超微化雷竹筍膳食纖維對高脂血癥小鼠的影響

蘇 玉，李 璐，黃 亮,2,*，付曉康

（1.中南林業(yè)科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，特醫(yī)食品加工湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410004；2.稻谷及副產(chǎn)物深加工國家工程實驗室，湖南 長沙 410004）

雷竹筍（Phyllostachys praecoxshoots）是一種高纖維、高蛋白、低脂肪的天然綠色食品[1-2]，具有出筍早、產(chǎn)量高、效益高等特點，多產(chǎn)于我國南方地區(qū)[3]。新鮮雷竹筍的貯藏期較短，易變質(zhì)和老化，目前多以清水罐裝、筍干等形式于市場上銷售[4]，該方式加工過程簡單，產(chǎn)品附加值低。雷竹筍中膳食纖維含量豐富，可溶性膳食纖維（soluble dietary fi ber，SDF）質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于10%，為高品質(zhì)膳食纖維，經(jīng)常食用有助于清理腸道，降低結(jié)腸癌、高血脂等疾病發(fā)生的風(fēng)險，素有“素食第一品”的美譽(yù)[5]。陳琬盈等[6]發(fā)現(xiàn)雷竹筍膳食纖維中SDF含量顯著高于小麥、青竹中SDF含量，同時雷竹筍膳食纖維（Phyllostachys praecoxshoot dietary fiber，PPDF）對膽固醇等物質(zhì)的吸附性更強(qiáng)；李秀芬等[7]的專利中顯示竹筍膳食纖維的水合性質(zhì)優(yōu)于其他膳食纖維。以上研究均表明開發(fā)利用PPDF是新的研究方向，對促進(jìn)竹筍食品資源的開發(fā)利用有著重要意義。將雷竹筍殘渣中的膳食纖維提取出來加以利用，能實現(xiàn)農(nóng)副產(chǎn)品的綜合利用，提高產(chǎn)品的附加值，減少資源的浪費和環(huán)境的污染。

近年來隨著人們生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，高脂血癥、糖尿病及一系列并發(fā)癥頻發(fā)。高脂血癥是心腦血管疾病的重要病理基礎(chǔ)，是心腦血管疾病如腦中風(fēng)、動脈粥樣硬化等發(fā)病的主要危險因素之一，因此預(yù)防高脂血癥的發(fā)生對降低心腦血管的發(fā)病率有重要的意義[8]。吳占威等[9]在豆渣膳食纖維對小鼠腸道菌群的研究中認(rèn)為膳食纖維來源及結(jié)構(gòu)的不同使其理化性質(zhì)、生理功能等也不盡相同。Shamliyan等[10]在研究心血管疾病與SDF的攝入量有關(guān)的研究中發(fā)現(xiàn)SDF具有黏度大、溶解性好、水合性質(zhì)強(qiáng)等優(yōu)點，其對血清中的膽固醇有很好的吸附作用，同時能降低血糖值。Li Xiufen等[11]的研究表明竹筍中的膳食纖維通過調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群預(yù)防小鼠肥胖，改善高脂血癥小鼠脂質(zhì)分布。本實驗將經(jīng)超微化處理的PPDF懸浮于蒸餾水中，以未經(jīng)超微化處理的PPDF為對照，以2.5 g/（kg·dmb）、20 mL/kg的劑量，每天1 次灌胃給高脂飲食誘導(dǎo)的高脂血癥小鼠，研究PPDF對高脂血癥小鼠生長特性、血脂水平、組織病變程度等的影響，探究PPDF改善及預(yù)防高脂血癥造成的肝臟及脂肪組織病變作用。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級7～8 周齡雄性KM小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2016-0002。

基礎(chǔ)飼料：蛋白質(zhì)35.6%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同），脂肪44.3%，碳水化合物20.1%，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供。高脂飼料：基礎(chǔ)飼料73.8%、豬油14%、蛋黃粉10%、膽固醇2%、膽酸鈉0.2%，由江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司提供。

膳食纖維為實驗室采用復(fù)合酶法自制，根據(jù)不同處理方式分為：1）C-PPDF：采用萬能粉碎機(jī)粉碎10 min，過100 目篩進(jìn)行粗粉碎；2）Z-PPDF：粗粉碎的雷竹筍膳食纖維經(jīng)1 000 r/min研磨30 min，進(jìn)行重壓研磨式超微化；3）M-PPDF：氣流粉碎機(jī)以壓力0.1 MPa、物料處理量2.5 g/h進(jìn)行氣流分級。處理后的PPDF于室溫棕色瓶儲藏備用。表1為雷竹筍膳食纖維的基本成分。

