經(jīng)典名方華蓋散中橙皮苷含量測(cè)定方法

但宇超，曾琪，馬安獻(xiàn)，張惠芹，季宗念，嚴(yán)啟新

（海王百草堂藥業(yè)有限公司，河南濮陽(yáng) 457000）

中藥是我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥的重要組成部分，是臨床防病治病的最主要物質(zhì)手段。目前，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不完善是阻礙中藥產(chǎn)業(yè)走向現(xiàn)代化與國(guó)際化的障礙。因此提高中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)必須從各個(gè)環(huán)節(jié)入手，才能確保中藥質(zhì)量一致和臨床療效穩(wěn)定。采用現(xiàn)代分析技術(shù)和科學(xué)方法全面控制中藥的質(zhì)量，是當(dāng)代中藥研究的方向。

華蓋散是主治風(fēng)寒哮喘的要方，來(lái)源是《圣濟(jì)總錄》卷五十。由橘皮（陳皮）、麻黃、紫蘇子、杏仁、桑白皮、茯苓、甘草組成，功能是宣肺化痰、和中平喘，主治氣喘咳嗽。華蓋散的主要有效成分有橙皮苷，本實(shí)驗(yàn)建立了華蓋散中有效成分橙皮苷的含量測(cè)定方法，為華蓋散制劑的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試藥

1260infinityⅡ安捷倫高效液相色譜儀（openlabcds色譜工作站）、Inetsil-ODS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5.0μm；填料：十八烷基硅烷鍵合硅膠；安捷倫公司）、METLERTOLED分析天平（十萬(wàn)分之一）、超聲清洗儀。

1.2 試劑

對(duì)照品：橙皮苷（批號(hào)20170411）來(lái)源中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度均大于98%；甲醇和乙腈為色譜純（GR），水為怡寶純凈水，其余均為分析純（AR）。

2 檢測(cè)方法的建立

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取各對(duì)照品適量，加50%甲醇制成混合對(duì)照品溶液，質(zhì)量濃度為25.00 μg/mL。

2.2 供試品溶液的制備

取提取物粉末約1g，精密稱定，精密加入50%乙醇溶液50mL，稱量，超聲（功率250W，頻率40kHz）提取30min，放冷，再次稱量，用50%乙醇溶液補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過(guò)，取濾液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.3 色譜條件

采用 inetsil-ods C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，柱溫25℃，流動(dòng)相為乙腈-水溶液，梯度洗脫設(shè)置見表1，流速1mL/min，洗脫時(shí)間60min，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，進(jìn)樣量10μL。

表1 梯度洗脫設(shè)置

2.4 精密度考察

精密吸取同一份華蓋散供試品溶液10μL連續(xù)進(jìn)樣6次，以橙皮苷為參照峰，計(jì)算保留時(shí)間RSD和相對(duì)峰面積RSD均小于1%，相似度均大于0.99，表明該方法重復(fù)性良好。見表2、3。

表2 橙皮苷日內(nèi)精密度

表3 橙皮苷日間精密度

2.5 重復(fù)性考察

取同一個(gè)批次華蓋散樣品6份，按照2供試品溶液制備方法制備華蓋散供試品溶液，每份3個(gè)平行，按照2.3中色譜條件分別進(jìn)樣，記錄峰面積，其RSD范圍在0.11%～0.13%，表明方法重復(fù)性良好，見表4。

表4 重現(xiàn)性考察

2.6 穩(wěn)定性考察

精密吸取同一份供試品溶液，按3中色譜條件，分別在0、1、2、4、8、12、24、48 h和72h進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，以橙皮苷為參照峰，計(jì)算保留時(shí)間RSD和相對(duì)峰面積RSD均小于1%，相似度均大于0.99，表明供試品溶液72h內(nèi)穩(wěn)定，見表5。

表5 穩(wěn)定性考察

2.7 華蓋散中主要成分橙皮苷的含量測(cè)定

2.7.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

混合對(duì)照品和提取物供試品溶液按照2.3中色譜條件分析，分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)大于5000，色譜圖如圖1、圖2所示。

圖1 混合對(duì)照色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

2.7.2 線性范圍考察

將以上配制的混合對(duì)照品，稀釋成系列不同梯度濃度的對(duì)照品溶液，按照2.3中色譜條件依次注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，以峰面積和濃度進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表6。

表6 橙皮苷濃度與峰面積線性表

回歸方程為y=24.341x+0.0231，R2=1.000，大于0.999，符合要求。

2.7.3 回收率試驗(yàn)

取重復(fù)性試驗(yàn)同批樣品，分別按照近似0.8∶1、1∶1、1.2∶1添加橙皮苷對(duì)照品，加入樣品中，按照2.2進(jìn)行樣品制備，按照2.3中色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算平均回收率為99.8%～100.1%，RSD在1.23%～2.02%，表明方法回收率良好，見表7。

表7 橙皮苷回收率

2.7.4 檢測(cè)限和定量限

橙皮苷的檢測(cè)限為0.004732μg/mL，定量限為0.01734μg/mL。

2.7.5 樣品含量測(cè)定

精密吸取2.2中供試品溶液，按2.3中色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到橙皮苷化合物峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表8。

表8 測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

該方法對(duì)華蓋散中橙皮苷含量測(cè)定的精密度、穩(wěn)定性和回收率均達(dá)標(biāo)。符合方法學(xué)驗(yàn)證的要求，可以用于華蓋散散劑的質(zhì)量控制試驗(yàn)方法。