黑杞一號鮮果和干果的酚類物質(zhì)研究

王琴，毛金梅，劉鳳蘭，王建友，李勇，韓宏偉，蔣江照

1(新疆林業(yè)科學(xué)院，經(jīng)濟(jì)林研究所，新疆 烏魯木齊，830000) 2(新疆林業(yè)科學(xué)院，科技推廣處，新疆 烏魯木齊，830000)

黑果枸杞(LyciumruthenicumMurr.)為我國新疆、青海、甘肅、寧夏等省主要分布的落葉多棘刺灌木[1-2]。它廣泛應(yīng)用于傳統(tǒng)民族醫(yī)藥學(xué)，在《晶珠本草》中[3]，黑果枸杞又稱“旁瑪”，用于治療心臟病、月經(jīng)不調(diào)等疾病。黑果枸杞中富含水溶性色素花色苷。由于花色苷在不同pH條件下分子構(gòu)型不同，顏色也隨之發(fā)生變化。在酸性條件下花色苷顯紅色，堿性條件下則呈藍(lán)色[4-5]。因此，用不同的水浸泡黑果枸杞，會呈現(xiàn)出不同的顏色。作為一種新興的時尚茶飲，黑果枸杞泡茶不僅顏色靈動炫美，更因其富含具有抗氧化的功能性成分多酚而健康保健，廣受消費(fèi)者青睞。黑果枸杞傳統(tǒng)的干燥方法為自然陰干。新疆光照充足、晝夜溫差大、干旱少雨，極適于黑果枸杞栽培，現(xiàn)為全國重要的黑果枸杞產(chǎn)區(qū)。黑杞一號是新疆現(xiàn)唯一通過自治區(qū)審核認(rèn)定的大果、豐產(chǎn)型黑果枸杞品種。目前，針對黑杞一號制干前后酚類物質(zhì)的變化分析尚未見報道。本文以黑杞一號鮮果和自然陰干法制得的干果為研究對象，對其總酚、單寧、總花色苷、單體花色苷和非花色苷單體酚類物質(zhì)，進(jìn)行測定分析，以期為黑杞一號的深加工提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黑杞一號：采于新疆巴州尉犁縣墩闊坦鄉(xiāng)瓊庫勒村黑杞一號示范推廣基地。于果實(shí)成熟期，采集無病蟲害、果實(shí)完整的黑杞一號鮮果。用于測定的黑杞一號鮮果，由裝滿干冰的泡沫盒運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，后置于-80 ℃ 超低溫冰箱準(zhǔn)備樣品測定。黑杞一號干果采用自然陰干法制干，粉碎后直接測定。

甲醇、HCl、福林-肖卡試劑、Na2CO3、甲基纖維素、NaNO2、AlCl3、NaOH、KCl、醋酸鈉、甲酸、乙腈等(分析純)，均購自天津市博迪化工有限公司；甲醇、甲酸、乙腈、花色苷標(biāo)準(zhǔn)物(色譜純)，美國Sigma公司與美國Fluka公司。

AUW220D電子天平，日本島津；UV-1800分光光度計，日本島津；5804R低溫冷凍離心機(jī)，德國Ependoff；QYC-2102C恒溫?fù)u床，上海福瑪；FD-EC-50凍干機(jī)，北京博醫(yī)康；R206旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申生；LC-20A高效液相色譜，日本島津。

1.2 測定方法

取黑果枸杞鮮果和干果，液氮研磨，凍干機(jī)凍干后取果粒干粉，加入20 mL鹽酸甲醇溶液(60% vol甲醇+0.1% HCl)制備提取液[6]，用于測定果皮中總酚、總花色苷、單寧含量。采用福林肖卡分光光度檢測法測定總酚[7]，結(jié)果用沒食子酸表示；采用pH示差法測定總花色苷[8]，結(jié)果以二甲花翠素-3-葡萄糖苷表示；采用甲基纖維素法測定單寧[9]，結(jié)果用兒茶素表示。參照陶宇翔[10]方法，采用HPLC法測定單體花色苷類物質(zhì)、非花色苷酚類物質(zhì)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2007統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行基礎(chǔ)數(shù)據(jù)整理，利用DPS 7.55中鄧肯多重比較法對數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑杞一號制干前后酚類物質(zhì)含量比較

多酚類物質(zhì)不僅影響黑果枸杞的外觀色澤、口感、風(fēng)味，還影響著其保健功能。酚類物質(zhì)是衡量果實(shí)品質(zhì)的重要指標(biāo)，具有抗氧化功能，可延緩衰老、調(diào)節(jié)血脂、改善胃腸功能[11-12]?；ㄉ囟嘁曰ㄉ盏男问酱嬖谟谥参锛?xì)胞液中，構(gòu)成黑果枸杞果實(shí)濃重的紫黑色。無色多酚單寧決定著黑果枸杞果實(shí)中的澀味。由表1可知，與黑杞一號鮮果相較，干果的總酚含量高2.10 mg/g、 總花色苷含量低5.30 mg/g、總單寧含量低0.66 mg/g。

