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    濾紙干血片保存方式對產(chǎn)前篩查標(biāo)志物檢測結(jié)果的影響

    2019-09-09 03:11:27王莉王青隨瑞枝宋旭梅馬菊梅劉燕翔張翠霞芮淑賢
    現(xiàn)代儀器與醫(yī)療 2019年2期
    關(guān)鍵詞:時(shí)間溫度

    王莉 王青 隨瑞枝 宋旭梅 馬菊梅 劉燕翔 張翠霞 芮淑賢

    [摘要]目的:探討產(chǎn)前篩查濾紙干血片標(biāo)本保存時(shí)間和保存條件對AFP、Freeβ-HCG檢測結(jié)果的影響。方法:采集50例孕婦血樣,每例均制備兩份濾紙干血片標(biāo)本,每一份上面包括3個(gè)血斑。一組29C~8C冷藏;另一組室溫20°C~25°C保存。分別在保存第2d、7d、14d時(shí),用TALENT-II半自動時(shí)間分辨熒光免疫分析儀檢測AFP、Freeβ-HCG。結(jié)果:室溫組和冷藏組在2d、7d、14dAFP和Freeβ-HCG檢測結(jié)果比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,AFP和Freeβ-HCG冷藏組在2d、7d、14d的結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AFP和Freeβ-HCG室溫組在2d、7d、14d的結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:濾紙干血片標(biāo)本在冷藏2°C~8C、室溫20°C~25°C均可穩(wěn)定保存至14d。開展篩查時(shí)應(yīng)注重標(biāo)本保存條件和運(yùn)輸時(shí)間,確保標(biāo)本質(zhì)量和篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    [關(guān)鍵詞]濾紙干血片法;產(chǎn)前篩查;時(shí)間;溫度

    中圖分類號:R394

    文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

    文章編號:2095-5200(2019)02-041-04

    DOI:10.11876/mimt201902011

    中孕期唐氏綜合征(DS)血清學(xué)產(chǎn)前篩查的常用標(biāo)志物包括甲胎蛋白(AFP).游離β人類絨毛膜促性腺激素(Freeβ-HCG)、游離雌三醇(uE3)和抑制素A(InhA)。血清標(biāo)本應(yīng)在49C~8C保存,不超過7d"。AFP為相對穩(wěn)定的蛋白類物質(zhì),HCG相對不穩(wěn)定,血清標(biāo)本靜置的時(shí)間和溫度(室溫、37C)對結(jié)果影響很大。分離后的血清在49C~8C條件下可穩(wěn)定保存1周,遠(yuǎn)距離運(yùn)輸時(shí)應(yīng)有冷鏈系統(tǒng),保證保存環(huán)境B。產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)和采血機(jī)構(gòu)不在同一醫(yī)療機(jī)構(gòu)時(shí),需要先分離出血清再保存、運(yùn)送,運(yùn)輸距離和保存條件不達(dá)標(biāo)導(dǎo)致邊遠(yuǎn)地區(qū)的孕婦不能進(jìn)行產(chǎn)前篩查,影響了產(chǎn)前篩查的大規(guī)模開展。干血斑法最早于1963年首次用于代謝性疾病的大規(guī)模篩查,后應(yīng)用于新生兒疾病的篩查。其具有成本低廉、血樣采集方法簡單、減少溶血和樣本降解、不需要離心、在高溫情況下穩(wěn)定、減少了運(yùn)輸和儲存費(fèi)用等優(yōu)勢。濾紙干血片技術(shù)應(yīng)用于產(chǎn)前篩查領(lǐng)域是一項(xiàng)比較新的技術(shù)。已有文獻(xiàn)報(bào)道顯示同一孕婦血清學(xué)法和干血片法兩種檢測方法有很好的相關(guān)性,檢測AFP、Freeβ-HCG結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示血清法和濾紙干血片兩種方法有很好一致性。

