UPLC-MS/MS 檢測4種蔬菜中的二嗪磷

王圓圓 王秀平 李明亮

二嗪磷又名地亞農(nóng)、二嗪農(nóng)，具有良好的內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，能夠抑制昆蟲體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶合成，對防治菜青蟲、棉蚜、三化螟和地下害蟲等有良好的效果。然而，二嗪磷對人的神經(jīng)系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生不良影響?；谑澜缧l(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)2017年10月27日公布的致癌物清單顯示，二嗪磷在2A類致癌物清單中。二嗪磷殘留量直接影響到農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全。

目前，二嗪磷殘留量的測定多用氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法等，但其前處理較復(fù)雜，靈敏度也不高。液相色譜-質(zhì)譜法有處理簡單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可以彌補(bǔ)氣相色譜或者氣相色譜-質(zhì)譜法的不足。目前，使用液相色譜-質(zhì)譜法檢測二嗪磷的殘留研究報(bào)道較少，而對于蔬菜中二嗪磷的測定則未有液相色譜-質(zhì)譜法相關(guān)方面的報(bào)道。本文分別選取瓜類、茄果類、葉菜類和豆類蔬菜中的典型代表黃瓜、番茄、小白菜和豇豆4種蔬菜為試樣，使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）在多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）模式下進(jìn)行快速檢測，分析了UPLC-MS/MS測定4種蔬菜中二嗪磷農(nóng)藥的殘留量，以期為提高蔬菜中二嗪磷殘留檢測的準(zhǔn)確性提供參考。

一、材料和方法

（一）儀器設(shè)備

Waters Acquity H-class超高效液相色譜儀。BEH C18 2.1 mm×

50 mm×1.7μm色譜柱（美國Waters公司）。Waters Xevo TQ-S micro

三重四級桿質(zhì)譜儀，電噴霧離子源ESI。法國默克Synergy?UV超純水制備系統(tǒng)，德國IKA T18 digital 高速分散機(jī)。Dragonlab渦旋，F(xiàn)isher公司）。乙酸、氯化鈉（分析純， 上海國藥集團(tuán)公司）。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：二嗪磷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100 μg/mL，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所）。樣品前處理凈化劑PSA、GCB和MgSO4（Agilent公司）。供試蔬菜為黃瓜、番茄、小白菜和豇豆。

（二）試驗(yàn)方法

1.基質(zhì)的制取方法。取蔬菜樣品可食用部分，4種蔬菜各稱取3 kg左右，用干凈的布擦去表面的附著物，采用對角線分割法，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣。準(zhǔn)確稱取10 g試樣于離心管中，加入20 mL乙酸-乙腈溶液，搖勻后用均質(zhì)器于10 000 r/min均質(zhì)30 s，加入5 g氯化鈉后再均質(zhì)30 s。10 000 r/min

離心5 min，移取上層提取液3 mL，加入裝有凈化劑的離心管中，渦旋混合1 min，10 000 r/min離心5 min，移取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，作為基質(zhì)備用。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。分別移取100 μg/mL的二嗪磷標(biāo)準(zhǔn)品1 mL置于10 mL和100 mL的容量瓶中，用乙腈為溶劑定容，配制成10 μg/mL和1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

3.純?nèi)軇┘訕?biāo)準(zhǔn)溶液的配制。用純?nèi)軇┮译鎸⒒旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級稀釋配制成0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL的純?nèi)軇┘訕?biāo)準(zhǔn)溶液。

4.基質(zhì)加標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。用基質(zhì)制取法制得的4種蔬菜基質(zhì)分別將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋配制成0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL的基質(zhì)加標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（三）質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。毛細(xì)管電壓為3.0 kV，離子源溫度為150 ℃，錐孔反吹氣流量為50 L/h，脫溶劑氣溫度為500 ℃，流速為1000 L/h，碰撞氣為氬氣。具體參數(shù)見表1。

二、結(jié)果與分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線

因樣品中的干擾物影響目標(biāo)化合物的離子化，使得目標(biāo)化合物在儀器上的響應(yīng)發(fā)生增強(qiáng)或抑制的現(xiàn)象，從而產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)，影響目標(biāo)化合物測定的準(zhǔn)確性。為了解不同蔬菜基質(zhì)對二嗪磷測定結(jié)果產(chǎn)生的影響，本試驗(yàn)分別用乙腈溶液、4 種不同蔬菜空白基質(zhì)溶液配成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用高效液相質(zhì)譜儀檢測。結(jié)果表明，4種不同蔬菜的基質(zhì)標(biāo)樣峰面積均小于乙腈標(biāo)樣的峰面積，說明這4種蔬菜中的基質(zhì)對二嗪磷均有抑制作用。本試驗(yàn)為消除基質(zhì)效應(yīng)的抑制作用，采用不同蔬菜對應(yīng)不同的基質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果，以待測物濃度為橫坐標(biāo)，待測物定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性方程（見表2）。在0.5 ～50 ng/mL濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)>

0.99。

（二）分析方法的準(zhǔn)確度、靈敏度和精密度

分別在制備好的黃瓜、番茄、小白菜和豇豆等4種空白蔬菜樣本中添加二嗪磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。添加濃度分別為0.01 mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg，每個(gè)添加水平設(shè)5個(gè)重復(fù)，按照樣品添加試驗(yàn)進(jìn)行提取和凈化，進(jìn)行檢測并計(jì)算回收率。二嗪磷在黃瓜中的平均添加回收率為97.5%～103.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.60%～2.81%;在番茄中的平均添加回收率為98.7%～102.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.01%～3.26%;在小白菜中的平均添加回收率為96.9%～104.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.81%～2.64%;在豇豆中的平均添加回收率為96.3%～109.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.81%～1.94%（見表3）。

三、討論

本文建立了二嗪磷在黃瓜、番茄、小白菜和豇豆等蔬菜中使用UPLC-MS/MS檢測其殘留的方法。該方法前處理簡單、回收率高，添加濃度為0.01～0.1 mg/kg，平均回收率為96.3%～109.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.60%～3.26%。準(zhǔn)確度和靈敏度均符合農(nóng)藥殘留的分析要求，同時(shí)也為檢測二嗪磷在其他蔬菜中的殘留提供了參考。