兩種砧木對(duì)櫻桃番茄青枯病抗性及根際微生物數(shù)量的影響

趙文宗 鄭旭陽 張映卿 鐘川 陽燕娟 于文進(jìn)

摘?要：青枯病是危害我國華南地區(qū)番茄生產(chǎn)最嚴(yán)重的土傳性病害之一。為探討在人工接種青枯菌條件下，兩種不同砧木嫁接對(duì)番茄青枯病的抗性及根際微生物數(shù)量的影響。該研究分別用砧木“番砧1號(hào)”和“茄砧21號(hào)”與櫻桃番茄“粉貝貝”進(jìn)行嫁接，采用稀釋平板法對(duì)各嫁接組合的根際微生物進(jìn)行分離。結(jié)果表明：（1）采用抗病砧木嫁接顯著提高了番茄的抗病性，降低了發(fā)病率和病情指數(shù)，延緩了發(fā)病時(shí)間。（2）青枯菌在侵染植株過程中呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，其數(shù)量從根系到地上莖部逐漸減少;砧穗嫁接植株、砧木自根嫁接植株根際基質(zhì)和根系中的青枯菌數(shù)量降低，且地上莖部中的病原菌數(shù)量顯著低于接穗自根嫁接植株;接種青枯菌后，各嫁接組合根際基質(zhì)中的細(xì)菌、真菌和放線菌的數(shù)量隨發(fā)病期的變化呈先增加后降低的趨勢。（3）采用抗病砧木嫁接總體上提高了植株根際微生物總量、細(xì)菌及放線菌的數(shù)量，降低了真菌的數(shù)量，改善了嫁接植株根際微環(huán)境，對(duì)降低番茄青枯病發(fā)病率具有重要作用。

關(guān)鍵詞： 番茄， 嫁接， 青枯病， 抗病性， 根際微生物

Effects of two rootstocks on bacterial wilt resistance and rhizospheric microorganisms of cherry tomato

ZHAO Wenzong， ZHENG Xuyang， ZHANG Yingqing， ZHONG Chuan，

YANG Yanjuan， YU Wenjin*

（ College of Agriculture， Guangxi University， Nanning 530004， China ）

Abstract：Bacterial wilt is one of the most serious soil-borne diseases endangering tomato production in South China. Under the condition of phytotron inoculation of Ralstonia solanacearum， the effects of two different rootstocks on the resistance to bacterial wilt and the quanantity of rhizospheric microorganisms were studied. “Fanzhen No.1”， “Qiezhen No. 21” and cherry tomato variety “Fen beibei” were used as rootstocks and scion， respectively. And the rhizospheric microorganisms were separated by dilution plate method. The results were as follows： （1） Grafting significantly improved the resistance of tomato to bacterial wilt， reduced the incidence rate and disease index， and delayed the onset of disease. （2） The quantity of R. solanacearum decreased gradually from root to shoot and showed dynamic changes du-ring the infection process. Grafting with disease-resistant rootstocks significantly reduced the quantity of R. solanacearum in rhizospheric matrix and roots， and the quantity of pathogenic bacteria in shoot was significantly lower than that of scion-self-rooted grafted plants. After inoculation， the quantities of bacteria， fungi and actinomycetes in rhizospheric matrix of all grafted combinations increased first and then decreased as the disease progressed. （3） In general， grafting with disease-resistant rootstocksincreased the quantities of rhizospheric microorganisms， bacteria and actinomycetes while decreased the quantity of fungi， and improved the rhizospheric microenvironment， which plays an important role in redu-cing the incidence rate of tomato bacterial wilt.

Key words： tomato， grafting， bacterial wilt， disease resistance， rhizospheric microorganisms

