鐵皮楓斗膠囊對高膽固醇血癥大鼠輔助降血脂的效果研究

唐琪晶

(浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院，浙江 杭州 310009)

高脂血癥是嚴(yán)重影響身體健康的一種疾病。近年來，我國居民高脂血癥患病率呈逐年遞增趨勢，且發(fā)病年齡趨向年輕化。研究表明，高血脂是導(dǎo)致冠心病、動脈粥樣硬化的主要危險因素[1]，及早治療可以降低心腦血管疾病事件的發(fā)生概率，但是目前常用降脂藥存在肝腎功能損害、橫紋肌溶解、胃腸道反應(yīng)等副作用，從而限制了降脂藥的臨床應(yīng)用[2]。因此，研究開發(fā)新的降脂藥具有十分重要的意義。

鐵皮楓斗膠囊主要含有鐵皮石斛、北沙參、麥冬、玉竹等滋陰藥物，具有滋陰清熱、生津潤燥、補益脾胃等功效，其中鐵皮石斛是主要藥材。研究表明鐵皮石斛具有調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、降血壓等一系列藥理作用[3-5]。另有研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛具有調(diào)節(jié)ApoE-/-小鼠血脂的作用[6，7]。我國古代中醫(yī)學(xué)著作《素問·經(jīng)脈別論》有言：“食入于胃，游溢精氣，上輸于脾，脾氣散精，上歸于肺，通調(diào)水道，下輸膀胱，水津四布，五經(jīng)并行”，就是說脾主運化，輸布水谷精微于五臟和經(jīng)脈，脾胃失調(diào)，則會導(dǎo)致膏脂淤積；而鐵皮楓斗膠囊就具有滋陰養(yǎng)津、補益脾胃的作用，也可能具有降血脂功能。本實驗采用高脂飲食飼養(yǎng)法建立大鼠高脂模型，以探索鐵皮楓斗膠囊的輔助降血脂功能，為研發(fā)新的保健藥品提供依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物及分組

1.1.1 實驗動物 健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只，適應(yīng)期(7天)結(jié)束時，體重(200±20)g，每組10只。

1.1.2 藥品與試劑 森山牌鐵皮楓斗膠囊(多糖含量31.61%，浙江森宇藥業(yè)有限公司)；依折麥布(默沙東醫(yī)藥公司，批號：2EZPA31005)；總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒均購自寧波美康生物技術(shù)股份有限公司；生理鹽水(浙江沙普愛思藥業(yè)股份有限公司)；卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)、膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)均購自上海信帆生物科技有限公司。

1.1.3 造模材料 普通飼料(浙江省實驗動物中心)；膽固醇(杭州宏博生物工程有限公司)；豬油(杭州聯(lián)華華商集團有限公司)；膽固醇(杭州宏博生物工程有限公司)；三號膽鹽(杭州微生物試劑有限公司)。

1.1.4 儀器 DDL-5低速冷凍多管離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)；HC-TP11-50架盤藥物天平(上海精科天平)；PK-S26型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；ACCUTE TBA-40FR全自動生化分析儀(東芝三廠醫(yī)療株式會社)；DS-671電子計重秤(上海寺岡電子有限公司)；D37520型高速冷凍離心機(德國heraeus)；Powerwave340酶標(biāo)儀(美國BIO-TEK公司)；純水系統(tǒng)(杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司)。

2 實驗方法

2.1 模型制備

將SD大鼠60只隨機分為6組，每組10只，除正常組外，其余各組給予高脂飼料(93.6%基礎(chǔ)飼料、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉、5%豬油)喂養(yǎng)2周，建立SD大鼠高脂血癥模型。

2.2 分組與給藥

SD大鼠造模2周后，除正常組外其余各組大鼠按照血清TC水平重新分成5組，每組10只(模型組與給藥組血清TC水平無統(tǒng)計學(xué)差異)。這5組分別為：模型對照組，1 mg/kg依折麥布組(相當(dāng)于1倍人體推薦劑量)，800 mg/kg鐵皮楓斗膠囊組(相當(dāng)于人體推薦量的20倍)，400 mg/kg鐵皮楓斗膠囊組(相當(dāng)于人體推薦量的10倍)，200 mg/kg鐵皮楓斗膠囊組(相當(dāng)于人體推薦量的5倍)。

2.3 檢測指標(biāo)

2.3.1 一般體征 每周記錄2次體重，觀察大鼠一般體征(包括毛色、精神狀態(tài)、糞便等)，并記錄大鼠是否出現(xiàn)弓背蜷縮、毛發(fā)凌亂等情況。

