培元通腦膠囊對(duì)CI大鼠工作記憶及海馬內(nèi)谷氨酸及其受體表達(dá)的影響

白晶　高永紅　高穎

摘要 目的：探討培元通腦膠囊對(duì)腦缺血大鼠工作記憶行為及海馬區(qū)谷氨酸（Glu）含量、N-甲基-D-天冬氨酸受體2B（NMDA Receptor 2B，NR2B）的影響。方法：將52只雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組和培元通腦組，每組均13只。模型組、尼莫地平組和培元通腦組均將雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎制備大鼠腦缺血模型。尼莫地平組和培元通腦組每日分別按體質(zhì)量給予相應(yīng)的藥物灌胃共治療4周。采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠的工作記憶功能;尼氏染色法觀察大鼠海馬組織尼氏體表達(dá)情況;高效液相色譜法檢測(cè)海馬區(qū)Glu含量變化，Westernblot法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)NR2B蛋白表達(dá)。結(jié)果：Morris水迷宮工作記憶逃避潛伏期假手術(shù)組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P>0.05，第1天與第4天比較P<0.05）;模型組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P>0.05，第1天與第4天比較P<0.05）;尼莫地平組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P>0.05，第1天與第4天比較P<0.05）;培元通腦組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P<0.05，第1天與第4天比較P<0.01）。海馬內(nèi)谷氨酸含量假手術(shù)組與模型組比較（P<0.05），模型組與培元通腦組比較P<0.05。NMDA2B受體蛋白表達(dá)比較假手術(shù)組與模型組、尼莫地平組、培元通腦組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），模型組與尼莫地平組比較（P<0.05）與培元通腦組比較（P<0.01）。結(jié)論：培元通腦膠囊能改善腦缺血大鼠的工作記憶能力，保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞，其機(jī)制可能與上調(diào)海馬區(qū)Glu、NR2B表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 培元通腦膠囊;腦缺血;工作記憶;谷氨酸;N-甲基-D-天冬氨酸受體2B

Effects of Peiyuan Tongnao Capsules on Working Memory，Glu in Hippocampus and Expression of Its Receptor in Rats with Cerebral Ischemia

Bai Jing，Gao Yonghong，Gao Ying

（Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Mdedicine，Beijing 100700，China）

Abstract Objective：To explore the effects of Peiyuan Tongnao（PYTN）Capsules on working memory，content of Glu in hippocampus and NMDA Receptor 2B（NR2B）in rats with cerebral ischemia（CI）.Methods：A total of 52 male SD rats were randomly divided into sham operation group（n=13），model group（n=13），nimodipine group（n=13）and PTNY group（n=13）.The latter 3 groups were performed with bilateral carotid artery ligation.The nimodipine group and PTNY group were given corresponding drugs daily by gavage for 4 weeks according to body weight.The working memory of the rats was was tested by Morris water maze.The expression of Nissl body in hippocampus was observed by Nissl staining.Determination of Glu in hippocampus was conducted by High Performance Liquid Chromatography.The expression level of NR2B was determined by Western blot.Results：Morris water maze working memory escape latency：the sham operation group（DAY 1 versus DAY 2，DAY 1 versus DAY 3，P>0.05; DAY 1 versus DAY 4，P<0.05）; the model group（DAY 1 versus DAY 2，DAY 1 versus DAY 3，P>0.05，DAY 1 versus DAY 4，P<0.05）; the nimodipine group（DAY 1 versus DAY 2，DAY 1 versus DAY 3，P>0.05，DAY 1 versus DAY 4，P<0.05）; the PYTN group（DAY 1 versus DAY 2，P>0.05，DAY 1 versus DAY 3，DAY 1 versus DAY 4，P<0.05）.The content of Glu in hippocampus：the sham operation group was significantly different from the model group（P<0.05）; the model group was significantly different from the PYTN group（P<0.05）.The expression of NR2B：the sham group was significantly different from the model group，the nimodipine group and the PYTN group（P<0.01）; the model group was significantly different from the nimodipine group（P<0.05）; the model group was significantly different from the PYTN group（P<0.01）.Conclusion：PYTN Capsules were helpful for improving working memory and protecting neurons in rats with cerebral ischemia，whose mechanism may associate with increasing Glu in hippocampus and the expression of NR2B in hippocampus.

