中藥飲片黃芩表里關(guān)系的研究

孫景 于浩楠 唐莎莎

摘要 目的：研究黃芩中藥外觀性狀與內(nèi)在成分的相關(guān)性。方法：飲片的質(zhì)量取決于傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)，如外觀，顏色，質(zhì)地，大小和氣味，再通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定飲片中黃芩苷的含量判定飲片質(zhì)量，比較2種方法：常規(guī)經(jīng)驗(yàn)鑒定的判斷結(jié)果和HPLC測(cè)定結(jié)果的一致性。結(jié)果：常規(guī)經(jīng)驗(yàn)鑒定的判斷和HPLC測(cè)定結(jié)果相同。結(jié)論：利用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，識(shí)別中藥黃芩質(zhì)量的方法既方便又可靠。

關(guān)鍵詞 黃芩;傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別;高效液相色譜法;表里關(guān)系;飲片

Abstract Objective：To study the relationship of external properties and internal components of Radix Scutellariae.Methods：The quality of decoction pieces was determined by traditional experience though the appearance，color，texture，size，smell and so on.Then the content of baicalin was determined by high performance liquid chromatography（HPLC），which also determined the quality of decoction pieces.The 2 methods were compared to find the consistency of results from traditional experience identification and HLPC.Results：There was conformance in the metheds of both traditional experience identification and HPLC.Conclusion：Traditional experience identification is convenient and reliable for determination of the quality of Radix Scutellariae.

Key Words Radix Scutellariae; Traditional experience identification; HPLC; Relationship of exterior and interior; Decoction pieces

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.08.015

黃芩根入于藥物，具有治療下焦?jié)駸?，清除痛腫疔毒的作用，能解除胎動(dòng)不安、胎漏下血、防止流產(chǎn)。主治肺內(nèi)郁熱、肺氣失宣等癥，濕熱腹瀉，發(fā)熱，煩躁干渴，黃疸，熱淋，瘡瘍腫脹，雙目赤紅，胎動(dòng)不安等。《神農(nóng)本草經(jīng)》將其記錄，并把黃芩列為中品。蘇頌曰：“今川蜀河?xùn)|（今山西）、陜西近郡皆有之，苗長(zhǎng)尺余，莖干粗如筋，葉從地四面作叢生，類(lèi)紫草，高一尺許，亦有獨(dú)莖者，葉細(xì)長(zhǎng)，青色，兩兩相對(duì)。再參照“潞州黃芩”（今山西長(zhǎng)治縣）圖看來(lái)，山西、山東、陜西的黃芩和“耀州黃芩”（今陜西境）、“潞州黃芩”都可能是黃芩，與現(xiàn)實(shí)主流商品來(lái)源相符合。

2010版《中華人民共和國(guó)藥典》黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根[1]。春、秋二季采挖，將泥和砂礫去除，選擇向陽(yáng)、通風(fēng)、干燥處晾曬，撞下的根尖和細(xì)側(cè)根單獨(dú)收藏，曬干。野生黃芩外形與圓錐相似，整個(gè)植株呈現(xiàn)扭曲狀，長(zhǎng)8～25 cm，直徑1～3 cm。外表顯棕黃色或深黃色，有不稠密的疣狀細(xì)小根痕，上部略有粗糙，有扭曲的縱皺紋或不規(guī)則的網(wǎng)紋，下部有順紋和小細(xì)皺紋。質(zhì)地十分堅(jiān)硬并且脆，易被將其折斷，折斷后的斷面顯黃色，中心為紅棕色;老根中心呈現(xiàn)干枯狀或腐朽狀或中空狀，顏色為暗棕色或黑棕色。氣微，味苦。栽培品與野生品種比較細(xì)長(zhǎng)，大多數(shù)有分枝。外表皮顯淺黃棕色，外皮緊貼，縱皺紋較細(xì)膩。斷面黃色或淺黃色，質(zhì)地與角質(zhì)類(lèi)似。味微苦[2-4]。但是現(xiàn)今黃芩野生枯芩價(jià)格高，含量較栽培品低，故本文研究只針對(duì)栽培品。黃芩飲片含黃芩苷（C21H18O11）不得低于8.0%。傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別與HPLC測(cè)定這2個(gè)不同試驗(yàn)的結(jié)果比較可發(fā)現(xiàn)，2種檢測(cè)結(jié)果一致，由此可得出傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)中藥鑒別方法具有可靠性、便捷性，在日常驗(yàn)收中藥材的工作中可采用此方法，使其驗(yàn)收工作更加快速、可靠、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AG-135電子天平0.01 mg（瑞士梅特勒電子天平AG135）;Waters2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）;超聲清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司，型號(hào)：SK3300LH）;AL-204電子天平0.1 mg（梅特勒-托利多儀器有限公司）;流水式粉碎機(jī)（中國(guó)瑞安市環(huán)球藥械廠，型號(hào)：DYQ-188）;Direct-QTM5超純水儀（MilliPore）;可控溫型電熱套（山東甄城華魯電熱儀器廠，型號(hào)：KDM型）。