表1 雷竹筍膳食纖維的基本成分Table 1 Basic components of PPDF

總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、甘油三酯（triglyceride，TG）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒 南京建成生物工程研究；考馬斯亮藍(lán)G-250 北京索萊寶科技有限公司；牛血清白蛋白 上海源葉生物科技有限公司；其余試劑均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DNM-9602酶標(biāo)分析儀 北京普朗新技術(shù)有限公司；Mni-P25微孔板迷你離心機(jī) 杭州奧盛儀器有限公司；AUY220分析天平、UV2000紫外分光光度計日本島津公司；PHS-3E pH計 上海儀電科學(xué)儀器有限公司；SZF-06C脂肪測定儀 濟(jì)南澤凱醫(yī)療器械有限公司；DMI3000B熒光正置顯微鏡、DM2500熒光倒置顯微鏡 德國徠卡公司。

1.3 方法

1.3.1 小鼠高脂模型的建立

KM小鼠在恒溫（23±3）℃、12 h晝夜交替、相對濕度（50±10）%條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。按體質(zhì)量隨機(jī)分5 組，每組10 只，其中1 組喂基礎(chǔ)飼料為基礎(chǔ)對照組（NC組），4 組喂高脂飼料為高脂模型組（HM組），2 周后稱量小鼠體質(zhì)量，眼眶取血測TC、TG含量，判斷高脂血癥小鼠是否造模成功[12]。

1.3.2 動物的分組及給藥

將1.3.1節(jié)造模成功的HM組小鼠隨機(jī)分成4 組，每組8 只：C-PPDF組、Z-PPDF組、M-PPDF組、高脂對照組（MC組）。HM組小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料，NC組繼續(xù)喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料。將C-PPDF、Z-PPDF、M-PPDF加純凈水配制成懸浮液（現(xiàn)用現(xiàn)配，超微化處理的膳食纖維中不溶性膳食纖維需以懸浮液的形式灌胃給小鼠），其中3 個高脂組分別灌胃3 種PPDF溶液（每天同一時間），灌胃劑量2.5 g/（kg·d mb），灌胃體積20 mL/kg，即PPDF干預(yù)組。NC組及MC組小鼠灌胃同等體積的純凈水。連續(xù)灌胃4 周，期間自由攝食、飲水。

給藥期間每天觀察記錄小鼠的攝食飲水狀況、精神狀態(tài)、毛發(fā)情況；每周記錄小鼠的體質(zhì)量；每周后2 d同一時間觀察并收集小鼠糞便測定糞脂及糞膽固醇排泄量。4 周結(jié)束后禁食不禁水12 h，小鼠摘眼球取血，分離血清測定血脂指標(biāo)。全部小鼠脫臼處死迅速解剖取盲腸、附睪脂肪墊組織、肝臟等器官觀察并稱質(zhì)量，部分肝臟及脂肪組織用甲醛固定，進(jìn)行病理學(xué)組織切片分析，其余部分存放于－80 ℃冰箱中待分析[13]。

1.3.3 小鼠糞脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)及糞膽固醇含量的測定

稱取適量的糞便于60 ℃干燥箱中烘干至質(zhì)量恒定，參照GB 5009.6—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測定》索氏抽提法提取脂肪并測定脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)，按GB 5009.128—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中膽固醇的測定》中方法測定脂肪中膽固醇的含量。

1.3.4 小鼠血清血脂指標(biāo)的測定

給藥4 周后，小鼠禁食不禁水12 h，摘眼球取血約1 mL收集于離心管中，室溫放置4 h，3 500 r/min冷凍離心20 min，取血清于－80 ℃冰箱中待分析[14]。測定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平，其具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。動脈粥樣硬化指數(shù)（atherosclerosis index，AI）、血脂綜合指數(shù)（lipid comprehensive index，LCI）分別按式（1）、（2）計算[15]。