青枯病是由茄科青枯雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum，以下簡稱青枯菌）引起的一種土傳性維管束病害，在熱帶和亞熱帶地區(qū)普遍發(fā)生，尤其在茄科作物上危害最為嚴(yán)重;青枯菌能隨土壤、流水傳播，可在無寄主條件下的土壤中長期存活，難以根治，常造成重大農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失（Guo et al.， 2004;劉富中等，2005; Wicker et al.， 2007）。番茄青枯病的防治研究，有采用化學(xué)藥劑防治和拮抗細(xì)菌、抗生素等生物防治方法的報(bào)道（嚴(yán)金平等，2004;黎起秦等，2006）。由于化學(xué)藥劑的使用成本較高，其作用效果受土壤和氣候條件影響，所以尚無長期有效的化學(xué)手段來防控青枯病。生物防治對(duì)青枯病的防控具有一定作用，但穩(wěn)定性較差，在生產(chǎn)中的應(yīng)用效果并不理想（林尤劍等，2005;肖燁等，2007）。選育抗病番茄品種是防治青枯病的有效途徑，但商品性好的抗病品種較少（汪國平等，2004）。目前，采用抗病砧木嫁接是防控青枯病的最有效措施，可顯著提高番茄植株對(duì)青枯病的抗性，降低田間發(fā)病率（別之龍，2012;黃益鴻等，2013;王岳霞等，2018）。番茄在生產(chǎn)上已有不少抗青枯病砧木推廣應(yīng)用于嫁接栽培，一般分為茄科番茄屬和茄屬兩大類砧木（張余洋等，2010;莫豪葵等，2013）。

嫁接提高番茄對(duì)青枯病的抗性已有較多報(bào)道，但多集中于抗病性鑒定、砧木種質(zhì)篩選、栽培效果比較等方面，而有關(guān)砧木提高抗病性的機(jī)理研究卻較少。研究表明，砧木根系中特有的篩板結(jié)構(gòu)可抑制青枯菌的擴(kuò)散和增殖，嫁接能夠誘導(dǎo)植株體內(nèi)同工酶的結(jié)構(gòu)和功能改組，使抗性基因得以表達(dá)（周寶利等，1998;王岳霞，2017）。植物對(duì)土傳性病害的抗性表現(xiàn)與其根際微生物的多樣性和群落結(jié)構(gòu)密切相關(guān)（馮杭等，2010;Eisenhauer et al.， 2012）。據(jù)報(bào)道，抗病番茄品種在接種青枯菌后其根際土壤中微生物總量顯著高于感病品種（劉瓊光等，2006）。尹玉玲等（2008）研究發(fā)現(xiàn)嫁接提高了茄子根際細(xì)菌和放線菌的數(shù)量，降低了真菌的數(shù)量，顯著降低了黃萎病的發(fā)病率和病情指數(shù)。楊尚東等（2013）發(fā)現(xiàn)番茄青枯病感病植株根際細(xì)菌和放線菌數(shù)量極顯著減少，而真菌數(shù)量極顯著增加。嫁接番茄對(duì)青枯病的抗性與根際微生物數(shù)量變化之間存在何種關(guān)系，目前極少有報(bào)道。本研究通過比較分析人工接種青枯菌條件下，青枯病病原菌在嫁接番茄體內(nèi)和根際基質(zhì)中的分布特征，不同發(fā)病時(shí)期根際微生物的動(dòng)態(tài)變化特點(diǎn)，探討嫁接番茄抗青枯病與根際微生物的數(shù)量關(guān)系，旨在從植物根際微環(huán)境的角度進(jìn)一步揭示嫁接番茄抗青枯病的機(jī)理。

1?材料與方法

1.1 供試材料

砧木和接穗品種：嫁接砧木為廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院育成的高抗青枯病的番茄專用砧木“番砧1號(hào)”（No.1，簡稱番砧）和番茄、茄子通用砧木“茄砧21號(hào)”（No.21，簡稱茄砧），接穗為高感青枯病櫻桃番茄品種“粉貝貝”（Fb）。

青枯病病原菌：從番茄青枯病發(fā)病植株上分離、純化、保存，經(jīng)平板培養(yǎng)和煙葉過敏反應(yīng)鑒定具有較強(qiáng)致病力的菌株作為接種用病原菌。

根際微生物培養(yǎng)基：分別選用牛肉膏蛋白胨（NA）培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、改良高氏1號(hào)培養(yǎng)基作為細(xì)菌、真菌、放線菌的分離培養(yǎng)基，選用2， 3， 5-氯化三苯基四氮唑（TTC）培養(yǎng)基作為青枯病菌的鑒別培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)?試驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)嫁接組合，分別為砧穗嫁接（Fb/No.1、Fb/No.21）、砧木自根嫁接（No.1/No.1、No.21/No.21），以接穗自根嫁接（Fb/Fb）作為對(duì)照（CK）。供試砧木用21孔穴盤（62 mm×30 mm）育苗，接穗用72孔穴盤育苗，育苗基質(zhì)按泥炭∶椰糠=1∶1配制。當(dāng)砧木長至3片真葉時(shí)，采用C型套管貼接法嫁接。