Key Words Peiyuan Tongnao Capsules; Cerebral ischemia; Working memory; Glu; NMDA receptor 2B

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.09.012

腦組織的存活和發(fā)揮功能依賴于血液的持續(xù)流動(dòng)，血液為其提供能量、氧氣并帶走代謝廢物[1-2]，頸顱血管是腦組織血液運(yùn)行的通道，因此，血液本身及頸顱血管病變都可引起腦組織損傷性疾病，頸動(dòng)脈狹窄可引起部分腦組織供血不足，物質(zhì)交換受阻引起腦組織萎縮甚至壞死，進(jìn)而出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙[3-4]，不僅降低患者生命質(zhì)量，而且顯著縮短卒中患者的生存時(shí)間，給家庭及社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，已經(jīng)成為導(dǎo)致年齡相關(guān)的認(rèn)知障礙和癡呆第二常見原因[5]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，氣血不榮，腦髓失充，腦需要?dú)庋蛞翰粩嗟某漯B(yǎng)、滋潤(rùn)，腦髓失養(yǎng)，則不能發(fā)揮統(tǒng)領(lǐng)官骸的功能[6]。腎為封藏之本，藏精主骨生髓，髓通于腦?！澳I充于腦”的觀點(diǎn)認(rèn)為腎能生髓并生精，腦能統(tǒng)髓，髓上充于腦。腎的精微物質(zhì)充養(yǎng)于腦，為腦發(fā)揮功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，若腎中精氣匱乏，無精充盈，其腦空虛，久之則出現(xiàn)腦老化[7]。

培元通腦膠囊配方秉承道法自然的原理，在多種交互影響的因素和復(fù)雜的穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)中取類比象，從腎的臟腑理論出發(fā)，認(rèn)為腎中精氣是機(jī)體生命活動(dòng)的根本，對(duì)機(jī)體各種生理活動(dòng)均起著極為重要的作用，故治內(nèi)功能性質(zhì)的病要先看腎之虛實(shí)，扶助腎中正氣，佐以祛瘀熄風(fēng)通絡(luò)之品，可既病減輕損傷，又可預(yù)防在先，防止傳變。課題組應(yīng)用培元通腦膠囊膠囊益腎填精，熄風(fēng)通絡(luò)的藥理作用治療腦缺血大鼠，觀察其對(duì)于腦缺血大鼠認(rèn)知功能的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康SD大鼠52只，雄性，白色，平均體質(zhì)量（250±10）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)[SCXK（京）2012-0006]，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障實(shí)驗(yàn)室（中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教育部暨北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室），溫度22～24 ℃，濕度50%～70%。自由進(jìn)食、進(jìn)水，12 h明暗交替光照。

1.1.2 藥物 培元通腦膠囊（河南羚銳制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1709192），組方：制何首烏429 g、熟地黃286 g、天冬286 g、醋龜甲46 g、鹿茸23 g、酒蓯蓉114 g、肉桂24 g、赤芍49 g、全蝎48 g、燙水蛭96 g、地龍49 g、炒山楂142 g、茯苓48 g、炙甘草29 g，由上述藥物制成干浸膏粉，灌胃時(shí)加水配制成溶液。尼莫地平片[拜耳（中國(guó)）有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20003010]，使用藥品研磨器磨成粉末配制成溶液。

1.1.3 試劑與儀器 試劑：NMDA2B受體抗體[艾博抗（上海）貿(mào)易有限公司，批號(hào)Anti-NMDAR2B抗體（ab65783）];儀器：Agilent-1200高效液相色譜儀，儀器型號(hào)：agilent-1200型，制造商USA Agilent Technologies。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字，進(jìn)行隨機(jī)分組。將52只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽性對(duì)照組（尼莫地平組）、培元通腦組，每組13只。模型制備：雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法，10%水合氯醛（3 mL/kg體質(zhì)量）腹腔注射麻醉大鼠。將大鼠固定在白色泡沫墊上，以利于保持大鼠體溫。將麻醉后大鼠仰臥于手術(shù)臺(tái)上，取頸部正中切口，沿胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)緣分離肌肉及筋膜，找到頸動(dòng)脈鞘，將右側(cè)頸總動(dòng)脈與迷走神經(jīng)輕輕剝離后應(yīng)用6～0號(hào)滅菌線束將頸總動(dòng)脈行兩端結(jié)扎并剪斷，左側(cè)頸總動(dòng)脈行同樣手術(shù)操作后，縫合頸部切口。模型組、尼莫地平組、培元通腦組均進(jìn)行相同頸部血管結(jié)扎手術(shù)，假手術(shù)組僅鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈無其他操作即縫合頸部切口。頸部手術(shù)結(jié)束后各組動(dòng)物均腹腔注射青霉素注射液1 mL防術(shù)后感染。

