• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高溫?zé)崽幚韺?duì)大豆蛋白消化利用效果的影響

    2019-08-30 06:12:36王雅卉邢霽云徐婧婷郭順堂
    食品科學(xué) 2019年15期
    關(guān)鍵詞:消化熱處理氨基酸

    王雅卉,邢霽云,徐婧婷,郭順堂*

    (中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,植物蛋白與谷物加工北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100083)

    大豆蛋白是優(yōu)質(zhì)蛋白[1],是廣泛用于嬰兒配方食品等特殊膳食的配料[2-3]。熱處理是嬰兒食品加工過程中一種必要的單元操作,工業(yè)化生產(chǎn)中常采用120 ℃以上的高溫殺菌或降低植物蛋白中胰蛋白酶抑制劑等抗?fàn)I養(yǎng)因子活性。同時(shí),熱處理能破壞蛋白分子緊密的四級(jí)結(jié)構(gòu),顯著提高蛋白質(zhì)的消化性[4-5]。然而,有研究發(fā)現(xiàn),某些高溫?zé)崽幚砘虿划?dāng)熱處理會(huì)降低豆類蛋白的營養(yǎng)有效性[6-10]。例如,將菜豆的7S蛋白和蠶豆的11S蛋白在120 ℃條件下熱處理20 min后,置于大鼠小腸內(nèi)酶解1 h,結(jié)果發(fā)現(xiàn),菜豆的7S蛋白可以產(chǎn)生分子質(zhì)量約23.7 kDa的不可消化聚合物,蠶豆的11S蛋白則產(chǎn)生分子質(zhì)量約為20 kDa的疏水性不可消化聚合物[6-8]。可見,與一般熱處理不同,高溫?zé)崽幚硪鹆嗣附猱a(chǎn)物的聚合,從而有可能降低了豆類蛋白的營養(yǎng)有效性。然而,目前尚不明確高溫?zé)崽幚硎欠褚哺淖兞舜蠖沟鞍椎臓I養(yǎng)有效性。為此,本研究分析熱處理后大豆蛋白的氨基酸組成變化,評(píng)價(jià)熱處理后大豆蛋白中必需氨基酸的營養(yǎng)平衡情況,探討熱處理對(duì)大豆蛋白體外模擬消化物組分及分子質(zhì)量分布的影響,以期闡明高溫?zé)崽幚韺?duì)大豆蛋白消化利用的效果,為大豆蛋白特殊膳食食品加工的熱處理控制提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    低溫脫脂豆粕 山松生物制品有限公司。

    胃蛋白酶(P7000)、胰酶(P1750)、β-巰基乙醇、醋酸鈾染液、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、脲、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、過硫酸銨、甘油、考馬斯亮藍(lán)G-250、牛血清白蛋白、Tris Base、乙腈、三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    1100高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)系統(tǒng)、ZORBAX SB-C18色譜柱(分析柱) 美國Agilent公司;Protein Pak 60凝膠柱 美國Waters公司;DYY-6D穩(wěn)壓穩(wěn)流定時(shí)電泳儀 北京六一儀器廠;Spectrum SP-2100UV紫外-可見分光光度計(jì)上海光譜儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 SPI的制備

    將脫脂豆粕與水以液料比1∶15混合后,調(diào)節(jié)pH值為8.0,室溫?cái)嚢?0 min,兩層紗布過濾除去其中的不溶性雜質(zhì)后,接著1 000×g離心10 min得到濾液,將濾液用酸調(diào)整pH值至4.5,置于室溫靜置30 min。將濾液1 000×g離心5 min,去除上清液,沉淀即為大豆分離蛋白(soy protein isolate,SPI);將沉淀取出,加水復(fù)溶,不斷調(diào)整pH值至7.0,待完全溶解后,用液氮速凍后干燥,留樣備用[11-12],樣品中的蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為92%。

    取冷凍干燥后的SPI配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的SPI溶液,分別在100、120、140、160 ℃條件下油浴加熱20 min后,相應(yīng)記為SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160,冷凍干燥備用。