1.2 分析樣品 黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-201016，中國(guó)食品藥品檢定研究院）;黃芩15批（批號(hào)分別為：131103-1、131112-1、131120-1、131124-1、131129-1、140205-1、140214-1、140302-1、140316-1、140327-1、141010-1、141022-1、141104-1、141128-1、141207-1）來(lái)自新奇康藥業(yè)股份有限公司提供;甲醇、乙腈均為由美國(guó)Fisher試劑公司提供的色譜純;其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別 黃芩驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)1）顏色棕黃色為5分，淡黃色3分，黃綠色1分;2）直徑1～0.8 cm為5分，0.8～0.4 cm為3分，0.4～0.2 cm為1分;3）斷面顏色顯現(xiàn)為棕黃色為5分，斷面顯現(xiàn)為淡黃色3分、黃綠色1分;4）非藥用部位為1分。10%以上判為不合格，非藥用部位過(guò)多為劣藥既為不合格;5）0～10分為不合格，11～15分為合格[5-7]。黃芩15批樣品由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部李延升主任中藥師通過(guò)觀察黃芩藥材表面的色澤和質(zhì)地，以及斷面面色澤、斷面的品質(zhì)鑒別了中藥飲片的質(zhì)量?jī)?yōu)劣，綜合分析得出其中4批黃芩藥材（批號(hào)分別為：131120-1、140214-1、140302-1、140327-1）為不合格藥材。見(jiàn)表1。

2.2 HPLC法測(cè)定藥材含量[8-10]

2.2.1 色譜條件 黃芩苷：高效液相色譜法，參照《中華人民共和國(guó)藥典》。系統(tǒng)適宜性與色譜條件測(cè)試：填料選自十八烷基硅烷鍵合硅膠;甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定280 nm。黃芩苷峰的理論塔板數(shù)不應(yīng)小于2 500。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 在60 ℃減壓干燥4 h，得到一定量的黃芩苷對(duì)照品，通過(guò)精密稱(chēng)重，加入甲醇（色譜純），制成每1 mL含120 μg的溶液，即可得到對(duì)照品溶液。

2.2.3 樣品溶液的制備 取約0.3 g樣品粉末（過(guò)篩3），準(zhǔn)確稱(chēng)重之后，加40 mL 70%乙醇，稱(chēng)重，加熱回流3 h，在室內(nèi)冷卻過(guò)后再次稱(chēng)重，若重量減少，則應(yīng)補(bǔ)至回流前的重量，搖勻，濾過(guò)，將得到的濾液轉(zhuǎn)至100 mL量瓶中，用少量乙醇（70%）洗滌容器，并且用少量乙醇（70%）溶解殘?jiān)?，洗液濾過(guò)后置入同一量瓶中，加乙醇（70%）定容至校準(zhǔn)線，并搖勻。準(zhǔn)確量取1 mL置10 mL量瓶中，將甲醇加至定容刻度后搖晃均勻，即可得到對(duì)照品溶液。

2.2.4 檢測(cè)方法 精密量取10 μL對(duì)照品溶液及10 μL供試品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下檢測(cè)，可得結(jié)果。本樣品黃芩苷（C21H18O11）的含量不得少于8.0%。