1.2.2 給藥方法 依據(jù)陳奇主編《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[10]按照體表面積換算，大鼠的尼莫地平灌胃劑量為8.1 mg/kg，培元通腦膠囊灌胃劑量為0.486 g/kg。每天上午定時(shí)灌胃給藥（假手術(shù)模型組給予相應(yīng)體質(zhì)量的飲用水灌胃，尼莫地平組及培元通腦組均給予相應(yīng)劑量的藥物）以外，飼養(yǎng)期間動(dòng)物自由攝食和飲水。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 行為學(xué)測(cè)試（Morris水迷宮） 飼養(yǎng)動(dòng)物至8周時(shí)進(jìn)行Morris水迷宮定位航行訓(xùn)練[8-9]，2 d后進(jìn)行工作記憶測(cè)試。1）環(huán)境適應(yīng)：訓(xùn)練開始前24 h，讓大鼠在沒有站臺(tái)的水迷宮內(nèi)游泳3 min以適應(yīng)環(huán)境;2）訓(xùn)練期：將大鼠背向水池從每個(gè)象限的中點(diǎn)放入迷宮中，隨機(jī)變換每個(gè)試次的入水象限，站臺(tái)的位置保持不變（第Ⅲ象限）。大鼠在60 s內(nèi)找到站臺(tái)后在上面停留5 s，如果大鼠在60 s內(nèi)沒有找到站臺(tái)，則將其引導(dǎo)至站臺(tái)并停留5 s。大鼠每天接受非站臺(tái)象限入水訓(xùn)練，共2個(gè)區(qū)塊訓(xùn)練（每個(gè)區(qū)塊包括3個(gè)試次）。每個(gè)試次之間的間隔為60 s，2個(gè)block之間的間隔為3 min，共訓(xùn)練3 d。使大鼠學(xué)會(huì)尋找站臺(tái)的一般規(guī)則;3）工作記憶：參考記憶訓(xùn)練2 d后進(jìn)行。在參考記憶訓(xùn)練階段站臺(tái)位于東北象限位置，第1天變換站臺(tái)位置至西南象限位置，每天更換站臺(tái)象限，每天訓(xùn)練3次，即保證除站臺(tái)所在象限以外的象限均入水1次。入水象限更換次序：第1天-西南象限，第2天-西北象限，第3天-東南象限，第4天-東北象限。

1.2.3.2 尼氏染色 每組其中隨機(jī)選取5例大鼠取全腦，將海馬部位切片制作蠟塊，進(jìn)行尼氏染色，觀察海馬CA1、CA3、DG區(qū)尼氏小體表達(dá)情況。

1.2.3.3 生物檢測(cè) 谷氨酸含量測(cè)定：海馬樣品稱重、離心10 min，取上清液，應(yīng)用美國(guó)Agilent 1200高效液相色譜儀（Agilent Chem Station工作站），色譜柱：ZORBAX Eclipse AAA（4.6 mm×150 mm，5 μm）;檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)光波長(zhǎng)λex=340 nm，發(fā)射光波長(zhǎng)λem=450 nm。柱溫40 ℃，進(jìn)樣量15 μL;Westernblot分析：取大鼠右側(cè)海馬組織，樣本蛋白提取：將組織樣品研磨破碎加入適量RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑，磷酸酶抑制劑）進(jìn)行重懸，冰上裂解30 min進(jìn)行蛋白提取，轉(zhuǎn)膜方法：PVDF膜轉(zhuǎn)移至電轉(zhuǎn)液中，按照電流300 mA恒流轉(zhuǎn)膜;稀釋，培養(yǎng)，一抗洗膜，二抗孵育：用Western blot封閉液稀釋二抗（NMDA2B受體抗體，Abcam/ab65783），羊抗兔-HRP 1∶5 000稀釋，TBST洗膜，條帶灰度值采用Quantity One v.4.6.2軟件進(jìn)行讀取。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較應(yīng)用方差分析，組內(nèi)比較應(yīng)用T檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后斷頭腦，取左側(cè)海馬高效液相色譜法測(cè)定谷氨酸含量，右側(cè)海馬進(jìn)行westerblot測(cè)定NMDA2B受體測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 水迷宮第1、2、3、4天逃避潛伏期比較 Morris水迷宮：假手術(shù)組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P>0.05，第1天與第4天比較P<0.05）;模型組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P>0.05，第1天與第4天比較P<0.05）;尼莫地平組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P>0.05，第1天與第4天比較P<0.05）;培元通腦組大鼠（第1天與第2天比較、第1天與第3天比較P<0.05，第1天與第4天比較P<0.01）。