    1.3.2 大豆蛋白氨基酸組成分析

    采用氨基酸自動(dòng)分析儀,分別對(duì)SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160樣品的氨基酸組成進(jìn)行分析。

    1.3.3 大豆蛋白氨基酸營養(yǎng)性評(píng)價(jià)

    根據(jù)1.3.2節(jié)分析得到的SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160氨基酸組成,分別用氨基酸評(píng)分(amino acid score,AAS)、化學(xué)評(píng)分(chemical score,CS)、必需氨基酸指數(shù)(essential amino acid index,EAAI)、氨基酸比值系數(shù)分(score of ratio coefficient of amino acid,SRCAA)、必需氨基酸相對(duì)比值(essential amino acid relative ratio,EAARR)對(duì)不同加熱后的大豆蛋白氨基酸模式進(jìn)行營養(yǎng)性評(píng)價(jià)。

    AAS:用于評(píng)價(jià)待測蛋白質(zhì)中某一必需氨基酸與參考蛋白模式中相應(yīng)必需氨基酸含量的接近程度[13]。如公式(1)所示計(jì)算。

    其中,必需氨基酸中AAS數(shù)值最低者定義為AASmin,其AASmin就是該種蛋白質(zhì)的AAS值。

    CS:評(píng)價(jià)待測蛋白質(zhì)中某一必需氨基酸的相對(duì)含量(其含量與必需氨基酸總量之比)與參考蛋白模式中相應(yīng)必需氨基酸相對(duì)含量的接近程度(世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)/國際食品法典委員(Codex Alimentarius Commission,CAC))[14],如公式(2)所示計(jì)算。

    其中,必需氨基酸中CS數(shù)值最低者定義為CSmin,其CSmin就是該種蛋白質(zhì)的CS值。

    EAAI:評(píng)價(jià)待測蛋白質(zhì)中所有必需氨基酸含量與參考蛋白模式中所有必需氨基酸含量比值的幾何平均數(shù)(以100 分計(jì))[15]。如公式(3)所示計(jì)算。

    式中:p為食物蛋白;s為參考蛋白;n為比較的必需氨基酸個(gè)數(shù)。

    SRCAA:評(píng)價(jià)待測蛋白質(zhì)的必需氨基酸與參考蛋白模式中相應(yīng)必需氨基酸的接近程度[16]。先計(jì)算出各個(gè)氨基酸的比值(AAS),再算出各氨基酸比值的平均數(shù)。在此基礎(chǔ)上計(jì)算氨基酸比值系數(shù)(ratio coefficient of amino acid,RCAA)及SRCAA。具體公式如式(4)~(5)所示。

    式中:CV為RCAA的變異系數(shù),CV=標(biāo)準(zhǔn)差/平均數(shù)。

    EAARR:評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)值與各種必需氨基酸比值距離標(biāo)準(zhǔn)差的平均值之差[17]。如公式(6)所示計(jì)算。

    式中:n為待測蛋白質(zhì)中必需氨基酸的個(gè)數(shù)。

    1.3.4 嬰兒體外消化模型的建立

    根據(jù)Marambe等[18]的方法,并略作改動(dòng)。用pH 4的0.2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)NaCl溶液配制成2.5%的胃蛋白酶溶液(胃液模擬溶液);用pH 7的0.68% KH2PO4和0.062% NaOH混合溶液配制成0.5%胰酶溶液(腸液模擬溶液)。將SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160樣品的pH值調(diào)至4.0,在37 ℃水浴中平衡10 min后,按m(酶)∶m(底物)=1∶5的比例加入胃蛋白酶溶液,在37 ℃條件下分別消化0、1、10、30 min,再將各樣品的pH值調(diào)至7.0,在37 ℃水浴中平衡10 min,按m(酶)∶m(底物)=1∶40加入胰酶溶液,在37 ℃條件下消化30、60 min后分別取樣,作為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)的樣品。腸道消化時(shí)間為60 min時(shí)記為消化終點(diǎn),將胃腸道酶解物冷凍干燥備用。