1.3.5 小鼠臟器指數(shù)及脂/體比的測定

將小鼠的肝臟、脾臟等臟器用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分后稱質(zhì)量。小心分離小鼠附睪周圍的脂肪組織，用生理鹽水將取出的脂肪沖洗3 次，濾紙吸凈水分后稱質(zhì)量。臟器指數(shù)及脂/體比分別按式（3）、（4）計算[16]。

1.3.6 小鼠肝臟TC、TG含量的測定

取100 mg肝組織，切碎置于離心管內(nèi)，按照1∶10（m∶V）溶于磷酸鹽緩沖液中（pH 7.4），冰水浴中手動勻漿，3 500 r/min離心20 min，取上清液于EP管中待測[17]。采用酶學(xué)方法檢測肝臟組織中TC、TG含量，具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。

1.3.7 小鼠肝臟及血清MDA水平、SOD活力的測定

取適量存放于EP管中處理后的肝臟上清液或小鼠血清，根據(jù)酶學(xué)方法檢測肝臟及血清中MDA水平及SOD活力，具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。

1.3.8 小鼠肝臟及脂肪病理組織學(xué)切片

將小鼠肝臟及附睪脂肪墊用10%中性福爾馬林固定48 h，流水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，透蠟，包埋，脫蠟切片，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，顯微鏡觀察肝臟及脂肪組織結(jié)構(gòu)[18]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有實驗平行3 次，數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2007軟件進(jìn)行處理，Origin 8.5軟件作圖，結(jié)果均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，通過SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用方差分析和t檢驗，P＜0.05有顯著差異，P＜0.01有極顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 常規(guī)觀察結(jié)果

在整個實驗過程中小鼠生長狀態(tài)良好，活動正常，未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。PPDF干預(yù)組小鼠較NC組及MC組小鼠毛發(fā)稀疏，觀察攝食量發(fā)現(xiàn)，PPDF干預(yù)組小鼠較MC組小鼠食欲降低。觀察小鼠糞便，HM組小鼠糞便硬度高于NC組，但PPDF干預(yù)組低于MC組。實驗結(jié)束后解剖小鼠，在各個器官中，HM組小鼠除了肝組織較NC組有不同程度的腫大，顏色變淺發(fā)白、出現(xiàn)脂肪肝特征外其他器官無差異。圖1為小鼠肝臟的色澤狀態(tài)，在解剖過程中，肉眼觀察新鮮的小鼠肝臟組織，NC組小鼠肝臟顏色鮮紅，質(zhì)地柔軟，而HM組小鼠肝臟呈土黃色，腫大發(fā)白，切面油膩感嚴(yán)重。

圖1 PPDF對小鼠肝臟組織的影響Fig. 1 Effect of PPDF on liver tissue of mice

表2 高脂血癥小鼠造模實驗結(jié)果Table 2 Successful induction of hyperlipidemia in mice

由表2可知，與NC組相比，HM組小鼠的血脂指標(biāo)顯著增高，其中TC濃度大于5.72 mmol/L、TG濃度大于1.70 mmol/L，表明高脂血癥小鼠造模成功[19]。

2.2 PPDF對小鼠攝食量及體質(zhì)量的影響

由圖2a可知，前2 周為高脂模型的造模時間，小鼠日攝食量增加，同時體質(zhì)量也增長最快。從第3周開始，將不同超微化處理PPDF以相同劑量灌胃造模成功的高脂血癥小鼠，由于剛開始灌胃導(dǎo)致小鼠胃部不適應(yīng)，小鼠的攝食量有所減少，體質(zhì)量增加緩慢。但在之后3 周的飼養(yǎng)過程中，5 組小鼠日攝食量相當(dāng)，PPDF干預(yù)組的小鼠較MC組食欲降低，這主要是因為PPDF的攝入增加了小鼠的飽腹感，致使PPDF干預(yù)組小鼠的日均攝食量相對降低[20]，但各組間的差異不顯著。

