5種菌草草粉栽培灰樹花培養(yǎng)基配方篩選

曹秀明 蔡楊星 林占熺

摘 要：以5種菌草（象草、巨菌草、五節(jié)芒、芒萁和類蘆）草粉為試材，采用三級(jí)系統(tǒng)篩選法從菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)等方面對(duì)25個(gè)配方進(jìn)行了初步篩選研究，以期得到菌草栽培灰樹花的最佳配方。結(jié)果表明：菌草栽培灰樹花的最佳配方為五節(jié)芒50%、芒萁28%、麩皮5%、玉米粉15%、石膏2%，含水量為60%。該配方下灰樹花的菌絲體生長(zhǎng)速度快，達(dá)0.405 cm·d-1；灰樹花子實(shí)體的生物轉(zhuǎn)化率最高，為43.39%。

關(guān)鍵詞：灰樹花；菌草技術(shù)；子實(shí)體；三級(jí)系統(tǒng)篩選法

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2019.01.005

Abstract： Five kinds of JUNCAO grass powder （Pennisetum purpureum， Pennisetum giganteum， Miscanthus floridulus， Dicranopteris dichotoma and Neyraudia reynaudiana） were used as test materials. Twentyfive formulas were preliminarily screened from mycelial growth rate and mycelial growth vigor by threelever system screening method in order to obtain the best formula for cultivating Grifola frondosa. The results showed that the best formula for Grifola frondosa mycelium growth was 50% of Miscanthus floridulus， 28% of Dicranopteris dichotoma， 5% of wheat bran， 15% of Maize flour， 2% of gypsum， and 60% moisture content. The Grifola frondosa mycelium growth speed was up to 0.405 cm·d-1. The percent conversion of Grifola frondosa fruit body can reached to 43.39%， which higher than other JUNCAO formulas.

Key words： Grifola frondosa；JUNCAO technology；fruit body；threeever system screening method

灰樹花Grifola frondosa（Dicks）Gray，Nat.Arr.Brit.Pl.，又名貝葉多孔菌、蓮花菌、千佛菌、云蕈、栗子蘑等，隸屬于擔(dān)子菌綱非褶菌目多孔菌科樹花菌屬，具有顯著的抗腫瘤、抗肝炎、降血壓、抗HIV病毒及改善免疫系統(tǒng)功能等生理作用，故其有“食用菌王子”之美稱[1-2]。

當(dāng)前規(guī)?；a(chǎn)灰樹花一般利用木屑和棉籽殼作為主要原料。馬鳳等[3]進(jìn)行不同配比的木屑配方篩選試驗(yàn)，得到2個(gè)高產(chǎn)配方，即雜木屑78%、麥麩18%、腐殖土10%、白糖1%、石膏1%；硬雜木屑65%、麥麩20%、腐殖土15%。卜慶梅等[4]研究結(jié)果表明，木屑與棉籽殼為主要栽培原料時(shí)，兩者等比例混合生物轉(zhuǎn)化率最高（94.10%）。然而棉籽殼作為原料栽培灰樹花存在農(nóng)藥殘留問題，基于質(zhì)量安全問題，棉籽殼將慢慢被其他原料取代。由于多種原因，目前食藥用菌產(chǎn)區(qū)都面臨著木屑缺乏的問題，為緩解菌林矛盾，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)包括灰樹花在內(nèi)的食藥用菌產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，人們將目光轉(zhuǎn)移到了利用農(nóng)作物秸稈和廢棄菌糟等來代替木屑和棉籽殼栽培食藥用菌[5]。沈霞等[6]用稻草60%、麩皮18%、腐殖土15%、玉米粉5%、蔗糖1%、石膏1%的配方栽培灰樹花，生物轉(zhuǎn)化率為46.57%。

