不同脂肪水平飼料中添加膽汁酸對大菱鲆生長和肌肉脂肪酸組成的影響

畢錚錚　吳立新　李曉美　梁啟航　楊冠男　王異華

摘要在粗脂肪水平分別為10%、14%和18%的3種試驗(yàn)飼料中添加0.09%的膽汁酸，投喂初始體重為（23.12+0.10）g的大菱鲆49d，研究不同脂肪水平下膽汁酸對大菱鲆生長和肌肉脂肪酸組成的影響。結(jié)果表明，隨著飼料脂肪水平的升高，終末體重、增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率均顯著升高，飼料系數(shù)顯著降低（P<0.05）;飼料脂肪水平對大菱鲆肌肉飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸以及多不飽和脂肪酸的含量無顯著影響（P>0.05）;3組試驗(yàn)魚肌肉的脂肪酸組成均顯示多為不飽和脂肪酸>飽和脂肪酸>單不飽和脂肪酸的趨勢，但無顯著差異（P>0.05），n-3/n-6比值呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。綜上所述，膽汁酸水平為0.09%、飼料脂肪水平為18%時，更能促進(jìn)大菱鲆生長發(fā)育，但不會改變其肌肉脂肪酸組成。

關(guān)鍵詞 大菱鲆;膽汁酸;生長;脂肪酸

中圖分類號 S963

文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 1007-5739（2019）07-0190-02

膽汁酸是膽汁的重要組成成分，具有較強(qiáng)的表面活性，能降低油水兩相間的表面張力及降低甘油三酯水平，促進(jìn)脂類乳化，能不同程度地改變魚類對脂溶性維生素的吸收利用和不同組織中脂肪酸占組織油脂的質(zhì)量比;擴(kuò)大脂肪和脂肪酶的接觸面積，從而加速脂類消化吸收，增強(qiáng)魚類的免疫機(jī)能14。大菱鲆（Scophthalmus?maximus）又名多寶魚，屬鲆科（Bothidae）菱鲆屬（Scophthalmus），易適應(yīng)集約化養(yǎng)殖，生長迅速、肉味鮮美、經(jīng)濟(jì)價值高，其工廠化養(yǎng)殖規(guī)模居全球之首，是我國北方重要的海水養(yǎng)殖魚類。有關(guān)膽汁酸在水產(chǎn)動物配合飼料中的研究已有報道，但在大菱鲆配合飼料中的研究較少。孫建珍等5研究在不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆生長和脂肪代謝的影響，其膽汁酸添加量為廠家推薦量的1.5%;黃炳山等0進(jìn)一步研究得出膽汁酸最適添加量為0.09%。本試驗(yàn)在其基礎(chǔ)上以大菱鲆為研究對象，在0.09%膽汁酸水平下設(shè)計3種脂肪水平不同的配合飼料，研究其對大菱鲆生長性能、肌肉脂肪酸的影響，以期為大菱鲆配合飼料中膽t酸的應(yīng)用提供理論參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)飼料中主要蛋白源為魚粉和豆粕，以魚油作為主要的脂肪源，通過調(diào)整配合飼料中魚油和羧甲基千維素的含量，配制3種試驗(yàn)飼料，粗脂肪含量分別為10%、14%、18%，依次命名為B1o、B14和B18組，每組設(shè)3個重復(fù)組。在3種飼料中分別添加0.09%的膽？十酸。配合飼料的原料經(jīng)粉碎處理之后，使用60目網(wǎng)篩進(jìn)行篩選，依據(jù)飼料配方，逐級擴(kuò)大混勻后用制粒機(jī)進(jìn)行擠壓制粒，制成粒徑為2mm的顆粒狀飼料，自然風(fēng)千至飼料中水分含量降至10%左右，而后置于-20C冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)飼料配方和基本營養(yǎng)組成詳見表1。

膽十酸為山東龍昌動物保健品有限公司提供，以玉米淀粉為載體，純度為20%。

1.2養(yǎng)殖試驗(yàn)設(shè)計及管理

試驗(yàn)用魚購自大連天正實(shí)業(yè)有限公司。以普通商品飼料馴養(yǎng)2周。試驗(yàn)開始前，將魚饑餓24h，選取體質(zhì)健康、規(guī)格均勻、體重（23.12+0.10）g的試驗(yàn)魚108尾。試驗(yàn)共設(shè)3組，分別為Bro（10%）、B14（14%）和B1s（18%）組，每組設(shè)3個重復(fù)，共9個水族箱（60cmx45cmx40cm，實(shí)際水量90L），每個水族箱放人12尾魚，飼養(yǎng)49d。