    1.3.5 嬰兒體外模擬消化物的SDS-PAGE分析

    SDS-PAGE參考Ren Chengang等[19]的方法,將一定量樣品(2~5 mg,以蛋白質(zhì)量計(jì))加入1.5 mL離心管,加入0.5 mL的含有體積分?jǐn)?shù)20%甘油、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2% SDS、0.063 mol/L Tris-HCl(pH 6.8)的樣品處理液,再添加0.36 g脲和20 μL飽和溴酚藍(lán)溶液,加蒸餾水使總體積為1 mL,充分混合均勻,靜置過夜后進(jìn)行SDS-PAGE。

    采用Bio Craft Model BE-210N垂直平板電泳裝置,膠板厚度為1 mm。分離膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12.5%,濃縮膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%。電泳緩沖液含有5 mmol/L Tris、38.4 mmol/L甘氨酸和0.1% SDS。上樣量為5 μL。SDS-PAGE過程中,濃縮膠部分保持電流15 mA,進(jìn)入分離膠后,電流為25 mA。

    膠片用體積分?jǐn)?shù)33%甲醇溶液和12%三氯乙酸固定液固定4 h,然后用考馬斯亮藍(lán)G-250染色液染色3~4 h。染色結(jié)束后,用蒸餾水對(duì)膠片進(jìn)行脫色,直至底色基本脫除。

    1.3.6 胃腸道酶解物分子質(zhì)量分布分析

    采用體積排阻HPLC(size-exclusion HPLC,SE-HPLC)法分析胃腸道酶解物的分子質(zhì)量[20]。在待測樣品冷凍干燥粉中加入0.03 mol/L、pH 7.4的Tris-HCl緩沖液,配制成5 mg/mL的樣品,采用孔徑為0.45 μm的微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。色譜條件如下:1100 HPLC系統(tǒng),色譜柱為Protein Pak 60凝膠色譜柱(分離范圍1~20 kDa);流動(dòng)相:0.03 mol/L、pH 7.4的Tris-HCl緩沖液;檢測波長為214 nm;流速為0.5 mL/min;上樣量為20 μL;檢測溫度為27 ℃。分子質(zhì)量校正曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品為胰蛋白酶抑制劑(MW20 100 Da)、蛋清溶菌酶(MW14 400 Da)、AB2-80(MW7 823 Da)、AB2-81(MW5 856 Da)、AB2-95(MW3 313 Da),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)與保留時(shí)間作回歸分析。再根據(jù)樣品的保留時(shí)間和回歸方程計(jì)算待測樣品的分子質(zhì)量。

    1.3.7 蛋白分子質(zhì)量分布的測定

    SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160分子質(zhì)量的測定采用SE-HPLC法[21]。待測樣品冷凍干燥粉溶于含有0.3 mol/L NaCl的50 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7)中,用直徑為0.45 μm的微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。色譜條件為:1100 HPLC系統(tǒng);色譜柱為TSK gel G4000SWXL凝膠色譜柱;流動(dòng)相為0.3 mol/L NaCl的50 mmol/L pH 7的磷酸鹽緩沖液;檢測波長280 nm;流速0.5 mL/min;上樣量20 μL;檢測溫度27 ℃。

    1.3.8 可溶性蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定

    配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160樣品溶液,室溫下溶解60 min后,10 000×g離心10 min得到上清液,用Bradford法[22]測定上清液中可溶性蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

    1.3.9 色氨酸內(nèi)源熒光發(fā)射光譜分析

    參照Shen Lan等[23]的方法并略作改進(jìn),用熒光光譜儀測定SPI-100、SPI-120、SPI-140、SPI-160樣品中的內(nèi)源(色氨酸)熒光發(fā)射光譜。待測樣品用0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 6.80)溶解,控制蛋白質(zhì)量濃度在0.1~0.2 mg/mL。溶液在290 nm波長處激發(fā),掃描300~420 nm的熒光發(fā)射光譜,狹縫寬度10 nm,掃描速率200 nm/min。