2.2.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 精密吸取相同供試品的溶液，每2 h，可進(jìn)樣品1次，每次進(jìn)樣品10 μL，連續(xù)性的考察12 h。結(jié)果得黃芩苷RSD=1.34%（n=5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 線性關(guān)系考察 依次精密量取“2.2.1”項(xiàng)下黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液各2、4、6、8、10 mL加入到10 mL量瓶中，并選擇試劑甲醇精密定容至刻度并且將其搖勻，此時(shí)可得到一系列黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。依次進(jìn)樣，記錄色譜圖1，橫坐標(biāo)對(duì)應(yīng)對(duì)照溶液濃度（C，μg/mL），縱坐標(biāo)對(duì)應(yīng)峰面積（A），作圖，得黃芩苷的回歸方程分別為：Y=3.559 8×10-5X-6.443 1（r=0.999 9），結(jié)果可以表明，在24～120 μg黃芩苷范圍內(nèi)，黃芩苷及其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7 中間精密度試驗(yàn) 選擇“2.2.1”項(xiàng)下相同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，連續(xù)5次進(jìn)樣，測(cè)定。黃芩苷峰面積的RSD=1.06%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣，依2.2.1項(xiàng)下方法準(zhǔn)備樣品溶液，平行制備5份，并進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果黃芩苷RSD=1.71%（n=5）。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 精密吸取已知含量的樣品9份，每份均為1 mL，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品，依法測(cè)定并計(jì)算回收率結(jié)果測(cè)得的黃芩苷平均回收率為99.34%。見(jiàn)表2。取“2.2”項(xiàng)下確定測(cè)試溶液的已知含量，并添加不同量的黃芩苷參比溶液，準(zhǔn)備成高濃度、中濃度和低濃度的各3份樣品，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算其回收率。見(jiàn)表2。

2.2.10 樣品測(cè)定結(jié)果 根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版，黃芩的含量測(cè)定方法，分別測(cè)定上述15批黃芩的黃芩苷含量，確定藥材是否符合藥用標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果4批（批號(hào)分別為：131120-1、140214-1、140327-1、141022-1、141104-1）不合格。見(jiàn)表3。

15批黃芩中顯示，其中有4批黃芩屬于未達(dá)標(biāo)藥品，測(cè)定結(jié)果顯示均為黃芩中的黃芩苷含量較低，未達(dá)到《中華人民共和國(guó)藥典》中所記載黃芩中黃芩苷的含量要求。而這4批被檢測(cè)判定為不合格的藥材批次與定性鑒別判定不合格的4批藥材批次吻合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，在平時(shí)工作中對(duì)于中藥飲片的驗(yàn)收可以利用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別的可靠性和準(zhǔn)確性來(lái)進(jìn)行判定是否合格。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2.3.1 2種鑒別方法的比較 將高效液相色譜法的結(jié)果與傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別結(jié)果的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，響應(yīng)面統(tǒng)計(jì)公式用于用于擬合內(nèi)容方程。見(jiàn)表4。

2.3.2 利用經(jīng)驗(yàn)擬合黃芩苷含量方程 Y=-0.057 376+0.009*表面顏色+0.003 717 1*直徑+0.015 084 9*斷面顏色+0.056 403 4*非藥用部位;R2=0.645 545，R2S=0.503 763，F(xiàn)=4.553 1，P=0.023 7。結(jié)果表明，采用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別黃芩質(zhì)量與借助現(xiàn)代儀器鑒別黃芩質(zhì)量具有較好的相關(guān)性。

3 討論

通過(guò)對(duì)藥材進(jìn)行含量測(cè)定和定性鑒別2種不同的方法的比較，被檢測(cè)和鑒別的15批黃芩藥材的質(zhì)量合格與否，說(shuō)明含量測(cè)定與定性鑒別在中藥材質(zhì)量判定方面存在表里關(guān)系。黃芩從外表顏色看主要棕黃色。黃芩粗細(xì)主要會(huì)影響黃芩苷，黃芩粗黃芩苷合格，太細(xì)不容易合格。黃芩色澤為棕黃色容易合格，太細(xì)顏色為淡黃色不易合格。因此，批號(hào)黃芩131120-1、140214-1、140302-1、140327-1的黃芩直徑較小顏色淡黃色，黃芩不合格，從而初步印證了黃芩質(zhì)量的表里關(guān)系。

現(xiàn)今，許多部門(mén)選擇借助電子鼻、電子眼和利用味覺(jué)傳感器等采集的數(shù)據(jù)來(lái)研究中藥材和飲片的形態(tài)特征與內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性[4]，然而，中藥材和飲片由礦物藥、植物藥和動(dòng)物藥構(gòu)成，使用電子儀器檢測(cè)中藥材質(zhì)量也處于摸索階段，并且儀器價(jià)格較高，容易使其失去效能。因此，需要傳承傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)來(lái)鑒別中藥材質(zhì)量是可靠、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的，該方法可用于日常中藥的驗(yàn)收。

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（2018-11-26收稿 責(zé)任編輯：王明）