目前，雖然我國(guó)食藥用菌的傳統(tǒng)栽培技術(shù)已經(jīng)日趨成熟，但隨著森林覆蓋面積的銳減，木材被大量砍伐，利用菌草栽培技術(shù)取代木屑（或棉籽殼）栽培食藥用菌，不僅可以有效地保護(hù)生態(tài)環(huán)境，而且還可促進(jìn)菌業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。林占熺等[7]對(duì)芒萁、類蘆等菌草的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了測(cè)定，并利用菌草栽培毛木耳、香菇等食用菌，結(jié)果顯示芒萁、斑茅、類蘆、五節(jié)芒、蘆葦?shù)?種菌草的主要營(yíng)養(yǎng)成分與雜木屑對(duì)比，除纖維的含量低于木屑外，蛋白質(zhì)、脂肪、磷、鉀、鎂等的含量均高于木屑，并且用菌草栽培的香菇與毛木耳粗蛋白、磷、氮、鎂、鉀的含量均高于段木和雜木屑栽培的。劉葉高[8]檢測(cè)了菌草（五節(jié)芒）與木屑的主要營(yíng)養(yǎng)及礦質(zhì)成分，其結(jié)果與林占熺等[7]的研究結(jié)果相同，五節(jié)芒除粗纖維含量低于木屑外，蛋白質(zhì)、灰分、鉀、磷、鈣、鎂的含量均高于雜木屑，其中五節(jié)芒的蛋白含量為3.56%，而雜木屑為1.15%。陳安[9]用五節(jié)芒代料栽培香菇與木屑栽培香菇比較，結(jié)果縮短生產(chǎn)周期25～30 d，且一二潮菇集中，產(chǎn)量高，使生產(chǎn)管理費(fèi)用降低18%～25%，并且所產(chǎn)的香菇品質(zhì)更高。

目前，關(guān)于利用菌草技術(shù)栽培灰樹花的報(bào)道較少。本研究采用象草、巨菌草、五節(jié)芒、芒萁和類蘆5種菌草，按照不同比例將其制成相應(yīng)培養(yǎng)基，再利用菌草栽培技術(shù)栽培灰樹花，從而初步篩選出適合栽培灰樹花的菌草栽培配方。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株為灰樹花G5，由福建農(nóng)林大學(xué)菌草研究所提供[10]。5種供試菌草分別為象草Pennisetum purpureum、巨菌草Pennisetum giganteum、五節(jié)芒（Miscanthus floridulus、芒萁Dicranopteris dichotoma、類蘆Neyraudia reynaudiana。

1.2 儀器與設(shè)備

試驗(yàn)主要儀器和設(shè)備包括超凈工作臺(tái)（SWCJ1F，蘇州集團(tuán)蘇州安泰技術(shù)有限公司），隔水恒溫式培養(yǎng)箱（GSP9160MBE，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、自動(dòng)拌料機(jī)（漳州市來利食用菌有限公司）、高速多功能粉碎機(jī)JP100A（上海市久品工貿(mào)有限公司）、人工氣候箱HGP300（武漢中科科儀技術(shù)發(fā)展有限責(zé)任公司），臥式多用裝袋機(jī)GE（福建古田縣教學(xué)器材廠）等。

1.3 試驗(yàn)方法

三級(jí)系統(tǒng)篩選法[10]是根據(jù)菌絲體在菌草培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度與長(zhǎng)勢(shì)進(jìn)行篩選，把菌絲體生長(zhǎng)速度快和長(zhǎng)勢(shì)好的培養(yǎng)基配方確定為下一級(jí)試驗(yàn)的配方。主要分為試管篩選法（一級(jí)）、瓶栽篩選法（二級(jí)）、袋栽法（三級(jí)）。

1.3.1 試管篩選法（一級(jí)） 在自然條件下分別將5種供試菌草曬干、粉碎，按表1各配方比例混勻后裝入20 cm×1.8 cm試管中，每管培養(yǎng)基平均濕重16.7 g，每個(gè)配方6個(gè)重復(fù)，分裝好后于1.21×105 Pa大氣壓下滅菌1 h，冷卻至室溫后在無菌條件下接種，接種量為1 cm×1.5 cmPDA菌種塊。接種后置于26℃ 恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，每3 d測(cè)定1次菌絲生長(zhǎng)速度并觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，從而篩選出菌絲生長(zhǎng)速度快、長(zhǎng)勢(shì)好的培養(yǎng)基配方進(jìn)行下一級(jí)篩選試驗(yàn)。具體培養(yǎng)基配方配制列于表1。