    1.3.10 圓二色光譜分析

    在MOS-450/AF-CD分光儀上收集樣品的圓二色光譜圖。所有樣品的蛋白質(zhì)量濃度均為0.1 mg/mL,在190~250 nm范圍內(nèi)掃描,選用1 mm長度的石英皿并用25 ℃的去離子水作空白,每個(gè)圓二色光譜掃描速率為30 nm/min,數(shù)據(jù)點(diǎn)的記錄間隔為1 nm,響應(yīng)時(shí)間為2 s。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    所有實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析檢驗(yàn),顯著性水平為P<0.05。每個(gè)樣品平行測定3 次,所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 熱處理大豆蛋白的氨基酸組成分析及營養(yǎng)性評(píng)價(jià)

    蛋白質(zhì)的氨基酸組成和含量影響蛋白質(zhì)的營養(yǎng)有效性。對(duì)不同溫度處理后大豆蛋白的氨基酸組成進(jìn)行分析,結(jié)果如表1所示。

    表1 不同溫度處理后大豆蛋白的氨基酸組成及含量Table 1 Amino acid composition of soybean protein under different temperature treatments

    與100 ℃熱處理相比,120 ℃熱處理對(duì)氨基酸組成及含量影響不大,但隨著熱處理溫度升高,大豆蛋白中的氨基酸存在不同程度的損失,其中,以胱氨酸損失最為嚴(yán)重。140、160 ℃的處理?xiàng)l件分別導(dǎo)致胱氨酸損失了30%、48%。這一結(jié)果與Bjarnason等[24]報(bào)道牛血清白蛋白在145 ℃加熱后胱氨酸大量損失的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。當(dāng)加熱溫度過高時(shí),半胱氨酸、胱氨酸會(huì)發(fā)生脫硫反應(yīng),產(chǎn)生不可逆的分解,形成硫化氫、二甲基硫化物、磺基丙氨酸等,造成氨基酸的嚴(yán)重破壞。

    為進(jìn)一步了解不同溫度熱處理后大豆蛋白中的必需氨基酸的營養(yǎng)平衡情況,本實(shí)驗(yàn)采用蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)常用的5 種化學(xué)分析方法:AAS、CS、EAAI、EAARR、SRCAA,以WHO/CAC母乳蛋白氨基酸參考模式為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),對(duì)不同熱處理后大豆蛋白的必需氨基酸進(jìn)行模式評(píng)分計(jì)算,結(jié)果如表2所示。

    無論是以WHO推薦的母乳氨基酸含量為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)還是以CAC推薦的母乳氨基酸含量為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),不同溫度下加熱的大豆蛋白化學(xué)評(píng)分變化趨勢基本相同。與100 ℃的加熱處理相比,除了SRCAA外,120 ℃的熱處理會(huì)使得大豆蛋白的其他化學(xué)評(píng)分略有升高,即越接近母乳蛋白的必需氨基酸比例。然而,當(dāng)進(jìn)一步提高溫度至140、160 ℃時(shí),大豆蛋白的所有化學(xué)評(píng)分均明顯下降,即140、160 ℃的熱處理導(dǎo)致大豆蛋白中必需氨基酸的比例或模式不適于嬰兒所需要的各種氨基酸的比例或模式要求,蛋白的營養(yǎng)有效性顯著下降。大豆蛋白氨基酸的比例模式變化是由于熱處理引起氨基酸的損失造成的。

    表2 不同溫度處理后大豆蛋白的化學(xué)評(píng)分Table 2 Nutritional evaluation of soybean protein under different heat treatments

    2.2 熱處理大豆蛋白體外模擬消化物SDS-PAGE結(jié)果分析

    蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值不僅與蛋白質(zhì)本身的氨基酸含量有關(guān),還取決于蛋白質(zhì)的可消化性、消化產(chǎn)物性質(zhì)及其在生物體內(nèi)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)過程。為了考察高溫?zé)崽幚泶蠖沟鞍左w外消化情況,本研究采用嬰兒體外模擬消化的方法,在不同溫度處理的大豆蛋白消化不同時(shí)間點(diǎn)取樣進(jìn)行SDS-PAGE,通過觀測電泳條帶變化反映樣品的消化情況。如圖1所示,100 ℃熱處理的大豆蛋白在胃部消化30 min后,各個(gè)亞基條帶顏色逐漸變淺,其中,7Sβ亞基被消化酶酶解的速率高于α'和α亞基,11S A亞基的酶解速率高于β亞基。在胃部消化結(jié)束時(shí),SPI的幾個(gè)主要亞基的條帶仍均有不同程度的保留。而進(jìn)一步進(jìn)入腸道消化后,仍然有略低于14 kDa的胃腸道酶解物大量存在。120 ℃熱處理后的大豆蛋白體外消化的SDS-PAGE圖譜與100 ℃加熱處理大豆蛋白的基本相似。