各組大鼠在適應(yīng)訓(xùn)練后均能完成空間學(xué)習(xí)記憶任務(wù)，但是，模型組大鼠在完成工作記憶任務(wù)尋找站臺(tái)的潛伏期在第2天和第3天明顯長(zhǎng)于培元通腦組大鼠，第4天2組干預(yù)組與模型組大鼠尋找站臺(tái)的潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 尼氏染色結(jié)果 在尼氏小體表達(dá)方面，模型組圖片中顯示Nissl小體的數(shù)量減少甚至消失，細(xì)胞皺縮，核固縮，神經(jīng)細(xì)胞排列松散，染色變淺、模糊不清，而尼莫地平組、培元通腦組Nissl小體較多，細(xì)胞排列較緊密，染色清楚。

2.3 各組海馬組織內(nèi)谷氨酸含量比較 假手術(shù)組谷氨酸含量測(cè)定高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與尼莫地平組、培元通腦組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組與尼莫地平組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.056>0.05），模型組與培元通腦組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.045<0.05），尼莫地平組與培元通腦組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各組海馬組織內(nèi)NMDA2B受體相對(duì)灰度值比較：各組海馬組織內(nèi)NMDA2B受體蛋白表達(dá)比較模型組與尼莫地平組比較（P=0.036<0.05），與培元通腦組比較（P=0.005<0.01），尼莫地平組與培元通腦組比較（P=0.404>0.05）。見表2。

3 討論

缺血性腦血管病是世界范圍內(nèi)致殘致死的主要原因，高危非致殘性缺血性腦血管事件（High Risk Non-disabling Ischemic Cerebrovascular Events，HR-NICE）所致認(rèn)知障礙癥狀隱匿，不易察覺，影響患者精細(xì)工作能力及社會(huì)活動(dòng)，導(dǎo)致患者生命質(zhì)量下降，已引起醫(yī)學(xué)界高度重視[11]。我們應(yīng)用完全永久阻斷頸動(dòng)脈系統(tǒng)供血的大鼠模型[12-13]，能夠模擬前腦缺血性損傷[14]，手術(shù)前后經(jīng)激光散斑血流成像儀PeriCam PSI觀察，假手術(shù)組術(shù)前術(shù)后腦灌注量無明顯變化，其他3組術(shù)后腦血流灌注均有顯著下降。

本研究病機(jī)上立論于缺血導(dǎo)致毒損腦絡(luò)，治療上以扶正護(hù)腦為治療原則，腦的功能主要是靈機(jī)記憶、認(rèn)知思考等高級(jí)神經(jīng)思維活動(dòng)，這些功能依賴于腦絡(luò)的氣血滲灌，王永炎院士等[15-16]提出腦內(nèi)血絡(luò)、氣絡(luò)之概念，認(rèn)為腦氣絡(luò)、血絡(luò)無法正常推動(dòng)、調(diào)節(jié)、統(tǒng)攝血液運(yùn)行則腦失所養(yǎng)、毒邪內(nèi)生，而腎為一身陰陽之根本，腎陽不足溫煦蒸騰無力，無以溫脾，脾不健運(yùn)聚濕生痰濁;腎陰不足無以化生精血，致生化乏源、髓?？仗摗⑸駲C(jī)失用（《內(nèi)經(jīng)精義》《醫(yī)林改錯(cuò)》），培元通腦膠囊全方配伍有益腎填精、息風(fēng)通絡(luò)的作用，該方以制何首烏補(bǔ)肝益腎養(yǎng)血祛風(fēng)、熟地黃滋陰補(bǔ)血、生精益髓共為君藥，滋養(yǎng)肝腎、填補(bǔ)精血、補(bǔ)益腎元;臣藥龜甲、天冬共助君藥養(yǎng)陰增液、可治液枯內(nèi)動(dòng)之虛風(fēng)平息風(fēng)陽，鹿茸、酒蓯蓉共壯腎陽，以助君藥陪補(bǔ)下元;佐藥全蝎、地龍、赤芍、水蛭共奏疏通脈絡(luò)、祛瘀血作用，為佐助之品，肉桂佐助鹿茸肉蓯蓉溫腎壯陽，同時(shí)引火歸元防止虛陽浮越，山楂、茯苓防補(bǔ)藥之滋膩礙胃，影響脾胃;使藥炙甘草調(diào)和諸藥[15]。