由圖2b可知，實驗開始時各組小鼠的體質(zhì)量基本一致，為20 g左右。高脂飲食誘導(dǎo)2 周的過程中，HM組小鼠體質(zhì)量顯著高于NC組。之后在PPDF干預(yù)下，PPDF干預(yù)組小鼠的體質(zhì)量較MC組增加緩慢。在第5周時，PPDF干預(yù)組小鼠體質(zhì)量有所降低。第6周結(jié)束時，與MC組相比，NC組及M-PPDF組小鼠的體質(zhì)量極顯著下降；Z-PPDF組和C-PPDF組小鼠的體質(zhì)量下降，但沒有M-PPDF效果強(qiáng)。這是因為超微化處理的M-PPDF的持油力等理化性質(zhì)強(qiáng)，能結(jié)合更多脂肪并促使其隨糞便直接排出體外，減少機(jī)體對此物質(zhì)的吸收，從而抑制肥胖。以上結(jié)果表明PPDF能增加飽腹感，同時有很好的減肥作用[21]。另外PPDF干預(yù)組小鼠體質(zhì)量的降低可能是PPDF組小鼠的毛發(fā)較稀疏、皮毛松弛的主要原因。

圖2 PPDF對小鼠日攝食量（a）及體質(zhì)量（b）的影響Fig. 2 Effect of PPDF on daily intake (a) and body mass (b) of mice

2.3 PPDF對小鼠糞脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)及膽固醇含量的影響

由圖3可知，隨著飼養(yǎng)周期的延長，小鼠糞便中的脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)不斷增加，其中NC組小鼠的糞脂排出量在各個階段變化不明顯，基本穩(wěn)定在1%左右。與NC組相比，HM組小鼠糞脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加明顯，這主要是因為高脂飼料中油脂含量高。與MC組相比，PPDF干預(yù)組小鼠糞便中的糞脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加，尤其是M-PPDF組。這是因為PPDF有較高的持油力，能促進(jìn)油脂不被機(jī)體吸收直接排出體外，此現(xiàn)象與小鼠的體質(zhì)量變化結(jié)果一致；李季等[22]研究柑橘皮膳食纖維對大鼠降血脂的功效研究中也發(fā)現(xiàn)柑橘皮膳食纖維的攝入能增加大鼠糞脂及膽固醇排泄量，其認(rèn)為這可能是膳食纖維降低膽固醇的機(jī)理之一。從糞脂排泄量中得出PPDF的持油力由大到小依次為M-PPDF＞Z-PPDF＞C-PPDF，表明氣流粉碎的M-PPDF粒徑越小越有利于結(jié)合脂肪并促進(jìn)脂肪隨糞便直接排出體外。

圖3 PPDF對小鼠糞脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig. 3 Effect of PPDF on fat content in mice feces

表3 PPDF對小鼠糞膽固醇排泄量的影響（n＝8）Table 3 Effect of PPDF on cholesterol content in mouse feces (n= 8)

由表3可知，不同的周期小鼠糞便中膽固醇的排泄量不同，但在相同的時間周期內(nèi)HM組小鼠的膽固醇排泄量明顯高于NC組，這是由于高脂飼料中有2%的膽固醇的添加量所致。PPDF干預(yù)組小鼠與MC組相比，膽固醇的排泄量增加，其中膽固醇的排泄量大小為：M-PPDF組＞Z-PPDF組＞C-PPDF組，同時每組小鼠每周的膽固醇排泄量相對穩(wěn)定，在小范圍內(nèi)波動。其中M-PPDF更能促進(jìn)糞脂排泄量的增加，從而進(jìn)一步促進(jìn)膽固醇的排泄量增加，膽固醇隨糞便直接排出體外能減少機(jī)體的吸收，進(jìn)而降低機(jī)體血脂水平，對高脂血癥有積極作用[23]。

2.4 PPDF對小鼠血清血脂水平的影響

圖4 PPDF對小鼠血清血脂水平的影響Fig. 4 Effect of PPDF on serum lipid level in mice

血脂指標(biāo)是判斷是否為高脂血的主要標(biāo)準(zhǔn)，長期的高脂飲食會導(dǎo)致小鼠脂代謝紊亂[24]，造成高脂血癥；而相關(guān)研究表明膳食纖維能降低高脂血癥及動脈粥樣硬化等疾病發(fā)生的風(fēng)險[25]。由圖4可知，NC組小鼠血清血脂的各項指標(biāo)均處于正常水平，表明正常的飲食不會造成小鼠高脂血癥。與NC組相比，HM組小鼠的TC、TG及LDL-C水平顯著升高，而HDL-C水平降低（P＜0.01）。與MC組相比，PPDF干預(yù)組小鼠的血脂水平得到改善，其中TG、LDL-C水平顯著性降低（P＜0.05，P＜0.01），TC濃度極顯著下降（P＜0.01），其中M-PPDF對機(jī)體的保護(hù)作用最明顯，但并未達(dá)到NC組小鼠血脂水平，若延長飼養(yǎng)時間，效果可能會更加明顯。與MC組相比，HDL-C水平在PPDF的干預(yù)下有一定程度的回升，但只有Z-PPDF、M-PPDF的作用效果有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。由此表明PPDF均有顯著降低小鼠血清TC、TG、LDL-C水平的作用，同時增加HDL-C水平；另外PPDF經(jīng)超微化處理物理改性后，降血脂的作用效果逐漸增強(qiáng)，其中M-PPDF的作用效果更明顯。

