國產(chǎn)Bt-Cry1Ab和Bt-(Cry1Ab+Vip3Aa)玉米對草地貪夜蛾的抗性測定

張丹丹 吳孔明

摘要 草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda（J. E. Smith）是世界性重大農(nóng)業(yè)害蟲。種植轉(zhuǎn)基因Bt作物是主要的防治手段之一。我們利用室內(nèi)生物測定方法評價了國產(chǎn)Bt-Cry1Ab玉米（轉(zhuǎn)化體C0030.3.5）和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米（轉(zhuǎn)化體DBN3601和DBN3608）對草地貪夜蛾1～4齡幼蟲的毒力。結(jié)果顯示，供試兩種轉(zhuǎn)基因玉米共6個品種皆可高效表達目標(biāo)殺蟲蛋白并對草地貪夜蛾具有很強的毒殺作用，對1齡幼蟲的致死率達到59%～100%，存活幼蟲的生長發(fā)育亦受到顯著抑制。表明國內(nèi)研發(fā)的Bt-Cry1Ab玉米和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米對草地貪夜蛾具有良好的控制效果，其中Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米的防治效果顯著優(yōu)于Bt-Cry1Ab玉米，兩種轉(zhuǎn)基因玉米皆具有較好的商業(yè)化應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞 草地貪夜蛾; Bt-Cry1Ab玉米; Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米; 控制效果

中圖分類號： S 435.132

文獻標(biāo)識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019251

草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda（J. E. Smith）是一種原分布于美洲大陸熱帶和亞熱帶地區(qū)的雜食性害蟲[1]，其寄主植物多達76個科，353種[2]。同其他重大遷飛性農(nóng)業(yè)害蟲一樣，具有“國際性、遷飛性、暴發(fā)性和毀滅性”的特點[3]，目前已成為世界范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅糧食安全的重大生物災(zāi)害。其幼蟲取食為害玉米，低齡幼蟲取食玉米葉片可造成“窗孔”形癥狀。高齡幼蟲除了取食葉片造成孔洞外，還為害心葉、葉鞘、雄穗和果穗等部位[4]，對玉米產(chǎn)量造成嚴(yán)重影響。據(jù)報道，20世紀(jì)60年代，在阿根廷東北部，草地貪夜蛾造成玉米產(chǎn)量損失高達70%。2000年，在阿根廷西北部地區(qū)，被草地貪夜蛾為害的玉米植株所占比例高達71%[5]。在巴西，草地貪夜蛾可使玉米減產(chǎn)34%，每年造成近4億美元的經(jīng)濟損失[6]。2018年，在非洲西部的加納，草地貪夜蛾造成玉米產(chǎn)量平均損失26.6%（最高40%），經(jīng)濟損失1.77億美元，在非洲中南部的贊比亞，造成玉米產(chǎn)量平均損失35%（最高50%），經(jīng)濟損失1.59億美元[78]。

化學(xué)防治是控制草地貪夜蛾為害的主要方法[9]，但由于草地貪夜蛾幼蟲常在玉米葉背面和心葉里取食為害，高齡幼蟲甚至?xí)@蛀到植株內(nèi)部，使藥劑無法充分接觸到蟲體，往往達不到良好的防控效果[10]。同時，隨著化學(xué)殺蟲劑的持續(xù)頻繁使用，草地貪夜蛾種群逐漸產(chǎn)生了抗藥性，據(jù)報道，在美洲部分地區(qū)，草地貪夜蛾已對氨基甲酸酯類、有機磷酸酯類和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥產(chǎn)生抗性[8]，導(dǎo)致化學(xué)防治效果不斷降低。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的研發(fā)和商業(yè)化種植為控制草地貪夜蛾開辟了新途徑，且已成為美洲大陸熱帶和亞熱帶地區(qū)防控草地貪夜蛾應(yīng)用最廣泛的技術(shù)手段。目前為止，表達Cry1F、Cry1Ab或Cry1A.105+Cry2Ab2蛋白的Bt玉米已在美國、加拿大和南美部分國家商業(yè)化種植，其中，Cry1F玉米‘TC1507的種植最為廣泛[11]。在南非，2018年11月，草地貪夜蛾被列為表達Cry1A.105+Cry2Ab2蛋白的‘MON89034玉米（Bt2）的靶標(biāo)害蟲[12]。目前在美洲或非洲批準(zhǔn)種植的轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米有‘MON810、‘Bt11、‘MON89034、‘MON89034×TC1507、‘MIR162、‘Bt11×MIR162和‘MON810×TC1507×MIR162等，表達的蛋白類型有Cry1Ab、Cry1F、Cry2Ab2、Cry1A.105和Vip3Aa20[10]。