本研究觀察大鼠在水迷宮中完成工作記憶任務(wù)的過程，發(fā)現(xiàn)在行為學(xué)方面各組大鼠在基礎(chǔ)訓(xùn)練完成后基本熟悉迷宮環(huán)境，但是模型組大鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)。本研究發(fā)現(xiàn)培元通腦組大鼠較快適應(yīng)了站臺(tái)變化，因此該組大鼠能在第2天試驗(yàn)時(shí)在首次發(fā)現(xiàn)站臺(tái)之后即可短時(shí)存儲(chǔ)站臺(tái)位置標(biāo)記，能夠使用較短的路徑到達(dá)平臺(tái)、逃避潛伏期縮短，而模型組大鼠則在第4天整體逃避潛伏期才改善，腎為作強(qiáng)之官伎巧出焉，水迷宮工作記憶的改善體現(xiàn)了培元通腦益腎填精的作用。

在尼氏小體表達(dá)方面，模型組圖片中明顯顯示Nissl小體的數(shù)量減少甚至消失，細(xì)胞皺縮，神經(jīng)細(xì)胞排列松散，而假手術(shù)組、尼莫地平組、培元通腦組Nissl小體較多，Nissl小體是神經(jīng)細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所，經(jīng)過改善缺血的治療能夠保護(hù)Nissl小體，使其發(fā)揮功能為神經(jīng)活動(dòng)提供必要的蛋白質(zhì)。

腦的高度復(fù)雜性組構(gòu)是由于存在大量互相交流的細(xì)胞，它們可以編碼和在一定的距離內(nèi)傳導(dǎo)信息，這種信息在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的運(yùn)動(dòng)，而突觸在其中為關(guān)鍵結(jié)構(gòu)[16]，在突觸的信息傳遞中不同的神經(jīng)遞質(zhì)有著不同的作用，谷氨酸及其受體不論在形態(tài)學(xué)或功能學(xué)的研究都有大量報(bào)道[17]，谷氨酸NMDA受體興奮能夠增強(qiáng)突觸傳遞的效能，該現(xiàn)象被稱為長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（Long-term Potentiation，LTP），海馬的興奮性突觸傳遞由谷氨酸受體（NMDA受體）介導(dǎo)[18]，水迷宮發(fā)明者Richard Morris等人給大鼠注射NMDA受體阻斷劑，觀察到大鼠不能記住水下平臺(tái)的位置，為NMDA受體依賴性過程在記憶中的作用提供證據(jù)。功能性NMDA受體需由NR2亞單位與NR1共同形成四聚體，NR2B C-末端多種蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)為NR2B的磷酸化和去磷酸化的基礎(chǔ)，而蛋白可逆磷酸化是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)到過程的共同機(jī)制[19]，因此，本研究選擇進(jìn)行谷氨酸含量及NMDA receptor 2B（NR2B）為觀察對(duì)象。

研究中觀察到各組大鼠海馬內(nèi)谷氨酸含量比較：假手術(shù)組谷氨酸含量測(cè)定高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與尼莫地平組、培元通腦組比較無差異，模型組與尼莫地平組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組與培元通腦組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尼莫地平組與培元通腦組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;NMDA2B受體蛋白表達(dá)比較假手術(shù)組與模型組、尼莫地平組、培元通腦組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組與尼莫地平組比較（P<0.05）與培元通腦組比較（P<0.01），尼莫地平組與培元通腦組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。谷氨酸作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，在本研究中經(jīng)過培元通腦膠囊的治療，其在海馬內(nèi)含量較模型組含量升高，尼莫地平組表現(xiàn)平平，但是與培元通腦組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是NR2B表達(dá)觀察組優(yōu)于模型組，培元通腦組和尼莫地平組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