試驗(yàn)期間，以砂濾后的海水為水源，日換水1次，換水量為1/3～1/2，水溫控制在14.0～19.0C之間，溶解氧>6.0mg/L，氨氮<0.1mg/L，pH值為8.0～8.1;光照采用日光燈控制，周期為12L12D。每日飽食投喂2次（7：30和17：30），投喂30min后收集殘餌。

1.3樣品采集及分析

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，將試驗(yàn)魚再次禁食24h，記錄每槽魚數(shù)量并計算成活率，對每槽魚稱總重并計算增重率。從每槽中隨機(jī)抽取8尾試驗(yàn)魚，測量體質(zhì)量和體長，計算肥滿度;在冰盤上解剖分離內(nèi)臟團(tuán)、肝胰臟稱重，計算肝體比、臟體比;取背部肌肉，用于脂肪酸分析。所有樣品均需置于-80C保存?zhèn)溆谩?/p>

飼料中常規(guī)營養(yǎng)成分的測定，需要參照AOAC（1995）方法。粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮半微量法進(jìn)行測定;粗脂肪含量測定采用索氏抽提法，并以石油醚為抽提液;粗灰分含量通過在馬福爐中550C灼燒8h測定。

1.3.1生長性能測定公式。具體如下：

增重率/%=100x（Wt-W0）/W0;

特定生長率/（%/d）=100x（lnWt-lnW0）/d;

飼料系數(shù)=FI/（Wt-W0）;

蛋白質(zhì)效率/%=l00x（Wt-W0）（FIxCp）;

攝食率/%=l00xF/[（Wt+W0）/2/d];

肝體比/%=l00xWH/WB;

臟體比/%=100xWV/WB;

肥滿度/（g/cm3）=l00xWB/LB';

存活率/%=l00xNs/Ne。

式中，Wt為末體重（g）;W0為初體重（g）;FI為攝食飼料千重量（g）;d為飼養(yǎng)天數(shù);Cp為飼料中粗蛋白含量（%）;WH為肝胰臟質(zhì)量（g）;WI為腸道質(zhì)量（g）;WV為內(nèi)臟團(tuán)質(zhì)量（g）;WB為體質(zhì)量（g）;LB為體長（em）;Ns為存活尾數(shù)，Ne為試驗(yàn)魚尾數(shù)。

1.3.2肌肉脂肪酸含量的測定。參照氯仿一甲醇法和氫氧化鉀一甲醇酯化法對分析樣品中總脂肪進(jìn)行提取，將方法略做改進(jìn)，樣品經(jīng)皂化一甲酯化后，用日本島津GC-2010高效氣相色譜儀分析。色譜條件：FFAP抗氧化交聯(lián)石英毛細(xì)管色譜柱，30mx0.25mmx0.3μm;載氣為高純氮，空氣流速400m[/min，氫氣流速為40mL/min;氣化室溫度穩(wěn)定在260C;分流比100：1;氫離子火焰檢測器（FID），溫度260C;采用程序升溫法，起始溫度160C，保持5min后，以2C/min進(jìn)行升溫，當(dāng)升溫至230C時，維持10min;進(jìn)樣量為1μL。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜峰的保留時間和文獻(xiàn)值來綜合鑒定脂肪酸，計算脂肪酸的相對百分含量采用峰面積歸一化法。

1.4統(tǒng)計分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值+標(biāo)準(zhǔn)差表示。用軟件SPSS21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析;若存在顯著差異時則用Dun一can's法進(jìn)行處理間多重比較，顯著性水平為P<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆生長性能的影響

由表2可知，不同脂肪水平下添加膽汁酸的Bro、B14Bi83個組相比，隨著脂肪水平的升高，終末體重、增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率均顯著升高，飼料系數(shù)則顯著降低（P<0.05）。肥滿度和肝體比隨飼料脂肪水平的增加而增加，當(dāng)飼料脂肪水平達(dá)14%時繼續(xù)增加飼料脂肪水平，大菱鲆肥滿度和肝體比則不再有顯著變化（P>0.05）。在試驗(yàn)期間，個別組大菱鲆有死亡：現(xiàn)象，但無顯著差異（P>0.05）。