1.3.2 瓶栽篩選法（二級(jí)） 將1.3.1篩選得到的9個(gè)適宜灰樹花菌絲生長(zhǎng)的菌草培養(yǎng)基配方進(jìn)行復(fù)篩試驗(yàn)。按表2所示配方配制培養(yǎng)基，分裝于750 mL玻璃瓶中，每瓶培養(yǎng)基濕重為300 g（約占瓶子容積3/4），每個(gè)配方5個(gè)重復(fù)。滅菌后在無菌接種箱中接種，每瓶接種量約為3 cm×1.5 cm PDA菌種塊。接種后放于人工氣候室中進(jìn)行培養(yǎng)，設(shè)定溫度為24℃，濕度為65%。待菌絲恢復(fù)后，記錄菌絲蓋面情況；同時(shí)，每5 d測(cè)定1次菌絲生長(zhǎng)速度，待菌絲滿瓶后觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)并記錄灰樹花原基長(zhǎng)勢(shì)，計(jì)算菌絲的日生長(zhǎng)速度，選擇生長(zhǎng)速度快和長(zhǎng)勢(shì)好的培養(yǎng)基配方作為灰樹花子實(shí)體栽培的培養(yǎng)基配方。

1.3.3 袋栽法（三級(jí)） 選擇由1.3.2篩選出的3個(gè)灰樹花菌草栽培配方作為菌草栽培灰樹花子實(shí)體栽培的培養(yǎng)基配方，以全木屑栽培灰樹花（配方號(hào)以S計(jì)）作為對(duì)照試驗(yàn)。按表3所示配方配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)料充分混勻后用裝袋機(jī)裝入17 cm×60 cm聚乙烯塑料薄膜袋中，每個(gè)配方30筒，每筒濕重約2.5 kg。常壓滅菌法滅菌10 h，待菌筒冷卻至30℃以下后移至接種箱中，利用二氯異氰尿酸鈉煙劑對(duì)接種箱滅菌0.5 h，之后接入原種，每筒打3個(gè)接種孔，每瓶原種可接種約15筒。接種完畢后將其移至培養(yǎng)室進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，在此期間定期觀察與記錄菌絲長(zhǎng)勢(shì)、菌絲長(zhǎng)滿時(shí)間、出菇情況等，子實(shí)體成熟后采收、稱重，計(jì)算其生物轉(zhuǎn)化率。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用Excel2003軟件整理并制作圖表，采用SPSS 12.0軟件對(duì)試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與方差分析，數(shù)據(jù)結(jié)果采用 ±SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 試管篩選法試驗(yàn)結(jié)果

從表4可以看出，不同培養(yǎng)基配方對(duì)灰樹花菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)均有一定的影響。其中16號(hào)配方菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲長(zhǎng)勢(shì)較好；與20號(hào)配方相比，菌絲生長(zhǎng)速度達(dá)到顯著性差異水平（P0.05）。5號(hào)與4號(hào)配方之間菌絲長(zhǎng)速也無顯著性差異（P>0.05），但5號(hào)配方菌絲長(zhǎng)勢(shì)不如4號(hào)配方致密。其他配方菌絲長(zhǎng)勢(shì)與生長(zhǎng)速度均較差。由此可知芒萁對(duì)灰樹花菌絲生長(zhǎng)影響較大，其次為五節(jié)芒。

2.2 瓶栽篩選法試驗(yàn)結(jié)果

由表5可知，10號(hào)、3號(hào)、12號(hào)配方之間菌絲生長(zhǎng)速度均較快，且無顯著性差異（P>0.05）。10號(hào)、3號(hào)與16號(hào)配方菌絲長(zhǎng)勢(shì)最為致密，其中10號(hào)配方出現(xiàn)原基較早且原基長(zhǎng)勢(shì)好，其次為3號(hào)與12號(hào)配方。12號(hào)與16號(hào)配方菌絲生長(zhǎng)速度無顯著性差異（P>0.05），但16號(hào)菌絲長(zhǎng)勢(shì)要優(yōu)于12號(hào)配方，且原基長(zhǎng)勢(shì)也比12號(hào)配方好。