草地貪夜蛾于2019年1月侵入我國云南省[13]，截至5月10日，已在云南、廣西、廣東、貴州、湖南、海南、福建、浙江、湖北、四川、江西13?。▍^(qū)）261個縣（市、區(qū)）發(fā)現(xiàn)其為害，總發(fā)生面積超過6.7萬hm2，已對我國玉米生產(chǎn)構(gòu)成重大威脅。根據(jù)取食寄主植物的嗜好性，草地貪夜蛾被分為喜歡取食玉米的“玉米型”和喜食水稻的“水稻型”[1415]。對入侵種群的分子鑒定結(jié)果顯示，目前我國各地草地貪夜蛾均為玉米型[16]。為了發(fā)展防治草地貪夜蛾新技術(shù)，我們在室內(nèi)利用人工接蟲至玉米葉片的方法測定了國產(chǎn)Bt-Cry1Ab（轉(zhuǎn)化體C0030.3.5）和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米（轉(zhuǎn)化體DBN3601和DBN3608）對草地貪夜蛾1～4齡幼蟲的抗性效果。

1 材料與方法

1.1 供試Bt玉米

Bt玉米由北京大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司提供，其中‘C0030.3.5-鄭單958和‘C0030.3.5-農(nóng)華106是Bt-Cry1Ab單基因抗蟲玉米，‘DBN3601-鄭單958、‘DBN3608-鄭單958、‘DBN3601-農(nóng)華106和‘DBN3608-農(nóng)華106均是Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）雙基因抗蟲玉米，‘鄭單958和‘農(nóng)華106是對照常規(guī)玉米。所有玉米品種均置于溫度為（26±1）℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 供試蟲源

供試草地貪夜蛾種群于2019年1月19日采自云南省德宏州鮮食玉米田，共采集100余頭2～5齡幼蟲，在室內(nèi)用玉米葉片飼養(yǎng)至化蛹，成蟲羽化后用10%的白糖水飼喂以補充營養(yǎng)和水分。成蟲產(chǎn)卵后收集卵塊，孵化后的幼蟲用基于黃豆面和玉米面配制的人工飼料飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至不同齡期的幼蟲用于試驗。所有幼蟲和成蟲均置于溫度為（26±1）℃，濕度為60%±10%，光周期為L∥D=16 h∥8 h的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3 不同品種玉米葉片Cry1Ab和Vip3Aa蛋白表達量檢測

利用ELISA方法檢測玉米葉片中殺蟲蛋白含量。取V2-2葉期的玉米植株頂端第二片葉，每個品種以5片葉為1個生物學(xué)重復(fù)，共設(shè)3個生物學(xué)重復(fù)，每個生物學(xué)重復(fù)設(shè)3個技術(shù)重復(fù)。新鮮玉米葉片用液氮在研缽內(nèi)迅速研磨成粉末，加入提取液PBST（pH為7.4、濃度為0.01 mol/L的PBS+0.55% Tween 20），置于搖床上4℃過夜;12 000 r/min離心15 min，取上清液，用提取液適量稀釋;將Cry1Ab和Vip3Aa標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，在96孔酶標(biāo)板每孔加入50 μL enzyme-conjugate Cry1Ab或Vip3Aa后，分別加入50 μL樣品、陰性對照和標(biāo)準(zhǔn)品，用封口膜將酶標(biāo)板封閉，輕搖混勻20～30 s，置于搖床上（200 r/min） 1～2 h;用力棄去液體后，每孔加入200 μL洗滌液，反復(fù)洗滌3次后用吸水紙吸干;每孔加入100 μL顯色底物，用封口膜將酶標(biāo)板密封，外覆錫箔紙避光，輕搖混勻20～30 s，室溫放置15～30 min;每孔加入100 μL終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定OD值。