    值得注意的是,140、160 ℃熱處理后的大豆蛋白SDS-PAGE圖譜中并未出現(xiàn)典型的大豆蛋白條帶(泳道2),α'、α、β亞基以及A亞基和B亞基條帶在SDS-PAGE圖譜上不清晰。據(jù)報(bào)道,當(dāng)加熱溫度過高時(shí),半胱氨酸、胱氨酸會(huì)發(fā)生脫硫反應(yīng),肽鍵斷裂,形成硫化氫、二甲基硫化物、磺基丙氨酸等,造成氨基酸的嚴(yán)重破壞[25]。而在一個(gè)具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)分子中,由一條多肽鏈折疊成的三級(jí)結(jié)構(gòu)球蛋白才能稱為蛋白質(zhì)亞基。因此,本實(shí)驗(yàn)中觀察到的140、160 ℃熱處理后大豆蛋白無明顯電泳條帶可能是由于高溫破壞了蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)以及亞基的空間構(gòu)象。

    圖1 熱處理大豆蛋白溶液嬰兒體外模擬消化的SDS-PAGE圖譜Fig. 1 SDS-PAGE of soybean protein digested in simulated infant gastrointestinal tract

    2.3 大豆蛋白胃腸道酶解物分子質(zhì)量分布分析結(jié)果

    圖2 大豆蛋白體外模擬消化后的SE-HPLC圖譜Fig. 2 SE-HPLC profile of soybean protein after in vitro digestion

    進(jìn)一步對(duì)不同溫度處理的大豆蛋白胃腸道酶解物分子質(zhì)量分布進(jìn)行分析。如圖2所示,100、120 ℃熱處理的大豆蛋白經(jīng)胃腸道酶解后得到的胃腸道酶解物的分子質(zhì)量分布沒有顯著性差異。然而,大豆蛋白經(jīng)140、160 ℃高溫處理后胃腸道酶解物的出峰時(shí)間較晚,分子質(zhì)量明顯降低。對(duì)樣品不同分子質(zhì)量組分所占比例進(jìn)一步分析可以看出,隨著加熱溫度逐漸升高,尤其是將大豆蛋白加熱至140、160 ℃后,大分子質(zhì)量(MW>15 kDa)的胃腸道酶解物所占比例顯著降低,低分子質(zhì)量尤其是1~10 kDa的胃腸道酶解物,所占比例顯著提高(表3)。

    表3 大豆蛋白體外模擬消化后不同分子質(zhì)量組分所占比例Table 3 Ratios of fractions with different molecular masses in in vitro digested soybean protein

    2.4 不同溫度加熱后大豆蛋白的可溶性蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)和分子質(zhì)量分布結(jié)果

    蛋白質(zhì)的聚集程度能影響蛋白質(zhì)與胃腸道消化酶的相互作用關(guān)系,進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的消化吸收[26-27]。大量研究表明,具有相同氨基酸組成的蛋白質(zhì)經(jīng)過不同方式處理后,空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化是導(dǎo)致蛋白質(zhì)胃腸道酶解物性質(zhì)差異及消化性和營養(yǎng)性不同的主要原因[4-5,28]。本研究從蛋白聚集程度出發(fā),分析蛋白質(zhì)可消化性與營養(yǎng)有效性的關(guān)系。

    圖3 不同溫度加熱后大豆蛋白的可溶性蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig. 3 Soluble protein content of soybean protein under different heat treatments