表1 黑杞一號鮮果和干果的酚類物質(zhì)比較Table 1 The comparison of phenolic composition in fresh and dried HeiQi No.1

注：每一行不同的字母表示差異顯著(P< 0.05)。

2.2 黑杞一號制干前后單體花色苷物質(zhì)含量比較

表2反映黑杞一號制干前后的單體花色苷含量的變化情況。由表2可知，黑杞一號鮮果中檢測出8種單體花色苷，其中雙葡萄糖苷3種，咖啡?；咸烟擒?種，香豆酰化葡萄糖苷3種，以甲基花翠素葡萄糖苷及其?；苌锖孔罡?，花翠素葡萄糖苷及其?；苌锖看沃Ｔ诤阼揭惶桋r果中，單體花色苷含量由高到低為甲基花翠素咖啡?；咸烟擒?花翠素二葡萄糖苷二甲花翠素咖啡?；咸烟擒?甲基花翠素香豆?；咸烟擒?花翠素香豆酰化葡萄糖苷>甲基花翠素二葡萄糖苷>二甲基花翠素二葡萄糖苷>二甲花翠素香豆酰化葡萄糖苷，占總花色苷比例分別為90.95%、2.58%、0.89%、0.80%、0.61%、0.39%和0.24%。其中，非?；咸烟擒?55.03 μg/g，占總花色苷的4.54%；?；咸烟擒?5 890.66 μg/g，占總花色苷的95.46%。黑杞一號干果中檢測出4種單體花色苷，其中雙葡萄糖苷1種，咖啡?；咸烟擒?種，香豆?；咸烟擒?種，以甲基花翠素葡萄糖苷及其?；苌锖孔罡?。黑杞一號中單體花色苷含量由高到低為：甲基花翠素咖啡?；咸烟擒?二甲花翠素咖啡?；咸烟擒?甲基花翠素二葡萄糖苷>花翠素香豆?；咸烟擒?，占總花色苷的96.15%、2.49%、0.69%和0.67%。其中，非酰化葡萄糖苷72.90 μg/g，占總花色苷比例0.69%；酰化葡萄糖苷10 453.46 μg/g，占總花色苷比例99.31%。黑杞一號鮮果的單體花色苷總量比干果高6 119.33 μg/g。黑杞一號鮮果中各類型單體花色苷含量均高于干果，二甲基花翠素二葡萄糖苷、花翠素二葡萄糖苷、甲基花翠素香豆?；咸烟擒蘸投谆ù渌叵愣辊；咸烟擒諆H在黑杞一號鮮果中檢測到。

表2 黑杞一號鮮果和干果的單體花色苷比較Table 2 The comparison of individual anthocyanins in fresh and dried HeiQi No.1

注：每一行不同的字母表示差異顯著(P< 0.05)?！?”表示未檢出。

2.3 黑杞一號制干前后非花色苷單體酚類物質(zhì)含量比較

由表3可知，在黑杞一號鮮果和干果中共檢測到29種非花色苷單體酚，其中黃烷醇類7種，羥基苯甲酸類4種，黃酮醇類18種。與干果相較，黑杞一號鮮果中非花色苷單體酚總量低0.54 μg/g，其中黃烷醇類單體酚總量高0.02 μg/g，羥基苯甲酸類單體酚低1.03 μg/g，黃酮醇類高0.47 μg/g。黑杞一號鮮果可測定出值的單體酚共8種，含量由高到低為：沒食子酸酯>異鼠李亭>表?xiàng)攦翰杷?丁香亭-半乳糖苷>楊梅酮>二氫槲皮素>二氫山奈酚>棓兒茶素，其他21種均為痕量。黑杞一號干果可測定出值的單體酚共10種，含量由高到低為：原兒茶酸>沒食子酸酯>異鼠李亭>表?xiàng)攦翰杷?丁香亭-半乳糖苷>楊梅酮>水楊酸>二氫山奈酚>棓兒茶素>二氫槲皮素，其他19種均為痕量。

表3 黑杞一號鮮果和干果的非花色苷單體酚類比較Table 3 The comparison of individual nonanthocyanin phenolic compounds in fresh and dried HeiQi No.1

