通關(guān)藤注射液UPLC測定綠原酸含量方法學(xué)研究

胡茂玉 高丹丹 鄭岳

摘要：UPLC測定綠原酸的方法與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度均較HPLC更高，它縮短了分析時(shí)間，同時(shí)減少了溶劑用量降低了分析成本。為測定通關(guān)藤注射液綠原酸含量提供了新的檢查方法。

關(guān)鍵詞：綠原酸；含量；通關(guān)藤注射液

綠原酸具有保護(hù)心血管、降糖、降脂、抗菌、抗病毒、抗白血病、抗誘變、抗癌等藥理作用[1]，但在體內(nèi)能被蛋白質(zhì)滅活。與咖啡酸相似，口服或腹腔注射時(shí)，可提高大鼠的中樞興奮性。可增加大鼠及小鼠的小腸蠕動(dòng)和大鼠子宮的張力。有利膽作用，能增進(jìn)大鼠的膽汁分泌。對人有致敏作用，吸入含有本品的植物塵埃后，可發(fā)生氣喘、皮炎等[2]。

1實(shí)驗(yàn)材料：

1.1儀器設(shè)備：超高效液相色譜儀（沃特世科技（上海）有限公司）、電子天平（梅特勒多利多）。

1.2試劑：甲醇、磷酸、高純水、乙腈

2綠原酸含量UPLC測定方法學(xué)研究

2.1色譜條件

色譜條件：流動(dòng)相比例乙腈：0.05%磷酸溶液=7：93；流速：0.50mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：3.0uL。

2.2方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1專屬性。

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成80μg/ml的綠原酸對照品溶液。再分別精密移取空白溶劑50%甲醇溶液、綠原酸對照品溶液和通關(guān)藤注射液3μl注入液相色譜儀，按照“2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件進(jìn)樣。

合格標(biāo)準(zhǔn)：溶劑無干擾，綠原酸峰與相鄰峰的分離度不得低于1.5

檢測結(jié)果：空白溶劑在主峰位置無干擾，綠原酸峰與相鄰峰的分離度為1.54，專屬性符合要求。

2.2.2重復(fù)性

檢測方法：取同一批通關(guān)藤注射液成品6份，分別按“2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD。

合格標(biāo)準(zhǔn)：重復(fù)性RSD小于等于2.0%。

檢測結(jié)果：重復(fù)性RSD為1.0%，在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說明重復(fù)性符合規(guī)定。

2.2.3線性

檢測方法：取綠原酸對照品分別配制成20.54μg/ml、61.26μg/ml、82.16μg/ml、102.70μg/ml、143.78μg/ml、205.40μg/ml、287.56μg/ml的系列溶液，按“2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件進(jìn)樣，記錄峰面積。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

合格標(biāo)準(zhǔn)：線性相關(guān)系數(shù)r≥0.999

檢測結(jié)果：從上述可以得出相關(guān)系數(shù)為0.9998，大于目標(biāo)值0.999，說明樣品在20.54～287.56ug/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)r為0.9997，在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說明線性關(guān)系符合規(guī)定在配制的濃度20.54ug/mL-287.56ug/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好地線性。

2.2.4中間精密度

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成79.3、79.4μg/ml和78.5、81.2μg/ml的綠原酸對照品溶液。由兩名分析人員按“2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件，分別測定同一批通關(guān)藤注射液6份平行樣，計(jì)算出綠原酸含量及RSD%。

合格標(biāo)準(zhǔn)：中間精密度RSD≤2.0%

檢測結(jié)果：中間精密度RSD為0.7%，在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說明中間精密度符合規(guī)定。

2.2.5加樣回收率

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成79.4、79.3μg/ml的綠原酸對照品溶液。再精密稱取綠原酸對照品20.54mg至50ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得綠原酸對照品儲(chǔ)備液。

合格標(biāo)準(zhǔn)：加樣回收率均在98%-102%范圍內(nèi)，且結(jié)果的RSD≤2.0%。

檢測結(jié)果：加樣回收率99.7%，RSD%=1.4%在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說明回收率符合規(guī)定

2.2.6溶液穩(wěn)定性

檢測方法：取通關(guān)藤注射液，分別于0、1、2、4、8、12、18、24h時(shí)，按“2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD%。

合格標(biāo)準(zhǔn)：RSD%≤2.0%

檢測結(jié)果如表1所示：

由上表可以看出其結(jié)果的RSD為0.7%，小于目標(biāo)值2.0%，因此溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7耐用性

檢測方法：以流動(dòng)相比例、流速、柱溫為本試驗(yàn)的試驗(yàn)因素，分別記作A、B、C，進(jìn)行三因素正交試驗(yàn)，各因素均取三個(gè)水平。

合格標(biāo)準(zhǔn)：每批RSD%≤2.0%

檢測結(jié)果：3批通關(guān)藤注射液綠原酸含量的RSD分別為0.5%、1.0%、0.8%，均小于目標(biāo)值2.0%，因此耐用性符合規(guī)定。

2.2.8方法對比

檢測方法：精密稱取綠原酸對照品適量，配制成79.4μg/ml、79.3μg/ml的綠原酸對照品溶液。取6批已知綠原酸含量的通關(guān)藤注射液，按按“2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算綠原酸含量與HPLC法測定的結(jié)果比較。

合格標(biāo)準(zhǔn)：F檢驗(yàn)≤7.15，T檢驗(yàn)≤2.228

檢驗(yàn)結(jié)果：用1表示UPLC法測定結(jié)果，并以1測定數(shù)據(jù)為準(zhǔn)，2表示HPLC法測定結(jié)果，結(jié)果評定：UPLC法與HPLC法測定數(shù)據(jù)無顯著性差異。

3結(jié)論

本次方法學(xué)研究建立了UPLC測定綠原酸的方法。超高效液相色譜儀的儀器管路比HPLC更細(xì)，更易堵塞，因此檢驗(yàn)中用的試劑為默克得甲醇和默克的乙腈，水為屈臣氏的蒸餾水。對照品溶液以及供試品溶液均用0.22um的濾頭過濾后進(jìn)樣。

參考文獻(xiàn)：

[1]嚴(yán)永旺，肖蘭，周旭，等。綠原酸的藥理作用及藥用研發(fā)對策[J].中國藥房，2017，（19）：143-146

[2]李恒華，羅超利，等。綠原酸的致敏作用研究[J].中國藥房，2015，（13）：1766-1769.

（作者單位：南京圣和藥業(yè)股份有限公司1

南京正大天晴制藥有限公司2）

作者簡介：

胡茂玉（1990—），女，江蘇南京人，助理工程師，專業(yè)領(lǐng)域：藥品檢驗(yàn)與質(zhì)量控制。

高丹丹（1988—），女，江蘇南京人，助理工程師，專業(yè)領(lǐng)域：藥品檢驗(yàn)與質(zhì)量控制。

鄭岳（1992—），女，寧夏石嘴山人，助理工程師，專業(yè)領(lǐng)域：藥品檢驗(yàn)與質(zhì)量控制。