    如圖3所示,100、120 ℃熱處理的大豆蛋白可溶性蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低,分別約為77%、67%;而經(jīng)過更高溫度(140、160 ℃)熱處理后,溶液中可溶性蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)升高。進(jìn)一步對(duì)高溫?zé)崽幚泶蠖沟鞍椎姆肿淤|(zhì)量進(jìn)行了分析。如圖4和表4所示,100 ℃熱處理后的大豆蛋白高分子化合物所占比例較高(洗脫時(shí)間約為13 min),低分子質(zhì)量化合物所占比例較低(洗脫時(shí)間約為26.5 min)。繼續(xù)提高加熱溫度,高分子質(zhì)量化合物所占的比例逐漸減小,低分子質(zhì)量的化合物所占比例逐漸增多。

    圖4 不同溫度加熱后大豆蛋白的SE-HPLC圖譜Fig. 4 SE-HPLC profiles of soybean protein under different heat treatments

    表4 大豆蛋白不同分子質(zhì)量組分所占比例Table 4 Ratios of fractions with different molecular masses in soybean protein under different heat treatments

    然而,值得注意的是,本實(shí)驗(yàn)中樣品首先需要通過0.45 μm的濾膜才能進(jìn)一步進(jìn)行SE-HPLC分析。前述的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明,120 ℃的熱處理使得可溶性蛋白含量明顯降低(圖3),因此,對(duì)于120 ℃熱處理后大豆蛋白SE-HPLC圖譜而言,分子質(zhì)量大于670 kDa的高分子聚合物含量明顯降低并不是由于樣品本身聚集程度減少造成的,而是由于在120 ℃熱處理的條件下,大豆蛋白更容易相互聚集,形成了更大的聚集體,但這些高分子聚合物不能透過0.45 μm的濾膜而被過濾造成的。因此,與100 ℃相比,120 ℃熱處理后大豆蛋白的聚集程度較高,但是,消化后酶解產(chǎn)物的分子質(zhì)量并沒有顯著性差異(圖2),可以推測,120 ℃熱處理后的大豆蛋白盡管形成了更大的聚集體,但是這種聚集體并沒有屏蔽胃蛋白酶的酶解位點(diǎn),造成可消化性降低。

    2.5 熱處理大豆蛋白的結(jié)構(gòu)表征

    色氨酸內(nèi)源熒光光譜分析是一種被廣泛用于蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)變化分析的重要手段。不同溫度處理的大豆蛋白色氨酸內(nèi)源熒光光譜如圖5所示。高溫?zé)崽幚韺?dǎo)致蛋白質(zhì)最大內(nèi)源熒光發(fā)射波長發(fā)生顯著紅移(從352.5 nm增加到359.0 nm)。蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光光譜是通過測定色氨酸殘基所處的環(huán)境極性得到的,反映了蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化以及蛋白質(zhì)之間的相互作用。當(dāng)生色團(tuán)暴露在溶劑環(huán)境中時(shí),最大熒光發(fā)射波長(λm)則會(huì)發(fā)生顯著紅移,當(dāng)生色團(tuán)與溶劑中或蛋白質(zhì)本身的猝滅劑作用時(shí),熒光量子產(chǎn)率降低。Dufour等[29]報(bào)道了色氨酸殘基處于球蛋白內(nèi)部疏水性區(qū)域時(shí),SPI的λm約為335~336 nm。因此,高溫?zé)崽幚砗蟮拇蠖沟鞍踪|(zhì)色氨酸殘基所處的溶劑環(huán)境極性提高,即色氨酸殘基從球蛋白內(nèi)部疏水性區(qū)域轉(zhuǎn)移到表面,隨著溫度的逐漸提高,蛋白質(zhì)的變性程度逐漸增大,暴露程度也逐漸增加。

    圖5 不同溫度處理大豆蛋白的色氨酸內(nèi)源熒光發(fā)射光譜Fig. 5 Intrinsic emission fluorescence spectra of soybean protein under different heat treatments