圖5 PPDF對小鼠AI值和LCI值的影響Fig. 5 Effect of PPDF on atherosclerosis index and lipid comprehensive index in mice

從小鼠的AI及LCI值大小可大致預(yù)測小鼠患高脂血、動脈粥樣硬化等疾病的風(fēng)險。由圖5可知，NC組小鼠的AI及LCI值均在0.50以下，與NC組比較，高脂飲食使小鼠的AI及LCI值極顯著升高（P＜0.01），其中MC組小鼠的AI及LCI值最高，分別是NC組小鼠的12.62、31.66 倍；但PPDF各個干預(yù)組小鼠的AI及LCI值顯著降低（P＜0.01），其中M-PPDF組效果最明顯，小鼠的AI及LCI值分別是NC組的5.01、5.83 倍。在HM組中，與MC組小鼠相比，PPDF組小鼠的AI、LCI值顯著下降（P＜0.01），其中C-PPDF組、Z-PPDF組、M-PPDF組小鼠的AI分別降低了13.10%、41.72%、62.69%；LCI值分別降低了42.94%、75.37%、84.49%。以上結(jié)果中發(fā)現(xiàn)M-PPDF作用效果最明顯，雖然并不能使高脂血癥小鼠的血脂指標(biāo)及AI、LCI值達(dá)到NC組小鼠的正常血脂水平，但PPDF對高脂血癥小鼠血脂有一定的改善作用，而且PPDF的粒徑越小，降血脂效果越明顯。

2.5 PPDF對小鼠的脂/體比及臟器指數(shù)的影響

實驗結(jié)束時觀察各組小鼠，發(fā)現(xiàn)PPDF干預(yù)組小鼠較MC組小鼠毛發(fā)稀疏、形體消瘦。在解剖過程中發(fā)現(xiàn)HM組小鼠睪丸周圍的脂肪墊質(zhì)量顯著高于NC組，但與MC組相比，PPDF各組中小鼠的睪丸周圍脂肪墊的質(zhì)量顯著降低，其中PPDF作用效果為M-PPDF＞Z-PPDF＞C-PPDF。由此可大致判斷PPDF有抑制小鼠肥胖的作用。結(jié)合表4分析，NC組小鼠體質(zhì)量、脂/體比較低；與NC組相比，HM組中除M-PPDF組小鼠的體質(zhì)量低于NC組外，其余3組小鼠的體質(zhì)量均高于NC組，但PPDF干預(yù)組與NC組差異不顯著（P＞0.05）；脂/體比均高于NC組小鼠，其中M-PPDF組小鼠的脂/體比與NC組無顯著差異（P＞0.05）。與MC組相比，PPDF干預(yù)組小鼠的體質(zhì)量及脂/體比均顯著降低（P＜0.05），其中M-PPDF作用效果最明顯，分別降低16.39%、49.39%，與解剖結(jié)果一致，表明PPDF有較好的減肥作用。

表4 PPDF對小鼠的脂/體比及臟器指數(shù)影響（n＝8）Table 4 Effect of PPDF on fat/body mass ratio and organ indexes in mice (n= 8)

在小鼠解剖過程中，發(fā)現(xiàn)NC組小鼠的各個器官正常，未有病變現(xiàn)象出現(xiàn)；而在HM組小鼠的各個器官中除了肝臟組織有不同程度的腫大、顏色發(fā)白，有脂肪肝特征出現(xiàn)外，其他臟器無顯著變化；但M-PPDF組小鼠的脾臟指數(shù)顯著增大（P＜0.01），此現(xiàn)象與其他來源的膳食纖維作用效果不同，此現(xiàn)象需進(jìn)一步驗證探究原因。與MC組比較發(fā)現(xiàn)，PPDF組小鼠的脂肪肝特征有減緩現(xiàn)象出現(xiàn)，肝臟腫大現(xiàn)象得到一定的緩解。同時肝臟指數(shù)逐漸降低（P＜0.05）。其中M-PPDF組效果最顯著。以上結(jié)果均表明PPDF能控制小鼠體質(zhì)量的增加速度及幅度，減輕脂肪肝特征，保護(hù)機(jī)體健康[26]。