1.4 Bt-Cry1Ab和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米對不同齡期草地貪夜蛾幼蟲的抗性測定

抗蟲性試驗在玉米播種后10 d左右進行，在玉米生長期內(nèi)，不接觸其他任何殺蟲物質(zhì)。將新鮮的玉米植株插入盛有約2 cm高2%瓊脂的玻璃指形管內(nèi)（高12 cm，直徑3.3 cm），將不同齡期幼蟲接至玉米葉片上，1齡幼蟲每株幼苗接5頭，2齡、3齡和4齡幼蟲為避免自相殘殺對試驗結(jié)果的影響，每株幼苗接1頭，每個齡期50頭幼蟲為1個重復(fù)，設(shè)3個重復(fù)，共150頭幼蟲。指形管口用棉塞封閉防止幼蟲鉆出。然后置于溫度為（26±1）℃，濕度為60%±10%，光周期為L∥D=16 h∥8 h的培養(yǎng)箱內(nèi)。5 d后檢查幼蟲死亡率，用毛筆輕觸蟲體，不能正常爬行者視為死亡，并稱取在不同玉米植株上存活下來的幼蟲個體體重，計算體重抑制率。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

根據(jù)試驗數(shù)據(jù)，參照公式（1）和（2）計算各處理幼蟲的校正死亡率，參照公式（3）計算體重抑制率。

死亡率=處理后死亡試蟲數(shù)處理前供試總蟲數(shù)×100%（1）

校正死亡率=處理組死亡率-對照組死亡率1-對照組死亡率×100%（2）

體重抑制率=（對照組體重增加值-處理組體重增加值）對照組體重增加值×100%（3）

采用SAS 9.2統(tǒng)計分析軟件對所有數(shù)據(jù)進行方差分析，采用Duncan氏新復(fù)極差法進行多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種玉米葉片中Cry1Ab和Vip3Aa蛋白含量

2種Bt-Cry1Ab玉米、4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米以及2個對照常規(guī)玉米葉片中Cry1Ab、Vip3Aa及總蛋白含量見表1。ELISA檢測結(jié)果顯示，2種對照常規(guī)玉米的Cry1Ab含量均< LOQ，2種Bt-Cry1Ab玉米的Cry1Ab含量為75.55～87.75 μg/g，二者之間無顯著差異。而4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米Cry1Ab含量為86.05～101.64 μg/g，不同品種間也無顯著差異，但除Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-1（‘DBN3601-鄭單958）外，其他3種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米Cry1Ab含量均顯著高于Bt-Cry1Ab玉米-2。2種Bt-Cry1Ab玉米與2個對照常規(guī)玉米的Vip3Aa含量均< LOQ，4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米Vip3Aa含量為21.42～27.84 μg/g，彼此間無顯著差異。2種Bt-Cry1Ab玉米與2個對照常規(guī)玉米總蛋白含量無顯著差異，4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米中，Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-2總蛋白含量最高，為（406.74±8.66） mg/g，顯著高于Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-1，與其他2種無顯著差異。

2.2 Bt-Cry1Ab和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米對不同齡期草地貪夜蛾幼蟲的抗性

2.2.1 不同齡期草地貪夜蛾幼蟲取食Bt-Cry1Ab和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米后的死亡率

不同齡期草地貪夜蛾幼蟲取食Bt-Cry1Ab和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米后的特征見圖1。

室內(nèi)玉米葉片生測結(jié)果顯示：Bt-Cry1Ab玉米-1和Bt-Cry1Ab玉米-2飼喂的幼蟲其校正死亡率呈現(xiàn)出隨齡期增加而下降的趨勢。其中，1齡幼蟲的校正死亡率為59.23%～65.41%，2齡幼蟲的校正死亡率為40.80%～47.89%，對3、4齡幼蟲效果較差，校正死亡率僅為13.33%～34.14%。1、2、4齡幼蟲在2種Bt-Cry1Ab玉米上校正死亡率無顯著差異，3齡幼蟲在Bt-Cry1Ab玉米-2上的校正死亡率（34.14%±7.32%）顯著高于在Bt-Cry1Ab玉米-1上的校正死亡率（13.33%±0%）。