    遠(yuǎn)紫外圓二色光譜(250~200 nm)是一種表征蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)手段,它能夠表征主鏈構(gòu)象,尤其在水溶性的蛋白溶液中。它可以直接用來反映蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)4 種類型的含量。SPI包含4 種類型的二級(jí)結(jié)構(gòu):α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、β-折疊以及無規(guī)卷曲,其中以β-折疊以及無規(guī)卷曲的含量較多[30]。

    圖6 不同溫度處理大豆蛋白的圓二色光譜Fig. 6 Circular dichroism spectra of soybean protein under different heat treatments

    圖6 是不同溫度處理后大豆蛋白的圓二色光譜圖。208 nm和222 nm波長處負(fù)凹糟是由于α-螺旋結(jié)構(gòu)引起的負(fù)科頓效應(yīng)造成的,而205~218 nm的負(fù)肩峰可以表征β-折疊結(jié)構(gòu),負(fù)肩峰越偏向左移則表征無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)含量越多。在本實(shí)驗(yàn)中,隨著加熱溫度的逐漸升高,負(fù)肩峰左移越來越明顯,說明體系內(nèi)的β-折疊結(jié)構(gòu)含量減少并正在向無規(guī)卷曲轉(zhuǎn)化。且溫度越高,轉(zhuǎn)化量越多。Carbonaro等[6]報(bào)道食品蛋白的消化性與β-折疊的含量的相反,β-折疊的含量與加工時(shí)形成穩(wěn)定的聚合物有關(guān),豆類蛋白的β-折疊復(fù)合物的形成是蛋白質(zhì)水解減少的關(guān)鍵。Yang Yong等[31]研究5 種不同品種大豆蛋白的體外消化性,也發(fā)現(xiàn)β-折疊含量與蛋白的體外消化性呈負(fù)相關(guān)。

    140、160 ℃的高溫?zé)崽幚頃?huì)導(dǎo)致肽鍵斷裂數(shù)增多,生成更多更低分子質(zhì)量的肽段,體外消化率顯著提高(圖2)。因此推測,在140、160 ℃的高溫?zé)崽幚項(xiàng)l件下,大豆蛋白體外消化率的提高是由于體系內(nèi)β-折疊結(jié)構(gòu)含量降低導(dǎo)致的。

    3 結(jié) 論

    大豆蛋白是具有較高營養(yǎng)價(jià)值的優(yōu)質(zhì)蛋白,是廣泛用于嬰兒配方食品等特殊膳食的配料。熱處理是嬰兒食品加工過程中一種必要的單元操作。然而高溫?zé)崽幚硎欠窀淖兞舜蠖沟鞍椎臓I養(yǎng)價(jià)值目前尚不清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)考察了高溫?zé)崽幚泶蠖沟鞍兹芤簩?dǎo)致的營養(yǎng)和消化性的差異。結(jié)果表明,一方面,高溫?zé)崽幚碇苯悠茐牧梭w系內(nèi)的氨基酸組成,損壞了大豆蛋白氨基酸合理的模式比例,降低了蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值;另一方面,高溫?zé)崽幚碛欣诖蠖沟鞍着c胃蛋白酶的相互作用,生成更多更低分子質(zhì)量的酶解產(chǎn)物。然而高溫?zé)崽幚硎欠窀淖兞诉@些胃腸道酶解物的結(jié)構(gòu)特征以及是否降低了小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體(PepT1)轉(zhuǎn)運(yùn)肽段的能力從而導(dǎo)致生物吸收能力的低效化等問題則需要進(jìn)一步的探究。