2.6 PPDF對小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響

圖6 PPDF對小鼠肝臟TC、TG含量的影響Fig. 6 Effect of PPDF on TC and TG levels in liver of mice

由圖6可知，NC組肝臟中的TC、TG含量低，在正常水平。與NC組比較，高脂飲食能顯著升高小鼠肝臟中的TC、TG含量，表明高脂飲食會增加小鼠的肝臟脂質(zhì)水平，進(jìn)一步形成脂肪肝。但PPDF干預(yù)組較MC組小鼠肝臟的TC、TG含量有明顯降低，其中M-PPDF作用效果最明顯，TC、TG含量分別降低了67.5%、54.67%。雖PPDF的添加并未使高脂組小鼠的肝臟脂質(zhì)水平達(dá)到NC組水平，但與MC組相比已顯著降低。這主要是由于PPDF對膽固醇、膽酸鈉等物質(zhì)的吸附作用，并使其隨糞便直接排除體外，進(jìn)而減少機(jī)體的吸收[27]。

2.7 PPDF對小鼠肝臟及血清抗氧化指數(shù)的影響

表5 PPDF對小鼠血清及肝臟的SOD活力和MDA水平的影響（n＝8）Table 5 Effect of PPDF on SOD and MDA levels in serum and liver of mice (n= 8)

MDA是脂質(zhì)氧化的終極產(chǎn)物，可間接反應(yīng)生物膜系統(tǒng)的受損程度。MDA會導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子交聯(lián)，同時會和蛋白質(zhì)的巰基反應(yīng)，使經(jīng)修飾的蛋白質(zhì)和酶等失去活性，從而導(dǎo)致代謝異常；LDL-C的脂質(zhì)過氧化物對動脈硬化斑的形成起著重要作用[28]；高脂飲食可誘導(dǎo)脂代謝紊亂和氧化損傷。由表5可知，MC組、C-PPDF組小鼠的肝臟和血清中MDA水平與NC組相比極顯著性增加（P＜0.01），表明高脂飲食增加了機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)。與MC組相比，PPDF的攝入又對氧化應(yīng)激反應(yīng)有一定的抑制作用，C-PPDF、Z-PPDF、M-PPDF組的肝臟MDA含量分別是MC組的89.81%、73.89%、68.15%，血清中MDA含量是MC組的91.24%、78.22%、73.58%。其中M-PPDF作用效果最明顯，表明隨PPDF的粒徑減小，MDA的含量減少，但均未達(dá)到NC組水平。上述結(jié)果表明PPDF對MDA形成有一定的抑制作用，對生物膜系統(tǒng)有一定的保護(hù)作用。

SOD可以清除機(jī)體中的超氧陰離子自由基，從而保護(hù)細(xì)胞免受傷害，機(jī)體脂肪肝的形成與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)[29]。從表5分析可知，與NC組比較，高脂飲食能降低SOD的活力，表明高脂飲食降低了機(jī)體抗氧化能力，同時增加機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，從而進(jìn)一步引起機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂，是成機(jī)體肝臟組織脂肪化的原因之一。與MC組比較，PPDF干預(yù)組小鼠的肝臟及血清中SOD的活力有一定程度的提高，分別是MC組的117.30%和103.97%（C-PPDF）、127.03%和111.56%（Z-PPDF）、132.82%和115.32%（M-PPDF）。M-PPDF對肝組織的保護(hù)作用最明顯，該組小鼠的SOD的活力與NC組之間不存在顯著性差異（P＞0.05）。以上數(shù)據(jù)表明PPDF對肝組織有一定的保護(hù)作用，能減緩高脂飲食形成的脂肪肝。

