基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)分析木蝴蝶中化學(xué)成分

陳麗娜，楊明，時(shí)東方，劉春明

（長(zhǎng)春師范大學(xué) 中心實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春 130032）

木蝴蝶，又名千層紙、玉蝴蝶、破故紙等，是一種重要的中藥材，對(duì)咽痛喉痹、聲音嘶啞、咳嗽、肝胃氣痛、浸淫瘡等癥狀有顯著療效[1-2]。木蝴蝶化學(xué)成分以黃酮及其苷類為主，此外還有揮發(fā)油、對(duì)羥基苯乙醇和環(huán)己醇類、紫堿類、有機(jī)酸類化合物等，而黃酮類是其主要活性成分[3-5]。據(jù)報(bào)道，木蝴蝶的黃酮類成分具有抗炎、抗氧化、降糖、抑制病毒及腫瘤生長(zhǎng)等藥理作用[6]。

木蝴蝶中黃酮種類繁多，準(zhǔn)確快速地鑒定其結(jié)構(gòu)對(duì)于監(jiān)控木蝴蝶的質(zhì)量具有重要意義。本研究對(duì)木蝴蝶甲醇提取物中化學(xué)成分進(jìn)行研究，根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量、分子碎片峰、紫外吸收光譜等參數(shù)，分析了木蝴蝶中已發(fā)現(xiàn)和可能存在的化學(xué)成分，建立了木蝴蝶中化學(xué)成分快速鑒定方法，為其質(zhì)量評(píng)價(jià)方法提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（2695，Waters，美國(guó)）、高效液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀（LTQ-Fleet，Thermo Fisher，美國(guó)）、超聲清洗儀（BS-250E，中國(guó)昆山超聲儀器有限公司）、超純水儀（Microcon YM-100，Millipore，美國(guó)）。

木蝴蝶藥材（購(gòu)自長(zhǎng)春中東大藥房）、甲醇（分析純，北京化工廠）、乙腈（色譜純，F(xiàn)isher，美國(guó)）、實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)Milli-Q超純水系統(tǒng)處理后的超純水。

1.2 樣品提取

將干燥的木蝴蝶種子粉碎，精密稱取1 g粉末，加入 25 mL 甲醇超聲提取 10 min，于 4000r/min 下離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，殘?jiān)谙嗤瑮l件下提取一次，合并提取液，用甲醇定容。取1mL該溶液過(guò)0.45 μm濾膜，待測(cè)。

1.3 液相色譜條件

色譜柱為 Waters SunFire C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），柱溫：40 ℃，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為純水，流速為0.5 mL/min，色譜洗脫梯度見(jiàn)表1，進(jìn)樣量為10μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm。

表1 色譜洗脫梯度

1.4 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜分析采用電噴霧電離源（ESI），噴霧電壓為4.5kV，負(fù)離子檢測(cè)模式，掃描范圍為m/z100～1000，鞘氣為氮?dú)?，流速?0 bar，毛細(xì)管溫度為250℃，毛細(xì)管電壓為20V。

2 結(jié)果與討論

2.1 液相色譜條件的優(yōu)化

以超純水作為水相，分別考察乙腈和甲醇作為有機(jī)相的分離效果。發(fā)現(xiàn)甲醇和水為流動(dòng)相時(shí)可以達(dá)到基線分離，但是色譜峰形較差，并且洗脫時(shí)間較長(zhǎng)，所以采用乙腈作為有機(jī)相。進(jìn)一步優(yōu)化洗脫梯度，最終實(shí)現(xiàn)了各化合物的有效分離。木蝴蝶提取物的總離子流圖見(jiàn)圖1。

圖1 木蝴蝶提取液的LC-ESI-MS負(fù)離子模式總離子流圖

2.2 HPLC-DAD-ESI-MS分析木蝴蝶甲醇提取物

化合物的保留時(shí)間及質(zhì)譜信息等見(jiàn)表2，紫外吸收光譜圖見(jiàn)圖2、3。在實(shí)驗(yàn)條件下，共從木蝴蝶甲醇提取物中分離得到10個(gè)化學(xué)成分，總離子流圖見(jiàn)圖1，可以看見(jiàn)10個(gè)化學(xué)成分都獲得了基線分離。化合物1的保留時(shí)間為4.69 min，特征離子為593，通過(guò)查閱文獻(xiàn)證明該化合物為木蝴蝶苷b。光譜實(shí)驗(yàn)表明該化合物有2個(gè)紫外吸收波長(zhǎng)，分別為215 nm和273 nm，與其化合物的特征吸收一致，進(jìn)一步證明了這一推論。按照同樣的方式，確認(rèn)化合物3、4、6、7、8、9、10分別為2α，3β-二羥基羽扇豆醇、黃芩苷、腺苷、白楊素-7-葡萄糖酸苷、黃芩苷元、羽扇豆醇、白楊黃素。

圖2 2種化學(xué)成分的紫外吸收光譜圖

圖3 6種化學(xué)成分的紫外吸收光譜圖

表2 木蝴蝶中鑒定化合物的LC-MSn信息

3 結(jié)論

本研究以HPLC-DAD-ESI-MSn技術(shù)作為研究手段，探討了木蝴蝶甲醇提取物主要化學(xué)成分的分析方法。該方法采用高效液相色譜法對(duì)混合化合物進(jìn)行分離，采用DAD檢測(cè)器和電噴霧質(zhì)譜法對(duì)目標(biāo)成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，通過(guò)將所得到的光譜圖和質(zhì)譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)進(jìn)行對(duì)照，確定了8種化合物的結(jié)構(gòu)，分別為木蝴蝶苷b、2α，3β-二羥基羽扇豆醇、黃芩苷、腺苷、白楊素-7-葡萄糖酸苷、黃芩苷元、羽扇豆醇、白楊黃素。