各齡幼蟲在4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米上的校正死亡率均顯著高于在兩種Bt-Cry1Ab玉米上的校正死亡率，在Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-1、Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-2、Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-3和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-4上，1、2齡幼蟲的校正死亡率均為100%±0%，3齡幼蟲的校正死亡率分別為86.67%±6.67%、84.44%±2.22%、95.12%±2.44%和95.12%±2.44%，1～3齡幼蟲在4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米上的校正死亡率之間沒有顯著差異。4齡幼蟲的校正死亡率在Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-4上最高，為77.27%±8.19%，顯著高于在Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-1上的校正死亡率53.02%±6.71%，后者與在Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-2和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米-3上的校正死亡率68.68%±2.24%和68.18%±6.01%無顯著差異（圖2）。

2.2.2 Bt-Cry1Ab和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米對不同齡期草地貪夜蛾幼蟲體重的影響

用電子天平稱取處理前及處理后5 d各齡期幼蟲體重，因1齡幼蟲太小，無法稱取處理前及取食轉(zhuǎn)Bt玉米后的體重，所以，該部分只分析了2、3和4齡幼蟲體重。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因玉米能顯著抑制幼蟲體重增加，取食轉(zhuǎn)基因玉米各齡期幼蟲的體重均顯著低于取食對照玉米的體重。Bt-Cry1Ab玉米-1和Bt-Cry1Ab玉米-2對2、3齡幼蟲的體重抑制率可達92.62%～107.97%，對4齡幼蟲的體重抑制率為59.50%～72.49%（表2）。在4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米上，2齡幼蟲5 d后死亡率均為100%，故無法稱取處理后體重。4種Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米對3齡幼蟲的體重抑制率為109.12%～122.22 %，對4齡幼蟲的體重抑制率為76.12%～92.43%。

3 討論

李國平等研究發(fā)現(xiàn)Cry1Ab、Cry1F、Vip3A和Cry2Ab蛋白對入侵草地貪夜蛾具有較強的致死作用，而Cry1Ac的效果較差，因此種植Cry1Ab、Cry1F或疊加的Cry1Ab（或Cry1F）+Vip3A、Cry1Ab（或Cry1F）+Cry2Ab玉米可控制草地貪夜蛾的發(fā)生與為害[17]。本研究結(jié)果顯示：取食Bt-Cry1Ab玉米，草地貪夜蛾幼蟲的校正死亡率為13.33%～65.41%，體重抑制率為59.50%～107.97%。如取食Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米，校正死亡率為53.02%～100%，體重抑制率為76.12%～122.22%。表明Bt-Cry1Ab玉米和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米對草地貪夜蛾1～4齡幼蟲均具有很好的防控效果，其中Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米的效果顯著優(yōu)于Bt-Cry1Ab玉米，供試Bt玉米對1、2齡低齡幼蟲的防治效果均顯著優(yōu)于對3、4齡高齡幼蟲的防治效果。

由于草地貪夜蛾的寄主作物較為廣泛，生產(chǎn)上需要將Bt玉米和化學(xué)農(nóng)藥協(xié)同使用才能實現(xiàn)區(qū)域性防控的目標(biāo)。趙勝園等的研究已表明，20%甲氰菊酯EC、15%唑蟲酰胺SC和25 g/L溴氰菊酯EC等對草地貪夜蛾卵具有較高的毒殺活性，1%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽EC、5%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽ME和75%乙酰甲胺磷SP等對草地貪夜蛾幼蟲具有較強的毒殺作用[9]。因此，在實際生產(chǎn)過程中，可基于各地作物種植結(jié)構(gòu)和草地貪夜蛾的發(fā)生規(guī)律，進一步構(gòu)建這些高效化學(xué)農(nóng)藥和Bt玉米協(xié)同防控的技術(shù)體系。