2.8 PPDF對小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響

圖7 PPDF對小鼠肝臟組織的影響Fig. 7 Effect of PPDF on liver tissue of mice

在解剖過程中，肉眼觀察新鮮的小鼠肝臟組織，NC組小鼠肝臟顏色鮮紅，質(zhì)地柔軟，而HM組小鼠肝臟呈土黃色，腫大發(fā)白，切面油膩感嚴(yán)重（圖1）。由圖7可知，經(jīng)HE染色后，NC組小鼠肝細(xì)胞以中央靜脈為中心，排列比較整齊，肝細(xì)胞清晰。細(xì)胞核位于細(xì)胞中央同時核大而圓，未見脂肪空泡，表明基礎(chǔ)飼料對小鼠生長無不良影響。而與NC組相比，HM組小鼠肝細(xì)胞排列混亂，細(xì)胞核位置雜亂不一，同時肝細(xì)胞腫大細(xì)胞核被擠到周邊，有大量的脂質(zhì)沉積，肝細(xì)胞內(nèi)充滿了大小不等的脂肪滴，形成大量的脂肪空泡[30]。與MC組比較，各PPDF干預(yù)組小鼠的肝臟病變程度有一定的減輕，但C-PPDF作用效果并不明顯，仍有大量的脂肪空泡出現(xiàn)；其中M-PPDF作用效果最明顯，肝細(xì)胞排列較整齊，基本未出現(xiàn)脂肪空泡。表明PPDF能緩解高脂引起的肝損傷，對肝組織有一定的保護(hù)作用，同時也說明了超微化處理的PPDF對高脂血小鼠肝臟的保護(hù)作用最好，此結(jié)果與肉眼觀察的肝臟外觀結(jié)果一致。

2.9 PPDF對小鼠脂肪病理組織學(xué)的影響

高脂血癥一般表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積成脂肪空泡，進(jìn)而形成“泡沫細(xì)胞”，最后形成紋脂、纖維斑塊，可通過脂肪組織切片大致判斷高脂血癥狀態(tài)。在解剖過程中，能明顯感覺到HM組小鼠的脂肪組織質(zhì)量較NC組增加，另外將脂肪組織放到生理鹽水中清洗時，油膩感嚴(yán)重。由圖8可知，將各組脂肪組織經(jīng)HE染色后，在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)NC組小鼠的脂肪組織細(xì)胞大小均勻一致、排列緊密有序、各個細(xì)胞輪廓清晰、脂肪組織細(xì)胞較小。與NC組比較，HM組小鼠脂肪細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的增大，且大小不一。與MC組比較，PPDF組小鼠的脂肪組織細(xì)胞有一定程度的減小，且相對緊密，但C-PPDF組小鼠與MC組差異不顯著，Z-PPDF組和M-PPDF組脂肪細(xì)胞排列較整齊，其中M-PPDF作用效果最明顯與NC組相差不大，表明PPDF對脂肪組織變性有一定的抑制作用，PPDF粒徑越小抑制作用越強(qiáng)。

圖8 PPDF對小鼠脂肪組織的影響Fig. 8 Effect of PPDF on adipose tissue in mice

3 結(jié) 論

PPDF能促進(jìn)小鼠的腸道蠕動，改善高脂飲食導(dǎo)致的糞便量減少，干硬的狀況；增加高脂血癥小鼠脂肪及膽固醇的排泄量；進(jìn)一步減輕高脂血癥小鼠的體質(zhì)量。在調(diào)節(jié)高脂血癥小鼠血脂方面，雖然在飼養(yǎng)的過程中高脂血癥小鼠的各項指標(biāo)（血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平、AI、LCI值等）并未達(dá)到NC組水平，但與MC組相比有明顯改善，其中M-PPDF的作用效果最明顯。同時PPDF對小鼠肝臟及脂肪組織的病變有很好的改善作用，肉眼觀察可以發(fā)現(xiàn)PPDF干預(yù)組小鼠肝臟的脂肪肝特征逐漸減輕，M-PPDF組大致接近正常水平；而肝臟及組織的病理組織學(xué)切片顯示PPDF能減少高脂飲食造成的肝臟組織病變形成的脂肪泡，抑制肝細(xì)胞進(jìn)一步被破壞和脂肪細(xì)胞的增大。綜上可知，PPDF能夠改善并預(yù)防高脂血癥造成的肝臟及脂肪組織的病變，可將PPDF用于產(chǎn)品開發(fā)中，增加日常膳食纖維的攝入量，從飲食上改善高脂血癥，表明PPDF有良好的發(fā)展前景。