2.3 袋栽法栽培灰樹花試驗(yàn)結(jié)果

本試驗(yàn)因在自然環(huán)境下發(fā)菌，溫度較低，故菌絲恢復(fù)及生長(zhǎng)緩慢，菌絲較弱；在菌袋接種口附近刺孔通氣，發(fā)現(xiàn)木屑配方菌絲長(zhǎng)勢(shì)優(yōu)于菌草配方，菌絲更致密；待菌絲恢復(fù)良好，去掉接種口膠帶，將菌袋“井”字形排列，加大菌袋通氣量，發(fā)現(xiàn)菌草配方菌絲生長(zhǎng)迅速，致密程度已與木屑配方無差別；菌絲長(zhǎng)滿菌袋需要90 d左右。開袋8 d后長(zhǎng)出菇蕾，木屑配方與菌草配方出蕾情況無差別，均在98%左右；10 d后菇蕾開始分化，30 d子實(shí)體基本成熟，采摘。由表6可以看出，配方10栽培灰樹花的產(chǎn)量在菌草培養(yǎng)基配方中最高，平均每袋產(chǎn)量為433.90 g，生物轉(zhuǎn)化率為43.39%。

3 討論與結(jié)論

3.1 本試驗(yàn)采用三級(jí)系統(tǒng)篩選法從菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)勢(shì)、子實(shí)體產(chǎn)量等方面對(duì)25個(gè)配方進(jìn)行篩選，最后篩選出5種菌草草粉中的最佳配方為：五節(jié)芒50%、芒萁28%、麩皮5%、玉米粉15%、石膏2%、含水量60%；該配方灰樹花子實(shí)體的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高，為43.39%。

3.2 在本研究中，雖然16號(hào)配方菌絲生長(zhǎng)速度不及12號(hào)，但菌絲長(zhǎng)勢(shì)與原基生長(zhǎng)情況卻均優(yōu)于12號(hào)配方；袋栽試驗(yàn)中不選擇16號(hào)而選擇12號(hào)配方的原因是因?yàn)?6號(hào)為全芒萁草粉配方，全芒萁配方栽培過程中栽培料易被白蟻蠶食，從而影響子實(shí)體的生長(zhǎng)。

3.3 從篩選結(jié)果可以看出，五節(jié)芒更適合于灰樹花的栽培，其次為芒萁與類蘆，造成這種現(xiàn)象的原因可能是由于五節(jié)芒、芒萁及類蘆中所含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)更高，更易被灰樹花菌絲體和子實(shí)體吸收利用，混合草粉的碳氮比更符合灰樹花生長(zhǎng)周期中的營(yíng)養(yǎng)所需。結(jié)果顯示，配方3子實(shí)體轉(zhuǎn)化率較低，可能因?yàn)閱我徊莘叟浞脚囵B(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)不均衡有關(guān)。配方12產(chǎn)量略高，但12號(hào)配方中需要用到3種草粉，在實(shí)際生產(chǎn)中將加大成本，不利于推廣。配方10為五節(jié)芒和芒萁混合草粉，雖產(chǎn)量略低于木屑配方，但這兩種菌草在南方山區(qū)隨處可見，是最為豐富的菌草資源，成本低于木屑，所以利用五節(jié)芒和芒萁2種菌草栽培灰樹花不僅是非常經(jīng)濟(jì)有效的致富手段，而且也解決了長(zhǎng)期存在的“菌林矛盾”。

3.4 在袋栽法篩選過程中，菌草配方栽培灰樹花與木屑配方栽培灰樹花在菌絲長(zhǎng)勢(shì)、出蕾、產(chǎn)量上均無明顯差別。但在灰樹花發(fā)菌期間應(yīng)加大菌袋的通氣量，這樣更有利于菌絲的生長(zhǎng)，這是因?yàn)榛覙浠▽儆诤醚蹙诰z生長(zhǎng)期間需要大量的氧氣。因此在菌草粉碎時(shí)應(yīng)選用菌草破碎機(jī)，使菌草呈顆粒狀，裝料時(shí)也不易將菌袋壓得過緊，使菌絲生長(zhǎng)過程中有充足的氧氣保證其快速生長(zhǎng)。另外，在菌草栽培灰樹花栽培技術(shù)上可繼續(xù)加以探索優(yōu)化，增加其子實(shí)體生物轉(zhuǎn)化率。

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（責(zé)任編輯：柯文輝）