雖然轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米能夠有效控制草地貪夜蛾的為害，但是同化學(xué)殺蟲劑一樣，隨著Bt玉米的長時間、大規(guī)模種植，草地貪夜蛾在整個生長期就會持續(xù)處在Bt殺蟲蛋白的選擇高壓下，這樣就會逐漸演化出Bt抗性種群。波多黎各2003年開始商業(yè)化種植表達Cry1F的‘TC1507玉米，但2006年年底就發(fā)現(xiàn)草地貪夜蛾種群已對Cry1F玉米產(chǎn)生抗性[18]。2008年巴西首次引進Cry1Ab玉米（轉(zhuǎn)化體MON810），3年后發(fā)現(xiàn)草地貪夜蛾對其產(chǎn)生抗性，2009年引進Cry1F玉米，仍是3年時間便產(chǎn)生抗性，2010年引進Cry1A.105+Cry2Ab2玉米，到2013年在田間形成了抗性種群[19]。Huang等先后報道美國東南部草地貪夜蛾種群對Cry1F蛋白和Cry1A.105蛋白產(chǎn)生了抗性[2021]。2017年，Chandrasena等研究發(fā)現(xiàn)阿根廷草地貪夜蛾種群對Cry1F產(chǎn)生抗性[11]。

國際上雖然提出了多種抗性治理策略，但以高劑量庇護所和多基因策略的應(yīng)用最為廣泛。在中國，采用“天然庇護所策略”有效延緩了棉鈴蟲對Bt棉花的抗性發(fā)展，利用“人工庇護所策略”有效延緩了紅鈴蟲對Bt棉花的抗性發(fā)展，從而實現(xiàn)了Bt-Cry1A棉花的可持續(xù)種植[22]，這為Bt玉米的種植提供了成功經(jīng)驗。新殺蟲蛋白的研發(fā)也為Bt抗性治理提供更多的策略，如Bt營養(yǎng)期殺蟲蛋白（vegetative insecticidal proteins，Vips），該蛋白是蘇云金芽胞桿菌在對數(shù)生長期分泌產(chǎn)生的，與在芽胞形成期產(chǎn)生的Cry晶體蛋白無交互抗性。表達Vip3Aa20蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米已在美國、阿根廷和巴西等地商業(yè)化種植，該玉米可用于控制已對Cry殺蟲蛋白產(chǎn)生抗性的草地貪夜蛾種群。到目前為止，在美洲眾多商業(yè)化種植的Bt玉米中，草地貪夜蛾只對Vip3Aa20玉米仍然保持較高的敏感性，田間尚未發(fā)現(xiàn)該類玉米防治草地貪夜蛾失敗的現(xiàn)象[19]。

中國已有多家公司成功研發(fā)了Bt抗蟲玉米，我們對北京大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司研發(fā)的Bt-Cry1Ab（轉(zhuǎn)化體C0030.3.5）和Bt-（Cry1Ab+Vip3Aa）玉米（轉(zhuǎn)化體DBN3601和DBN3608）抗蟲性的測定表明，中國已具備了研發(fā)和商業(yè)化種植轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的能力。鑒于草地貪夜蛾等鱗翅目害蟲為害的嚴(yán)重性，應(yīng)盡快推動轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的商業(yè)化進程，要用先進的技術(shù)手段服務(wù)和支撐中國農(nóng)作物生產(chǎn)的高質(zhì)量發(fā)展。

參考文獻

[1] TODD E L， POOLE R W. Keys and illustrations for the armyworm moths of the noctuid genus Spodoptera Guenée from the western hemisphere [J]. Annals of the Entomological Society of America， 1980， 73（6）： 722738.

[2] MONTEZANO D. Host plants of Spodoptera frugiperda （Lepidoptera： Noctuidae） in the Americas [J]. African Entomology， 2018， 26（2）： 286300.

[3] 吳秋琳， 姜玉英， 吳孔明， 等. 草地貪夜蛾緬甸蟲源遷入中國的路徑分析[J]. 植物保護， 2019， 45（2）： 16.

[4] 姜玉英， 劉杰， 朱曉明. 草地貪夜蛾侵入我國的發(fā)生動態(tài)和未來趨勢分析[J]. 中國植保導(dǎo)刊， 2019， 39（2）： 3335.

[5] MURUA G， MOLINA O J， COVIELLA C. Population dynamics of the fall armyworm， Spodoptera frugiperda （Lepidoptera： Noctuidae） and its parasitoids in northwestern Argentina [J]. Florida Entomologist， 2006， 89（2）： 175182.