注：每一行不同的字母表示差異顯著(P< 0.05)。

3 討論

植物多酚作為植物的次生代謝產(chǎn)物，可預(yù)防癌癥和心腦血管等疾病，其抗氧化活性與總酚含量相關(guān)[13]。酚類物質(zhì)因含有酚羥基，化學(xué)性質(zhì)活潑。多酚氧化酶的最適宜溫度為35 ℃[14]，在自然陰干過程中，多酚氧化酶活性較強(qiáng)，對黑杞一號果實(shí)中酚類物質(zhì)會造成損失[15-16]。但由于黑杞一號含水量較大，果皮非常薄，制干過程中發(fā)生的濃縮和聚合反應(yīng)作用略大于其損失，所以黑杞一號干果的總酚含量比鮮果高2.10 mg/g，但差異不顯著?；ㄉ蛰^不穩(wěn)定，受熱易氧化降解[17]，所以黑杞一號干果較鮮果總花色苷含量低5.30 mg/g。制干過程中單寧易被氧化，制干后黑杞一號總單寧含量降低0.66 mg/g。

花青素(矢車菊素)、甲基花青素(芍藥素)、花翠素(飛燕草素)、3-甲基花翠素(矮牽牛素)和二甲花翠素(錦葵素)為果實(shí)中常見的5種花色素[19]?；ㄉ匾蕴擒盏男问酱嬖谟谥参锛?xì)胞液中?；ㄉ辗肿由系钠咸烟菤埢鶗M(jìn)一步與乙酸、香豆酸、咖啡酸結(jié)合成?；ㄉ?，增加果實(shí)顏色的穩(wěn)定性[20]。黑杞一號鮮果中檢測出8種單體花色苷，甲基花翠素葡萄糖苷及其酰化衍生物含量占92.45%，花翠素葡萄糖苷及其酰化衍生物含量占4.34%，二甲基花翠素葡萄糖苷及其?；苌锖空?.21%。黑杞一號干果中檢測出4種單體花色苷，甲基花翠素葡萄糖苷及其酰化衍生物含量占96.84%，二甲基花翠素葡萄糖苷酰化衍生物含量占2.49%，花翠素葡萄糖苷酰化衍生物含量占0.67%。由于花色苷易氧化，所以干果的單體花色苷總量較鮮果降低6 119.33 μg/g。在制干過程中，黑杞一號中花色苷的組成和含量發(fā)生動態(tài)的變化。制干后，最穩(wěn)定的甲基花翠素葡萄糖苷及其酰化衍生物所占比例升高4.39%，最不穩(wěn)定的花翠素葡萄糖苷及其?；苌锼急壤档?.67%。

黃烷醇類非花色苷單體酚不僅影響果實(shí)的苦味和收斂性，更具有舒張血管、降低血壓的功能[21]。黑杞一號鮮果和干果均檢測出7種黃烷醇類非花色苷單體酚，干果較鮮果低0.02 μg/g，均主要以表?xiàng)攦翰杷睾蜅攦翰杷貫橹?。酚酸通過與有機(jī)酸、糖或醇結(jié)合，以酯的形式存在于果實(shí)中。黑杞一號鮮果和干果均檢測出4種羥基苯甲酸類非花色苷單體酚，干果含量為鮮果的2.94倍，比鮮果中多0.95 μg/g原兒茶酸、0.08 μg/g水楊酸。原兒茶酸具有抗菌、祛痰、平喘作用，水楊酸為阿司匹林成分。黃酮醇類能夠影響果實(shí)澀味，并且能保護(hù)皮膚免受紫外線傷害。黑杞一號鮮果和干果均檢測出18種黃酮醇類非花色苷單體酚，且干果的含量比鮮果降低0.54 μg/g。兩者均含有少量二氫山奈酚、丁香亭-半乳糖苷、楊梅酮、異鼠李亭。此外，黑杞一號鮮果中還能檢測出0.11 μg/g槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸酐、0.34 μg/g鼠李糖素3-O-葡萄糖苷，黑杞一號干果中能檢測出0.02 μg/g二氫槲皮素。

4 結(jié)論

(1)黑杞一號鮮果總酚含量34.57 mg/g，總花色苷含量16.37 mg/g，總單寧含量6.78 mg/g。與黑杞一號鮮果相較，干果的總酚含量高2.10 mg/g、總花色苷含量低5.30 mg/g、總單寧含量低0.66 mg/g。

(2)黑杞一號鮮果中檢測出8種單體花色苷，其中雙葡萄糖苷3種，咖啡酰化葡萄糖苷2種，香豆酰化葡萄糖苷3種；黑杞一號干果中檢測出4種單體花色苷，其中雙葡萄糖苷1種，咖啡?；咸烟擒?種，香豆?；咸烟擒?種。兩者均以甲基花翠素葡萄糖苷及其?；苌锖孔罡?。黑杞一號鮮果的單體花色苷總量比干果高6 119.33 μg/g，鮮果中各類型單體花色苷含量均高于干果。

(3)黑杞一號鮮果和干果中檢測出29種非花色苷單體酚，包括黃烷醇類7種，羥基苯甲酸類4種，黃酮醇類18種。與干果相較，黑杞一號鮮果中非花色苷單體酚總量低0.54 μg/g。