2.2不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆脂肪酸組成的影響

如表3所示，在SFA中，C14：0、C15：0、C16：0和C18：0各組間差異不顯著，在18%的脂肪水平下C17：0顯著升高，而C20：0卻顯著下降（P<0.05）。在MUFA中，C18：1n-9和C22：1各組間無顯著差異，B18組的C16：1n-7和C18：1n-7顯著高于B10，而C20：1則顯著低于B1o（P<0.05）。在PUFA中，C18：3n-3.C18：4n-3.C20：3n-3.C22：5n-3和DHA各組間差異不顯著，在18%脂肪水平下C22：4n-6和C20：5n-3顯著升高而C18：2n-6、C20：2n-6則顯著下降（P<0.05），C22：5n-6和C20：4n-6在B14顯著升高。不同脂肪水平大菱鲆肌肉的脂肪酸組成顯示PUFA>SFA>MUFA，n-3/n-6比值呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢;SFA、MUFAPUFA的含量均無顯著差異（P>0.05）。

3討論與結(jié)論

3.1不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆生長的影響

在飼料中添加0.09%膽汁酸，且飼料中脂肪水平低于18%時，隨飼料脂肪水平的升高大菱鲆的增重率、特定生長率、蛋白質(zhì)效率均顯著升高，飼料系數(shù)顯著下降，對大菱鲆有明顯的促進(jìn)生長作用。其原因可能是膽汁酸能夠促進(jìn)脂肪乳化，擴(kuò)大脂肪與脂肪酶的接觸面積，加速脂肪的消化吸收，提高飼料利用率，降低餌料系數(shù)，從而促進(jìn)魚類生長。隨著脂肪水平的增加蛋白質(zhì)效率提高，可以減少蛋白質(zhì)作為能量被消耗，讓更多蛋白質(zhì)作用于魚類機(jī)體構(gòu)建上，同樣達(dá)到促進(jìn)魚類生長的目的。孫建珍研究表明，在不同脂肪水平飼料中添加1.5%膽汁酸對大菱鲆生長研究發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)魚的增重率.特定生長率和蛋白質(zhì)效率隨著脂肪水平呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，16%脂肪組達(dá)到最大值，飼料系數(shù)呈現(xiàn)相反趨勢，與本試驗(yàn)結(jié)果不同，這可能是由于試驗(yàn)用魚大小不同造成的試驗(yàn)結(jié)果差異;楊俊江8研究表明，脂肪水平為15%和18%時，10.02g斜帶石斑幼魚的終末體重高于102.8g斜帶石斑中魚，在相似的脂肪水平下本試驗(yàn)中大菱鲆的終末體重與其試驗(yàn)結(jié)果相似。本試驗(yàn)中膽頭十酸添加量為0.09%，是以黃炳山阿對大菱鲆飼料中添加膽十酸的研究中所得最適添加量為依據(jù)，與孫建珍的研究在飼料中添加1.5%膽汁酸具有促進(jìn)大菱鲆幼魚生長的效果基本相同，說明高脂飼料中低水平膽十酸可以達(dá)到相同的促生長效果。

3.2不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆肌肉脂肪酸的影響

不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆肌肉脂肪酸有顯著影響。孫建珍等研究發(fā)現(xiàn)，在膽汁酸1.5%的條件下，飼料中添加油脂改變了SFA、MUFA.PUFAn-3PUFA、n-6PUFA的百分含量。本研究發(fā)現(xiàn)，膽汁酸添加量為0.09%，3個不同脂肪水平下對大菱鲆肌肉中SFA、MUFAPUFA的含量無顯著影響。本試驗(yàn)與王恒9的研究結(jié)果一致，但與孫建珍試驗(yàn)結(jié)果不同，這可能與試驗(yàn)魚規(guī)格、飼料脂肪水平、脂肪源、試驗(yàn)條件等因素有關(guān)。

3.3結(jié)論

在粗脂肪含量為10%、14%和18%的不同脂肪水平下添加膽汁酸0.09%，研究發(fā)現(xiàn)，隨著脂肪水平的升高，增重率特定生長率、蛋白質(zhì)效率均顯著升高，飼料系數(shù)則下降;在添加0.09%膽汁酸的前提下，隨著飼料中魚油水平的提高，大菱鲆肌肉肌肉飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸的含量基本不隨魚油水平的增加而變化。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，膽汁酸水平為0.09%、飼料脂肪水平為18%時，更能促進(jìn)大菱鲆生長。

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