[6] LIMA M S， SILVA P S L， OLIVEIRA O F， et al. Corn yield response to weed and fall armyworm controls [J]. Planta Daninha， 2010， 28（1）： 103111.

[7] EARLY R， GONZALEZ-MORENO P， MURPHY S T， et al. Forecasting the global extent of invasion of the cereal pest Spodoptera frugiperda， the fall armyworm [J].NeoBiota， 2018（40）： 2550.

[8] RWOMUSHANA I， BATEMAN M， BEALE T， et al. Fall armyworm： impacts and implications for Africa： Evidence Note Update， October 2018 [R]. （20181102） https：∥www.researchgate.net/publication/328687643.

[9] 趙勝園， 孫小旭， 張浩文， 等. 常用化學(xué)殺蟲劑對草地貪夜蛾防效的室內(nèi)測定[J]. 植物保護， 2019，45（3）： 2126.

[10]郭井菲， 趙建周， 何康來， 等. 警惕危險性害蟲草地貪夜蛾入侵中國[J]. 植物保護， 2018， 44（6）： 110.

[11]CHANDRASENA D I， SIGNORINI A M， ABRATTI G， et al. Characterization of field-evolved resistance to Bacillus thuringiensis-derived Cry1F δ-endotoxin in Spodoptera frugiperda populations from Argentina [J]. Pest Management Science， 2017， 74（3）： 746754.

[12]BOTHA A S， ERASMUS A， DU PLESSIS H， et al. Efficacy of Bt maize for control of Spodoptera frugiperda （Lepidoptera： Noctuidae） in South Africa [J/OL]. Journal of Economic Entomology， 2019.doi： 10.1093/jee/toz048.

[13]楊學(xué)禮， 劉永昌， 羅茗鐘， 等. 云南省江城縣首次發(fā)現(xiàn)遷入我國西南地區(qū)的草地貪夜蛾[J]. 云南農(nóng)業(yè)， 2019（1）： 72.

[14]PASHLEY D P， MARTIN J A. Reproductive incompatibility between host strains of the fall armyworm （Lepidoptera： Noctuidae）[J]. Annals of the Entomological Society of America， 1987， 80（6）： 731733.

[15]PASHLEY D P. Host-associated genetic differentiation in fall armyworm （Lepidoptera： Noctuidae）： a sibling species complex？[J]. Annals of the Entomological Society of America， 1986， 79（6）： 898904.

[16]張磊，靳明輝，張丹丹，等.入侵云南草地貪夜蛾的分子鑒定[J].植物保護，2019，45（2）：1924.

[17]李國平，姬婷婕，孫小旭，等.入侵云南草地貪夜蛾種群對5種常用Bt蛋白的敏感性評價[J].植物保護，2019，45（3）：1520.

[18]STORER N P， BABCOCK J M， SCHLENZ M， et al. Discovery and characterization of field resistance to Bt maize： Spodoptera frugiperda （Lepidoptera： Noctuidae） in Puerto Rico[J].Journal of Economic Entomology，2010，103（4）：10311038.

[19]FATORETTO J C， MICHEL A P， SILVA FILHO M C， et al. Adaptive potential of fall armyworm （Lepidoptera： Noctuidae） limits Bt trait durability in Brazil [J/OL]. Journal of Integrated Pest Management， 2017， 8（1）： 110. doi： 10.1093/jipm/pmx011.

[20]HUANG F， QURESHI J A， MEAGHER R L， et al. Cry1F resistance in fall armyworm Spodoptera frugiperda： single gene versus pyramided Bt maize [J/OL]. PLoS ONE， 2014， 9（11）： e112958.

[21]HUANG F， QURESHI J A， HEAD G P， et al. Frequency of Bacillus thuringiensis Cry1A.105 resistance alleles in field populations of the fall armyworm， Spodoptera frugiperda， in Louisiana and Florida [J].Crop Protection， 2016， 83： 8389.

[22]JIN Lin， ZHANG Haonan， LU Yanhui， et al. Large-scale test of the natural refuge strategy for delaying insect resistance to transgenic Bt crops [J].Nature Biotechnology，2015，33（2）：169174.

（責(zé)任編輯：楊明麗）