嫁接成活后將一部分嫁接苗轉(zhuǎn)至人工氣候室中，待接穗長至4～5片真葉時(shí)采用傷根灌注法接種青枯菌，濃度為5 × 108 CFU·mL-1，每個(gè)嫁接組合40株，隨機(jī)排列，3次重復(fù);另一部分定植于青枯病自然病圃中，每個(gè)嫁接組合40株，3次重復(fù)，用于觀察和統(tǒng)計(jì)田間發(fā)病情況。

1.2.2 發(fā)病情況調(diào)查?接種青枯菌后，每隔5 d調(diào)查植株的發(fā)病情況，共觀察30 d，確定發(fā)病周期并計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)等。參照賴傳雅（1998）、謝丙炎等（2010）的方法，根據(jù)植株發(fā)病情況將病情級(jí)別分為5級(jí)。0級(jí)：無癥狀;1級(jí)：1片葉萎蔫;2級(jí)：2～3片葉萎蔫;3級(jí)：除頂部2～3片葉外，其他葉片均萎蔫;4級(jí)：全株葉片萎蔫，植株死亡。

發(fā)病率（%）=（發(fā)病株數(shù)/接種總株數(shù)）×100;

病情指數(shù)（DI）=∑（病情級(jí)別×該病級(jí)株數(shù)）/（病情最高級(jí)別×接種總株數(shù)）×100。

嫁接番茄對(duì)青桔病的抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如下：I. 免疫（DI=0）;HR. 高抗（0<DI<12.5）;R. 抗?。?2.5≤DI≤25）;MR. 中抗（25≤DI<50）;S. 感?。?0≤DI<75）;HS. 高感（75≤DI<100）。

1.2.3 根際基質(zhì)取樣?人工氣候室接種條件下，在接種前（S1）、接種后發(fā)病初期（S2）、發(fā)病高峰期（S3）和發(fā)病末期（S4）4個(gè)時(shí)期，采用抖根法收集植株根際基質(zhì)，用于分析根際微生物。各嫁接組合隨機(jī)取10株，連續(xù)取3次。先將1 cm深的表面基質(zhì)除去，再把全部根系挖出，輕輕抖落多余基質(zhì)，用干凈毛刷取距根表4 mm內(nèi)基質(zhì)作為根際基質(zhì)（申建波等，2011）。根際基質(zhì)樣品過10目篩后裝于50 mL無菌離心管中，置于-20 ℃冰箱中保存。

1.2.4 嫁接植株各部位取樣?先用清水洗掉植株根系附著的雜質(zhì)，然后分別用去離子水和無菌水將植株沖洗干凈，用滅菌紗布拭干。取植株根系，然后取距離植株嫁接口上、下1 cm處莖部分別作為接穗莖、砧木莖，每部位各取10 g。植物樣品密封保存于-20 ℃冰箱中。

1.2.5 微生物分離計(jì)數(shù)?根際基質(zhì)懸浮液制備：取10 g根際基質(zhì)樣品，放入加有90 mL無菌水的錐形瓶中，密封后置于水平恒溫?fù)u床上（30 ℃，200 r·min-1）振蕩30 min，使基質(zhì)樣品在水中均勻分散稀釋為10-1的懸浮液。取10-1的懸浮液1 mL加入到裝有9 mL無菌水的試管中，振蕩搖勻，即得稀釋度10-2的懸浮液，按此方法進(jìn)行梯度稀釋。

植物樣品稀釋液制備：取稱好的樣品10 g，經(jīng)表面消毒（70%酒精消毒30 s，1%次氯酸鈉消毒15 min，無菌水漂洗3次）后剪碎研磨，加入90 mL無菌水，然后按上述方法進(jìn)行梯度稀釋。