2.3.2 血清生化指標(biāo)測定 造模后第2周及給藥第2、4周，于大鼠眼底靜脈叢取血，檢測正常組、模型組、依折麥布組、鐵皮楓斗膠囊組(0.8 g/kg、0.4 g/kg、0.2 g/kg)大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，于給藥第4周測定大鼠血清ALT、AST指標(biāo)。

2.3.3 酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)指標(biāo)測定 灌胃給藥第4周大鼠眼底靜脈叢取血，檢測正常組、模型組、依折麥布組、800 mg/kg鐵皮楓斗組大鼠血清的ACAT及LCAT酶聯(lián)免疫吸附指標(biāo)。具體步驟如下：利用雙抗體夾心法，在包被有固相抗體的板中，使血清中的酶與辣根過氧化物酶標(biāo)記的ACAT、LCAT抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加三甲基硼顯色，并在酸的作用下終止反應(yīng)，在450 nm波長測定吸光度，計算大鼠血清ACAT、LCAT含量。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

3 實驗結(jié)果

3.1 對高膽固醇血癥大鼠血脂水平的影響

SD大鼠造模2周時，與正常對照組相比，模型對照組和各給藥組大鼠血清TC、TG、LDL-C、顯著升高(P<0.01)，與模型對照組相比，各給藥組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C無統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果見表1。灌胃給藥第2周，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清TC、TG、LDL-C顯著升高(P<0.01)；與模型對照組相比，800 mg/kg鐵皮楓斗組大鼠血清TC、LDL-C顯著降低(P<0.05)，結(jié)果見表2。SD大鼠灌胃給藥第4周，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清TC、TG、LDL-C顯著升高(P<0.01～0.05)。與模型對照組相比，800 mg/kg、400 mg/kg鐵皮楓斗組大鼠血清TC顯著降低(P<0.05)；800 mg/kg、400 mg/kg鐵皮楓斗組大鼠血清LDL-C顯著降低(P<0.01～0.05)，結(jié)果見表3。

組別劑量(mg·kg-1)TC (mmol·L-1)TG (mmol·L-1)HDL-C (mmol·L-1)LDL-C (mmol·L-1)正常對照-1.53±0.180.51±0.100.51±0.071.10±0.13模型對照-2.25±0.31##1.18±0.28##0.53±0.061.49±0.24##依折麥布組12.30±0.32##1.08±0.23##0.52±0.071.58±0.21##8002.35±0.32##0.96±0.32##0.56±0.091.61±0.25##鐵皮楓斗組4002.28±0.35##1.09±0.45##0.55±0.091.46±0.26##2002.34±0.27##1.12±0.21##0.52±0.081.61±0.23##

注：n=10；與正常對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別劑量(mg·kg-1)TC (mmol·L-1)TG (mmol·L-1)HDL-C (mmol·L-1)LDL-C (mmol·L-1)正常對照組—1.44±0.300.40±0.280.42±0.111.03±0.27模型對照組—2.38±0.34##0.67±0.26##0.45±0.121.64±0.30##依折麥布組11.77±0.21*0.48±0.330.43±0.101.25±0.20**8002.06±0.28*0.62±0.200.46±0.141.32±0.21*鐵皮楓斗組4002.11±0.210.60±0.250.41±0.091.56±0.302002.20±0.230.68±0.140.41±0.121.63±0.21

注：n=10；與正常對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別劑量(mg·kg-1)TC (mmol·L-1)TG (mmol·L-1)HDL-C (mmol·L-1)LDL-C (mmol·L-1)正常對照組-1.64±0.390.80±0.190.53±0.180.91±0.35模型對照組-2.79±0.32#0.99±0.17#0.53±0.051.71±0.12##依折麥布組12.20±0.19**0.82±0.18*0.54±0.051.15±0.20**8002.32±0.21*0.90±0.150.51±0.061.38±0.17**鐵皮楓斗組4002.50±0.26*0.88±0.200.54±0.071.45±0.22*2002.58±0.431.09±0.140.50±0.091.51±0.26

注：n=10；與正常對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 灌胃給藥4周對高膽固醇血癥大鼠血清ALT和AST水平的影響

灌胃給藥第4周，與正常對照組比，模型組大鼠血清AST、ALT均顯著升高(P<0.01)。與模型對照組相比，800 mg/kg鐵皮楓斗組大鼠血清ALT顯著降低(P<0.05)，AST有下降趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，結(jié)果見表4。

組別劑量(mmol·L-1)ALT (mmol·L-1)AST (mmol·L-1)正常對照組-52.10±10.95114.50±29.71模型對照組-78.20±8.15##155.00±30.65##依折麥布組163.33±11.77**117.67±23.79**80071.50±9.26*142.88±20.02鐵皮楓斗組40078.70±11.73145.75±17.0620079.90±8.84140.50±26.48

