relationships with seed weight in Brassica napus[J]. Scientia Agricultura Sinica，49（16）：3073-3083.]

姜成紅，耿鑫鑫，魏文輝，姜慧芳. 2017. 甘藍(lán)型油菜株高QTL定位及主效QTL區(qū)間候選基因預(yù)測(cè)[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，46（8）：27-31. [Jiang C H，Geng X X，Wei W H，Jiang H F. 2017. QTL mapping of plant height and prediction of candidate genes in major QTL interval of Brassica napus[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，46（8）：27-31.]

李慧慧，張魯燕，王建康. 2010. 數(shù)量性狀基因定位研究中若干常見(jiàn)問(wèn)題的分析與解答[J]. 作物學(xué)報(bào)，36（6）：918-931. [Li H H，Zhang L Y，Wang J K. 2010. Analysis and answers to frequently asked questions in quantitative trait locous mapping[J]. Acta Agronomica Sinica，36（6）：918-931.]

倪正斌，王陳燕，孫雪輝，吳昌庚，孫紅芹，萬(wàn)林生，嚴(yán)國(guó)紅. 2018. 甘藍(lán)型油菜主要農(nóng)藝性狀相關(guān)性及主成分分析[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，30（3）：7-10. [Ni Z B，Wang C Y，Sun X H，Wu C G，Sun H Q，Wan L S，Yan G H. 2018. Correlation and principal component analyses of main agronomic traits in Brassica napus[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，30（3）：7-10.]

任照彬，王會(huì)濤，豆丹丹，任真真，柳華峰，庫(kù)麗霞，陳彥惠. 2018. 玉米葉高點(diǎn)長(zhǎng)等葉型性狀QTL定位及上位性效應(yīng)分析[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，52（2）：157-162. [Ren Z B，Wang H T，Dou D D，Ren Z Z ，Liu H F，Ku L X，Chen Y H. 2018. QTL mapping and epistatic effect analysis of high point long and other leaf shape related traits in maize[J]. Journal of Henan Agricultural University，52（2）：157-162.]

王釗輝，石超男，楊天嘯，薛亞?wèn)|，孫虎威，唐貴良，張戰(zhàn)輝. 2017. AtPHO2的CRISPR/Cas9靶向敲除及其在擬南芥中功能分析[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，51（4）：554-560. [Wang Z H，Shi C N，Yang T X，Xue Y D，Sun H W，Tang G L，Zhang Z H. 2017. Gene knock out and functional analysis of AtPHO2 by CRISPR/Cas9-induced mutagenesis[J]. Journal of Henan Agricultural University，51（4）：554-560.]

徐文，安素妨，王艷，賈琳琳，魯?shù)さ?，張瑩瑩，劉建豐，李保全. 2018. 基于RNA-seq技術(shù)的甘藍(lán)型油菜新轉(zhuǎn)錄本的鑒定[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，47（4）：38-42. [Xu W，An S F，Wang Y， Jia L L，Lu D D，Zhang Y Y，Liu J F，Li B Q. 2018. Identification of novel transcripts of Brasscia napus by RNA-seq[J]. Journal of Henan Agricultural Scien-ces，47（4）：38-42.]

Feng W，Michaels S D. 2011. Dual roles for FY in the regulation of FLC[J]. Plant Signaling & Behavior，6（5）：703-705.

Ferreira M E，Satagopan J，Yandell B S，Williams P H，Osborn T C. 1995. Mapping loci controlling vernalization requirement and flowering time in Brassica napus[J]. Theoretical Applied Genetics，90（5）：727-732.

Helliwell C A，Wood C C，Robertson M，James Peacock W，Dennis E S. 2006. The Arabidopsis FLC protein interacts directly in vivo with SOC1 and FT chromatin and is part of a high-molecular-weight protein complex[J]. Plant Journal，46（2）：183-192.

Hou J N，Long Y，Raman H，Zou X X，Wang J，Dai S T，Xiao Q Q，Li C，F(xiàn)an L J，Liu B，Meng J L. 2012. A tourist-like MITE insertion in the upstream region of the BnFLC.A10 gene is associated with vernalization requirement in rapeseed（Brassica napus L.）[J]. BMC Plant Biology，12：238.

Kim S Y，Park B S，Kwon S J，Kim J，Lim M H，Park Y D，Kim D Y，Suh S C，Jin Y M，Ahn J H，Lee Y H. 2007. Delayed flowering time in Arabidopsis and Brassica rapa by the overexpression of FLOWERING LOCUS C（FLC） homologs isolated from Chinese cabbage（Brassica rapa L. ssp. pekinensis）[J]. Plant Cell Reports，26（3）：327-336.

Long Y，Shi J，Qiu D，Li R，Zhang C，Wang J，Hou J，Zhao J，Shi L，Park B S，Choi S R，Lim Y P，Meng J. 2007. Flo-wering time quantitative trait Loci analysis of oilseed brassica in multiple environments and genomewide alignment with Arabidopsis[J]. Genetics，177（4）：2433-2444.

Meng L，Li H，Zhang L，Wang J. 2015. QTL IciMapping. Integrated software for genetic linkage map construction and quantitative trait locus mapping in biparental populations[J]. The Crop Journal，3（3）：269-283.

Parkin I A，Gulden S M，Sharpe A G，Lukens L，Trick M，Osborn T C，Lydiate D J. 2005. Segmental structure of the Brassica napus genome based on comparative analysis with Arabidopsis thaliana[J]. Genetics，171（2）：765-781.

Raman H，Dalton-Morgan J，Diffey S，Raman R，Alamery S，Edwards D，Batley J. 2014. SNP markers-based map construction and genome-wide linkage analysis in Brassica napus[J]. Plant Biotechnology Journal，12（7）：851-860.

Sanda S L，Amasino R M. 1996. Interaction of FLC and late-flowering mutations in Arabidopsis thaliana[J]. Molecular and General Genetics，251（1）：69-74.

Xu L P，Hu K N，Zhang Z Q，Guan C Y，Chen S，Hua W，Li J N，Wen J，Yi B，Shen J X，Ma C Z，Tu J X，F(xiàn)u T D. 2016. Genome-wide association study reveals the genetic architecture of flowering time in rapeseed（Brassica napus L.）[J]. DNA Research，23（1）：43-52.

Zhao J Y，Becker H C，Ding H D，Zhang Y F，Zhang D Q，Ecke W. 2005. QTL of three agronomically important traits and their interactions with environment in a Euro-pean×Chinese rapeseed population[J]. Acta Genetica Sinica，32（9）：969-978.

（責(zé)任編輯 陳 燕）