采用稀釋平板法分離根際微生物和植株體內(nèi)青枯菌。取稀釋至10-3、10-4、10-5的基質(zhì)懸浮液和植物樣品稀釋液分別均勻涂布在不同分離培養(yǎng)基上，每個(gè)嫁接組合3皿，每皿涂0.1 mL，密封后倒置，于28 ℃恒溫條件下分別培養(yǎng)2 d（細(xì)菌）、3 d（真菌）、6 d（放線菌），記錄每皿中微生物菌落數(shù)，換算成每克基質(zhì)中根際微生物菌落平均數(shù)，微生物總量為各種群菌落數(shù)量之和（林先貴，2010;姚華開，2018）。

微生物菌落數(shù)（CFU·g-1）=（菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù) × 20 × 鮮基質(zhì)重）/干基質(zhì)重。

植株根際和體內(nèi)青枯菌數(shù)量參照劉瓊光等（2006）的方法計(jì)算。

青枯菌菌落數(shù)（CFU·g-1）=（菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）/ [每皿涂樣量×鮮基質(zhì)（或鮮組織）重]。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理?應(yīng)用Microsoft Excel 2010軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和多重比較。

2?結(jié)果與分析

2.1 不同嫁接組合對(duì)青枯病的抗性表現(xiàn)

由表1可知，在人工氣候室接種青枯菌后30 d，砧穗嫁接植株（Fb/No.1、Fb/No.21）、砧木自根嫁接植株（No.1/No.1、No.21/No.21）的發(fā)病率和病情指數(shù)均顯著低于接穗自根嫁接植株CK（Fb/Fb），供試的2個(gè)砧木均顯著提高了番茄的抗病性，其中番砧嫁接植株（Fb/No.1）表現(xiàn)為高抗（HR），茄砧嫁接植株（Fb/No.21）表現(xiàn)為抗病（R）。自然病圃條件下，茄砧嫁接植株表現(xiàn)為高抗（HR），其余嫁接組合的抗病水平與人工氣候室接種一致，各嫁接組合的枯死率和病情指數(shù)均比人工氣候室接種低。砧穗嫁接植株較砧木自根嫁接植株的發(fā)病率和病情指數(shù)有所提高， 說明砧穗互作

對(duì)嫁接植株的抗病性產(chǎn)生了一定影響。此外，番砧嫁接植株的發(fā)病率、枯死率、病情指數(shù)均比茄砧嫁接植株稍低，抗病性稍強(qiáng)。

2.2 不同嫁接組合接種青枯菌后發(fā)病情況的動(dòng)態(tài)變化

在人工氣候室接種青枯菌條件下，各嫁接組合發(fā)病率和病情指數(shù)變化如圖1所示。植株接種第3～5天后逐漸開始發(fā)病，隨著接種天數(shù)的延長，CK的發(fā)病率和病情指數(shù)均顯著提高，而其他嫁接組合增長趨勢較小。第10天，CK發(fā)病率為38.71%，砧穗嫁接與砧木自根嫁接植株則分別為4.84%（Fb/No.1）、3.17%（Fb/No.21）、6.45%（No.1/No.1）、6.35%（No.21/No.21）。第25天，CK發(fā)病率達(dá)到峰值，為96.77%，其他嫁接組合分別為11.29%（Fb/No.1）、12.70%（Fb/No.21）、9.68%（No.1/No.1）、9.52%（No.21/No.21），發(fā)病趨勢逐漸變緩，至第30天無明顯變化。根據(jù)以上結(jié)果，可確定番茄接種青枯菌后第5～10天為發(fā)病初期，第10～25天為發(fā)病高峰期，第25天后為發(fā)病末期。