    為確保檢驗(yàn)前標(biāo)本質(zhì)量及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,就有必要對產(chǎn)前篩查濾紙干血片標(biāo)本的保存時(shí)間及保存條件對AFP和Freeβ-HCG含量影響進(jìn)行探討。相比已有報(bào)道,本研究延長了保存時(shí)間、擴(kuò)大了保存溫度范圍,進(jìn)一步研究時(shí)間和溫度對標(biāo)本的影響。

    1對象與方法

    1.1研究對象

    50例孕15+6~20*周中孕期孕婦,單胎,取得其產(chǎn)前篩查的知情同意后,進(jìn)行血清學(xué)唐氏篩查時(shí)同時(shí)制備干血片標(biāo)本。

    1.2濾紙干血片法儀器和試劑

    TALENT-II半自動時(shí)間分辨熒光免疫分析儀;FWZ-I型微量振蕩器;DEM-3自動洗板機(jī);打孔器;配套試劑AFP試劑盒(批號:20160706);Freeβ-HCG試劑盒(批號:20160706)。

    1.3標(biāo)本采集

    每例孕婦采集1管靜脈血液標(biāo)本,采集標(biāo)本的容器為干燥真空采血管、不含任何添加劑,采樣量為3~5mL。采集后,每份靜脈血標(biāo)本再用移液器吸取制備兩份濾紙干血片標(biāo)本(注:每一份上面包括3個(gè)血斑。制備過程需快,以防血液凝集。每個(gè)血斑血量50uL,直徑8mm,兩面滲透,無重疊,室溫干燥2h后,將兩份分別放人兩個(gè)干燥避光密封袋內(nèi)。實(shí)驗(yàn)濾紙片采用廣州豐華生物科技有限公司提供的產(chǎn)前篩查采血卡),剩余i血液3000r/min,離心10min,分離血清,2°C~8°C保存待檢測。

    1.4分組檢測

    按不同的保存條件分為冷藏組、室溫組。將濾紙干血片標(biāo)本放入干燥避光密封袋內(nèi),一組2°~8C冷藏;另一組室溫20°C~25C保存。分別在保存第2d、7d、14d時(shí),用TALENT-II半自動時(shí)間分辨熒光免疫分析儀采用DELFIA法檢測AFP、Freeβ-HCG。

    1.5統(tǒng)計(jì)方法

    分析軟件SPSS22.0軟件包,相同保存時(shí)間不同保存條件樣本檢測結(jié)果比較,采用t檢驗(yàn);相同保存條件不同保存時(shí)間樣本檢測結(jié)果比較,采用F檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1不同保存條件對干血片中AFP、Freeβ-HCG含量的影響

    室溫組和冷藏組在2d、7d、14dAFP和Freeβ-HCG檢測結(jié)果比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表1。

    2.2保存天數(shù)對干血片中AFP、Freeβ-HCG含量的影響

    如表2所示,AFP冷藏組在2d、7d、14d的結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn),F(xiàn)=1.894,P=0.155>0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AFP室溫組在2d、7d、14d的結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn),F(xiàn)=1.184,P=0.310>0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即室溫保存和29C~8C保存未發(fā)現(xiàn)干血片中AFP含量隨著時(shí)間的延長檢測值發(fā)生顯著變化。

    如表3所示,F(xiàn)reeβ-HCG冷藏組在2d、7d、14d的結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn),F(xiàn)=0.516,P=0.598>0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Freeβ-HCG室溫組在2d、7d、14d的結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn),F(xiàn)=0.683,P=0.507>0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即室溫保存和2°C~89C保存未發(fā)現(xiàn)干血片中Freeβ-HCG含量隨著時(shí)間的延長檢測值發(fā)生顯著變化。