因此培元通腦膠囊全方君臣佐使配伍能夠達(dá)到改善神經(jīng)元代謝的功能，息風(fēng)通絡(luò)作用能改善血流，使精微物質(zhì)上輸于腦，同時(shí)改善腦的脈絡(luò)使其循環(huán)廢物順利排出，藥物的作用機(jī)制可能通過上調(diào)腦缺血大鼠海馬神經(jīng)元谷氨酸含量及NR2B蛋白表達(dá)，改善缺血大鼠在Morris水迷宮的表現(xiàn)，體現(xiàn)了益腎填精、腎氣充盛進(jìn)而筋骨強(qiáng)健，動(dòng)作敏捷，本研究觀察到培元通腦膠囊對(duì)腦缺血大鼠工作記憶、神經(jīng)遞質(zhì)及受體均有影響。

研究中發(fā)現(xiàn)，培元通腦組與尼莫地平組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，首先我們考慮兩者有比較類似的作用，都能改善微循環(huán)，保護(hù)神經(jīng)元;其次，條件限制使得本研究觀察例數(shù)有限，觀察周期較短，未能更好更全面的發(fā)揮藥物的作用，以上不足將在我們今后的研究中改良。

參考文獻(xiàn)

[1]Daulatzai MA.Cerebral hypoperfusion and glucose hypometabolism：Key pathophysiological modulators promote neurodegeneration，cognitive impairment，and Alzheimer′s disease[J].J Neurosci Res，2017，95（4）：943-972.

[2]Nelson AR，Sweeney MD，Sagare AP，et al.Neurovascular dysfunction and neurodegeneration in dementia and Alzheimer′s disease[J].Biochim Biophys Acta，2016，1862（5）：887-900.

[3]鄭義，蘆鉞，程瑞年.低劑量CT腦灌注及SPECT在頸動(dòng)脈狹窄性短暫性腦缺血發(fā)作的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備，2016，13（8）：125-128，129.

[4]Kalaria R N，Akinyemi R，Ihara M.Stroke injury，cognitive impairment and vascular dementia ☆[J].Biochimica Et Biophysica Acta，2016，1862（5）：915-925.

[5]Kalaria RN.Neuropathological diagnosis of vascular cognitive impairment and vascular dementia with implications for Alzheimer′s disease[J].Acta Neuropathol，2016，131（5）：659-85.

[6]鮑遠(yuǎn)程.中醫(yī)腦病的歷史沿革及其辨證論治研究[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2012，24（11）：1029-1034.

[7]王米渠.試論“腎通于腦”的信息神經(jīng)觀[J].長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，13（2）：2-3.

[8]Morris RG，Garrud P，Rawlins JN，et al.Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions[J].Nature，1982，297（5868）：681-683.

[9]Vorhees CV，Williams MT.Morris water maze：procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory[J].Nat Protoc，2006，1（2）：848-858.

[10]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：205-207.

[11]Vorhees CV，Williams MT.Morris water maze：procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory[J].Nat Protoc，2006，1（2）：848-858.

[12]Gooch J，Wilcock DM.Animal Models of Vascular Cognitive Impairment and Dementia （VCID）[J].Cell Mol Neurobiol，2016，36（2）：233-239.

[13]Jiwa NS，Garrard P，Hainsworth AH.Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment：a systematic review[J].J Neurochem，2010，115（4）：814-828.

[14]Yang Y，Kimura-Ohba S，Thompson J，et al.Rodent Models of Vascular Cognitive Impairment[J].Transl Stroke Res，2016，7（5）：407-414.

[15]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2015年版.一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：1467-1468.

[16]章靜波.格氏解剖學(xué)（第39版）翻譯出版[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，2（7）：784.

[17]Martyn AC，De Jaeger X，Magalhes AC，et al.Elimination of the vesicular acetylcholine transporter in the forebrain causes hyperactivity and deficits in spatial memory and long-term potentiation[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2012，109（43）：17651-17656.

[18]貝爾，康納斯，帕拉迪索，等.神經(jīng)科學(xué)：探索腦[M].北京：高等教育出版社，2004：137-138.

[19]王謐，姚志彬.NMDA受體2B亞型（NR2B）研究的分子生物學(xué)進(jìn)展[J].解剖學(xué)研究，2000，22（2）：131-135.

（2018-09-10收稿 責(zé)任編輯：王明）