2.3 不同嫁接組合的根際和植株體內(nèi)青枯菌數(shù)量動(dòng)態(tài)變化

人工氣候室接種條件下，各嫁接組合根際基質(zhì)中的青枯菌數(shù)量隨著植株病期的發(fā)展呈現(xiàn)先增加后降低，最終趨于平穩(wěn)的動(dòng)態(tài)變化趨勢（圖2）。接種前（S1），各部位青枯菌數(shù)量均為0。在發(fā)病初期（S2）各嫁接組合根際基質(zhì)中青枯菌數(shù)量達(dá)到峰值，至發(fā)病高峰期（S3）數(shù)量則顯著降低。S2期，CK的根際基質(zhì)中青枯菌數(shù)量最高，為84.85×105 CFU·g-1;砧穗嫁接植株（Fb/No.1）最低，為42.42×105 CFU·g-1。從各嫁接組合植株不同部位青枯菌數(shù)量變化趨勢可以看出，CK的根系、砧木莖、接穗莖中青枯菌數(shù)量在S3期達(dá)到峰值，而砧穗嫁接和砧木自根嫁接植株則在S2期達(dá)到峰值。S2期，No.21/No.21和Fb/No.21根系中的青枯菌數(shù)量均達(dá)到48.48×105 CFU·g-1，顯著高于No.1/No.1（24.24×105 CFU·g-1）和Fb/No.1（30.30×105 CFU·g-1），但與CK（54.55×105 CFU·g-1）差異不顯著。S3期，CK根系中的青枯菌數(shù)量最高，達(dá)到75.76×105 CFU·g-1，極顯著高于其他嫁接組合。發(fā)病高峰期至發(fā)病末期（S4），除CK外，其他嫁接組合地上部莖中的青枯菌數(shù)量差異不顯著，番砧嫁接植株稍高于茄砧嫁接植株。各嫁接組合植株體內(nèi)，青枯菌數(shù)量從根系到地上部呈遞減分布。S4期，F(xiàn)b/No.1和Fb/No.21接穗莖中的青枯菌數(shù)量均為3.03×105 CFU·g-1，顯著低于CK（21.21×105 CFU·g-1），而No.1/No.1和No.21/No.21則趨于0。以上說明，采用抗病砧木嫁接可有效阻止青枯菌向根系和地上部莖侵染，抑制青枯菌的增殖，從而降低嫁接植株發(fā)病率或減緩其發(fā)病程度。

2.4 不同嫁接組合的根際微生物總量

由圖3：A可知，接種青枯菌后，各嫁接組合根際微生物總量均顯著增加，在S1～S4期整體呈現(xiàn)先升高后降低又升高的變化趨勢。由圖3：B可

知，在S2期，No.1/No.1根際微生物總量最高，為206.68×106 CFU·g-1，No.21/No.21稍低，為195.83×106 CFU·g-1，砧穗嫁接植株分別為162.45 ×106 CFU·g-1（Fb/No.1）、186.81×106 CFU·g-1（Fb/No.21），均顯著高于CK（134.75×106 CFU·g-1）。S3期，4個(gè)砧木嫁接組合根際微生物總量降低，但仍高于CK; Fb/No.1和Fb/No.21差異不顯著。S4期，各嫁接組合根際微生物總量再次升高，除No.21/No.21與CK無顯著差異外，其他嫁接組合均顯著高于CK。以上說明，在青枯菌侵染條件下，抗病砧木嫁接提高了番茄植株根際微生物的總量。

2.5 不同嫁接組合的根際細(xì)菌數(shù)量

由圖4：A可知，接種青枯菌后，各嫁接組合根際細(xì)菌的變化趨勢同根際微生物總量的變化基本一致，No.1/No.1和No.21/No.21在S1期達(dá)到峰值，其他嫁接組合則在發(fā)病末期達(dá)到峰值。砧穗嫁接和砧木自根嫁接植株根際細(xì)菌數(shù)量在植株的S2～S4期內(nèi)均高于CK。這說明抗病砧木嫁接促進(jìn)了根際細(xì)菌的增殖。圖4：B中，S2期，No.1/No.1根際細(xì)菌數(shù)量最高，為155.63×106 CFU·g-1，顯著高于其他嫁接組合;Fb/No.1最低，為113.44×106 CFU·g-1，與CK（104.12 ×106 CFU·g-1）差異不顯著。S3期，各嫁接組合根際細(xì)菌數(shù)量較S2期均不同程度降低，其中No.1/No.1下降幅度最大，但總量仍顯著高于CK，其他嫁接組合間差異不顯著。S4期，各嫁接組合根際細(xì)菌數(shù)量均不同程度升高，F(xiàn)b/No.1和Fb/No.21根際細(xì)菌數(shù)量達(dá)到峰值，分別為149.47×106 CFU·g-1、139.84×106 CFU·g-1，顯著高于其他嫁接組合。