注：n=10；與正常對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.3 灌胃給藥4周對高膽固醇血癥大鼠血清LACT及ACAT的影響

灌胃給藥第4周，與正常對照組比，模型組大鼠血清LCAT顯著降低(P<0.05)；與模型對照組比，800 mg/kg鐵皮楓斗組大鼠血清LCAT顯著升高(P<0.05)，結(jié)果見表5。

組別劑量 (mg·kg-1)LCAT (U/L) ACAT (U/L)正常對照組-96.91±13.88178.93±17.86模型對照組-85.83±6.08#173.66±19.94陽性藥組190.55±9.73180.15±17.66鐵皮楓斗組80095.63±11.92*175.46±16.91

注：n=10；與正常對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.4 鐵皮楓斗對高膽固醇血癥模型大鼠一般體征的影響

實驗過程中，正常對照組大鼠行動靈活，毛發(fā)光澤，食量正常。灌胃給藥4周，模型對照組大鼠和200 mg/kg鐵皮楓斗給藥組個別大鼠毛發(fā)松亂、暗淡，精神差，活動減少。實驗過程中，模型組大鼠體重增長一直高于正常對照組與各給藥組大鼠，結(jié)果見圖1。

圖1 鐵皮楓斗膠囊對高膽固醇血癥大鼠體重的影響

4 討論

高血脂是心血管疾病的重要危險因素，而我國近年來血脂異常的發(fā)生率逐年升高。目前臨床一線的降脂藥長期用藥仍存在橫紋肌溶解、肌肉疼痛、痙攣等安全問題，且血脂異常的發(fā)病機制涉及多種途徑，單一的降脂方式不可能適合所有高脂血癥的患病類型。鐵皮楓斗膠囊具有補腎養(yǎng)肝的功效，而肝腎陰虛、脾失健運為高脂血癥的主要發(fā)病機制之一[8]，因此，開發(fā)鐵皮楓斗膠囊輔助降血脂具有一定的可行性。

總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白是反映生物體內(nèi)脂質(zhì)代謝變化的重要指標(biāo)。甘油三酯、低密度脂蛋白過高容易造成血管壁脂質(zhì)沉積，增加心血管疾病的風(fēng)險。本實驗通過高脂飼料喂養(yǎng)成功建立大鼠高膽固醇血癥模型，模型組大鼠TC、TG、LDL-C顯著升高。給藥4周后，森山牌800 mg/kg、400 mg/kg鐵皮楓斗膠囊組大鼠的TC、LDL-C水平顯著降低，說明鐵皮楓斗膠囊具有一定的輔助降血脂功能。此外，實驗發(fā)現(xiàn)與模型組相比，800 mg/kg鐵皮楓斗組能夠降低高膽固醇大鼠血清ALT水平，而長期高脂飲食會引起肝臟代謝紊亂，引發(fā)脂肪肝、肝硬化等問題，實驗結(jié)果為進(jìn)一步研究鐵皮石斛對肝臟的作用提供了依據(jù)。

LCAT、ACAT等是參與機體脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運的重要酶類，其中LCAT是膽固醇逆向轉(zhuǎn)運的關(guān)鍵酶，LCAT酶能把卵磷脂中的酰基轉(zhuǎn)移到游離膽固醇上，生成膽固醇酯和卵磷脂，并促進(jìn)膽固醇酯向HDL內(nèi)核轉(zhuǎn)移，參與HDL的成熟與代謝，LCAT濃度與甘油三酯、總膽固醇呈負(fù)相關(guān)[9，10]。ACAT是細(xì)胞內(nèi)唯一催化膽固醇酯合成的酶，可調(diào)節(jié)全身膽固醇平衡，與高血脂、冠狀動脈硬化等多種疾病密切相關(guān)[11]。本實驗于給藥第4周測定鐵皮楓斗800 mg/kg劑量組大鼠血清中LCAT 和ACAT含量，發(fā)現(xiàn)與模型組相比，鐵皮楓斗800 mg/kg組大鼠血清LCAT明顯升高，提示鐵皮楓斗可能通過調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝，促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)運來調(diào)節(jié)大鼠血脂水平。

綜上所述，鐵皮石斛能降低高膽固醇血癥大鼠血清總膽固醇、低密度脂蛋和血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶，具有調(diào)節(jié)血脂，滋養(yǎng)肝體的作用，初步推斷其機制與促進(jìn)膽固醇代謝轉(zhuǎn)運有關(guān)。實驗結(jié)果表明鐵皮石斛具有一定的輔助降血脂作用，為研究開發(fā)新的保健藥品提供了實驗依據(jù)。