    3討論

    出生缺陷指嬰兒出生時(shí)就存在的身體結(jié)構(gòu)、功能或代謝異常,是嚴(yán)重影響兒童體格生長和智力發(fā)育的疾病。出生缺陷已成為世界上嬰兒死亡、兒童和成人殘疾的主要原因之一。在我國,出生缺陷已經(jīng)成為導(dǎo)致殘疾的重要原因,而最常見的出生缺陷疾病為唐氏綜合征(Downsyndrome,DS)、愛德華綜合征(Edwardssyndrome,ES)、開放性神經(jīng)管缺陷(openneuraltubedefect,ONTD)3種,這三種出生缺陷病均可在孕中期產(chǎn)檢時(shí)進(jìn)行篩查和診斷。迄今為止,染色體異常還沒有有效的治療手段。提高產(chǎn)前篩查檢測質(zhì)量,擴(kuò)大產(chǎn)前篩查覆蓋的區(qū)域,降低DS等疾病嬰兒出生率是所有地區(qū)衛(wèi)生機(jī)構(gòu)和檢測機(jī)構(gòu)最關(guān)注的問題。濾紙干血片標(biāo)本用于產(chǎn)前篩查生物安全性高,標(biāo)本易保存、易運(yùn)送、方便快捷,更適合大規(guī)模開展篩查工作。

    干血片有便于采集、便于轉(zhuǎn)運(yùn)、經(jīng)濟(jì)適用、易于保存等優(yōu)點(diǎn),在國外,廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué),流行病學(xué)及新生兒篩查等。國內(nèi)可以成功建立起新生兒疾病篩查方法和系統(tǒng),也正是充分利用了干血片標(biāo)本的這些優(yōu)點(diǎn)。

    文獻(xiàn)報(bào)道AFP、Freeβ-HCG干血片法檢測結(jié)果在(18C+1C)48h內(nèi)檢測結(jié)果無顯著差異[10。也有報(bào)道AFP濾紙干血片在-20C、4°C、25C下均可保存28d,但在35°C下最長可以保存12d;Freeβ-HCG濾紙干血片在-20C及49C下均可保存28d,室溫下可保存6d,35°C下最長可以保存3d179.161。還有文獻(xiàn)報(bào)道Freeβ-HCG及AFP在血片中置4C條件下保存至少可穩(wěn)定60d。AFP血片密封保存于4C時(shí)可以保存半年,室溫環(huán)境37°C下可穩(wěn)定保存1個(gè)月。Freeβ-HCG血片密封保存,常溫下保存35d其檢測水平變化在10%以內(nèi),4°C可以保持。綜合以上文獻(xiàn),F(xiàn)reeβ-HCG在高溫35C以上不穩(wěn)定,影響了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    結(jié)合本地區(qū)特點(diǎn),本研究選取了209C~25°C作為室溫保存條件,結(jié)果顯示:室溫組與冷藏組相同保存時(shí)間檢測結(jié)果比較,組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。標(biāo)本中分析物在室溫(20°~25C)和冷藏(2C~8C)均穩(wěn)定保存。不同保存時(shí)間的檢測結(jié)果比較,分析物AFP和Freeβ-HCG含量隨著時(shí)間的延長檢測結(jié)果未發(fā)生顯著變化。濾紙干血片標(biāo)本AFP、Freeβ-HCG在2C~8C、室溫約20~25C均可穩(wěn)定保存至少14d,與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相符。本研究結(jié)果有一定局限性,主要是由于實(shí)驗(yàn)室室溫相對恒定,因此產(chǎn)生局限性。

    與血清相比,濾紙干血片法分析物在血片中更穩(wěn)定,不易受環(huán)境溫度和保存時(shí)間的影響。但在大規(guī)模產(chǎn)前篩查中可能會出現(xiàn)各種未知因素影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此,標(biāo)本的運(yùn)輸和保存仍是分析前質(zhì)量管理最關(guān)鍵的步驟,各基層采血機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制。濾紙干血片用于產(chǎn)前篩查,低溫保存和運(yùn)輸最為可靠,當(dāng)不能滿足低溫保存時(shí),應(yīng)當(dāng)盡可能將運(yùn)輸環(huán)境溫度維持在25C以下,盡快將采集好的干血片標(biāo)本送至檢測機(jī)構(gòu),以確保檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量,減少因檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確導(dǎo)致的漏診。對于高風(fēng)險(xiǎn)孕婦,需充分告知其知情,進(jìn)行胎兒羊水細(xì)胞核型分析,及時(shí)發(fā)現(xiàn)胎兒染色體異常,結(jié)合分子檢測、細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),降低出生缺陷,提高出生嬰兒的健康水平。

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