2.6 不同嫁接組合的根際真菌數(shù)量

由圖5：A可知，接種青枯菌前，各嫁接組合根際真菌數(shù)量差異不顯著;接種后，總體呈先增加后降低的趨勢，根際真菌數(shù)量遠(yuǎn)低于細(xì)菌數(shù)量。圖5：B中，S2期，No.1/No.1根際真菌數(shù)量較S1期顯著升高，且高于其他嫁接組合，達(dá)到2.55×106 CFU·g-1。S3期，CK根際真菌數(shù)量顯著升高，其他嫁接組合則顯著降低，其中Fb/No.1和Fb/No.21降幅較大，分別降至0.37×106 CFU·g-1、0.21×106 CFU·g-1。S4期，砧穗嫁接植株根際真菌數(shù)量極顯著降低，較S1期分別下降了86.77%（Fb/No.1）、85.53%（Fb/No.21），砧木自根嫁接植株分別下降了56.47%（No.1/No.1）、27.17%（No.21/No.21），而CK則增加了21.70%。以上說

明，在青枯菌侵染條件下，抗病砧木嫁接植株抑制了根際真菌的增殖，降低了真菌的數(shù)量。

2.7 不同嫁接組合的根際放線菌數(shù)量

接種青枯菌后，各嫁接組合根際放線菌數(shù)量變化趨勢同細(xì)菌和真菌不同，在S2期顯著升高，之后降低并趨于平穩(wěn);Fb/No.1和Fb/No.21的S4期較S1期升高且差異顯著（圖6：A）。由圖6：B可知，砧穗嫁接和砧木自根嫁接植株根際放線菌數(shù)量在S2期較CK極顯著增加，分別達(dá)到了47.13×106 CFU·g-1 （Fb/No.1）、55.90×106 CFU·g-1（Fb/No.21）、48.50×106 CFU·g-1（No.1/No.1）、62.47×106 CFU·g-1（No.21/No.21），茄砧嫁接植株相對(duì)增長率普遍高于番砧嫁接植株。S3期，各嫁接組合根際放線菌數(shù)量均較大幅度下降，降低較明顯的是茄砧嫁接植株，分別下降了59.55%（No.21/No.21）、56.23%（Fb/No.21），除Fb/No.1稍高于CK外，其他嫁接組合仍顯著高于CK。S4期，各嫁接組合變化較小，F(xiàn)b/No.1的根際放線菌數(shù)量顯著高于Fb/No.21，其他嫁接組合間差異不顯著。

2.8 不同嫁接組合抗病性和根際微生物數(shù)量的相關(guān)關(guān)系

由表2可知，接種青枯菌后，不同嫁接組合的病情指數(shù)和發(fā)病率與根際微生物不同類群數(shù)量間存在一定的相關(guān)關(guān)系。其中， 病情指數(shù)和發(fā)病率與根際青枯菌、細(xì)菌和放線菌數(shù)量呈正相關(guān)關(guān)系，與真菌數(shù)量則呈極顯著負(fù)相關(guān)。青枯菌、 細(xì)菌和放線菌與根際微生物總量存在極顯著正相關(guān)關(guān)系;青枯菌分別與細(xì)菌和放線菌呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)，說明在青枯菌脅迫下促進(jìn)了根際細(xì)菌和放線菌的增殖，并提高了根際微生物總量。

3&nbsp;討論與結(jié)論

采用嫁接技術(shù)防治番茄青枯病報(bào)道較多且廣泛應(yīng)用?？共≌枘炯藿涌捎行Ы档头训奶镩g發(fā)病率和病情指數(shù)，增強(qiáng)其抗病能力，從而提高番茄的品質(zhì)和產(chǎn)量。本研究中，感病番茄品種自根嫁接植株（CK）青枯病發(fā)病率超過93%;采用抗病砧木嫁接，植株發(fā)病率和病情指數(shù)極顯著降低，達(dá)到高抗（HR）或抗?。≧）水平。

嫁接換根可以改變番茄根際微生物的群落多樣性，抑制青枯菌的生長和繁殖。本研究結(jié)果表明，人工接種青枯菌條件下，在發(fā)病末期（S4），砧穗嫁接和砧木自根嫁接植株砧木莖和接穗莖中青枯菌數(shù)量均顯著低于CK，說明抗病砧木嫁接能夠抑制青枯菌在植株體內(nèi)增殖，并有效阻止青枯菌向植株根系和地上莖部侵染。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，砧穗嫁接植株和砧木自根嫁接植株各部位中青枯菌數(shù)量在發(fā)病初期（S2）達(dá)到峰值，而CK則延后，在發(fā)病高峰期（S3）達(dá)到峰值;發(fā)病初期，茄砧嫁接植株（No.21/No.21、Fb/No.21）根際基質(zhì)和根系內(nèi)青枯菌數(shù)量水平均顯著高于番砧嫁接植株（No.1/No.1、Fb/No.1），說明茄砧嫁接植株前期根系抑制青枯菌增殖和侵染植株根系的作用要弱于番砧嫁接植株，但進(jìn)入發(fā)病高峰期后，茄砧嫁接植株根際基質(zhì)及根系中青枯菌數(shù)量顯著降低，與番砧嫁接植株無顯著差異。以上說明，青枯菌在不同嫁接組合中的侵染和增殖速度有差異，這可能跟砧木根系的組織結(jié)構(gòu)或嫁接植株體內(nèi)分泌的抑菌活性物質(zhì)有關(guān)。另外，植株體內(nèi)的青枯菌數(shù)量從根系到地上莖部遞減分布，呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化。

劉業(yè)霞等（2012）在嫁接辣椒的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，嫁接能夠提高辣椒根際土壤中放線菌和細(xì)菌的數(shù)量。劉娜等（2014）采用抗病砧木嫁接發(fā)現(xiàn)，嫁接后番茄根際土壤氨化細(xì)菌、自生固氮菌等有益微生物數(shù)量增加，而真菌數(shù)量減少。細(xì)菌型土壤向真菌型土壤轉(zhuǎn)化往往標(biāo)志著土壤微生態(tài)環(huán)境的惡化，根際真菌數(shù)量的增加可能是導(dǎo)致土傳病害發(fā)病率升高的重要原因（尹玉玲等，2008）。本研究中，在接種前（S1），各嫁接組合根際基質(zhì)水平一致，微生物總量無明顯差異;接種后，砧穗嫁接和砧木自根嫁接植株的根際微生物總量顯著提高且隨著發(fā)病期的延長仍能維持較高水平。在發(fā)病初期，根際細(xì)菌、真菌和放線菌的數(shù)量劇烈變化，砧穗嫁接和砧木自根嫁接植株根際細(xì)菌和放線菌數(shù)量較CK顯著增加。發(fā)病高峰期至發(fā)病末期，砧穗嫁接植株根際真菌數(shù)量明顯降低，顯著低于其他嫁接組合，分析可能是由砧穗互作引起;CK根際真菌數(shù)量則較發(fā)病初期分別增加了49.06%和21.70%，同時(shí)病情指數(shù)分別提高了44.36%和59.68%。

通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，不同嫁接組合的病情指數(shù)和發(fā)病率同細(xì)菌和放線菌數(shù)量呈顯著正相關(guān)，而與真菌數(shù)量呈極顯著負(fù)相關(guān)。以上結(jié)果說明，抗病砧木嫁接顯著提高了植株根際細(xì)菌和放線菌的數(shù)量，降低了真菌的數(shù)量，改善了嫁接植株根際土壤狀況。

植物可通過根系分泌物的作用在根際形成并維持一個(gè)特殊的微環(huán)境，植物能夠通過根系分泌物與根際微生物之間的協(xié)同作用抵抗生物脅迫或非生物脅迫，與植物的抗病性密切相關(guān)（Baetz & Martinoia，2014;Haichar et al.， 2014）。本研究中，抗病砧木及嫁接番茄能否通過根系分泌物直接或間接地抑制青枯菌的生長和繁殖，含有哪些特異的活性物質(zhì)等方面仍有待進(jìn)一步研究。

綜合本研究結(jié)果，采用抗病砧木嫁接顯著提高了番茄對(duì)青枯病的抗性水平，可以有效抑制根際青枯菌的增殖和對(duì)植株的侵染，從而降低嫁接植株發(fā)病率或減緩其發(fā)病程度。在人工接種青枯菌條件下，抗病砧木嫁接植株的根際細(xì)菌、真菌和放線菌數(shù)量均呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢，細(xì)菌和放線菌數(shù)量顯著升高，而真菌數(shù)量則顯著降低。抗病砧木嫁接對(duì)改善植株根際土壤微環(huán)境，降低番茄田間青枯病發(fā)病率具有重要作用。

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