    猜你喜歡
    消化熱處理氨基酸
    “胃不舒服”未必都是消化問題
    祝您健康(2022年2期)2022-01-14 16:43:15
    民用飛機(jī)零件的熱處理制造符合性檢查
    Cr12MoV導(dǎo)桿熱處理開裂分析
    模具制造(2019年10期)2020-01-06 09:13:08
    月桂酰丙氨基酸鈉的抑菌性能研究
    UFLC-QTRAP-MS/MS法同時(shí)測定絞股藍(lán)中11種氨基酸
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:05
    食物是怎么消化的
    小布老虎(2017年4期)2017-08-10 08:22:40
    J75鋼焊后熱處理工藝
    焊接(2016年2期)2016-02-27 13:01:20
    急診消化內(nèi)科上消化道出血治療
    高精度免熱處理45鋼的開發(fā)
    山東冶金(2015年5期)2015-12-10 03:27:41
    一株Nsp2蛋白自然缺失123個(gè)氨基酸的PRRSV分離和鑒定
    午夜福利在线观看吧| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日本黄色视频三级网站网址| 成人亚洲精品一区在线观看| 一级毛片精品| 精品无人区乱码1区二区| 91成年电影在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲无线在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 丝袜美足系列| 午夜免费激情av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久中文字幕一级| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 天堂影院成人在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 无遮挡黄片免费观看| 日日夜夜操网爽| 久久精品成人免费网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日本在线视频免费播放| 欧美色视频一区免费| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美午夜高清在线| 身体一侧抽搐| 美国免费a级毛片| 正在播放国产对白刺激| 久久久国产成人免费| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品一区av在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 两性夫妻黄色片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 波多野结衣高清无吗| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99久久精品国产亚洲精品| 国产精品日韩av在线免费观看 | 日韩有码中文字幕| 久久精品影院6| 一边摸一边做爽爽视频免费| 窝窝影院91人妻| 后天国语完整版免费观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 色尼玛亚洲综合影院| 日本 欧美在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲第一av免费看| 窝窝影院91人妻| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久久久久国产a免费观看| 国产男靠女视频免费网站| 一级毛片高清免费大全| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 黄色女人牲交| 91在线观看av| 亚洲人成电影免费在线| 国产黄a三级三级三级人| 18禁观看日本| 9191精品国产免费久久| 热99re8久久精品国产| 色综合亚洲欧美另类图片| 免费无遮挡裸体视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 老鸭窝网址在线观看| 午夜福利欧美成人| 国产亚洲av高清不卡| 久久伊人香网站| 成人免费观看视频高清| 午夜精品国产一区二区电影| 久久青草综合色| 久久午夜亚洲精品久久| 91精品三级在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品亚洲美女久久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 18禁美女被吸乳视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 在线观看舔阴道视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲七黄色美女视频| 波多野结衣av一区二区av| 一本大道久久a久久精品| www国产在线视频色| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产欧美日韩精品亚洲av| 此物有八面人人有两片| 亚洲午夜理论影院| 亚洲av电影不卡..在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产又爽黄色视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产人伦9x9x在线观看| 国产97色在线日韩免费| 亚洲av熟女| 精品国产美女av久久久久小说| www国产在线视频色| 久久久国产精品麻豆| 深夜精品福利| 亚洲五月色婷婷综合| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜成年电影在线免费观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久久水蜜桃国产精品网| 老汉色∧v一级毛片| 国产激情欧美一区二区| bbb黄色大片| 制服丝袜大香蕉在线| 国产av一区二区精品久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲av片天天在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产av精品麻豆| 国产xxxxx性猛交| 国产精品亚洲一级av第二区| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美一级毛片孕妇| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲国产欧美网| 亚洲中文日韩欧美视频| 日日爽夜夜爽网站| 国产99久久九九免费精品| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲第一电影网av| 欧美一级毛片孕妇| 久久午夜亚洲精品久久| 久久亚洲真实| 在线观看免费视频网站a站| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲午夜理论影院| 久久伊人香网站| 美女 人体艺术 gogo| 免费观看人在逋| 国产高清激情床上av| 悠悠久久av| 少妇熟女aⅴ在线视频| 天堂影院成人在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 91av网站免费观看| 免费av毛片视频| 韩国精品一区二区三区| 国产精品一区二区精品视频观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| www.www免费av| 久久中文字幕一级| 久热这里只有精品99| 不卡一级毛片| 天天一区二区日本电影三级 | 黄色成人免费大全| 在线观看免费午夜福利视频| 在线天堂中文资源库| 久久精品国产综合久久久| 日韩欧美国产在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲av熟女| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 9色porny在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲av美国av| 国产又色又爽无遮挡免费看| 老司机靠b影院| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产一区二区三区视频了| 在线观看66精品国产| 午夜福利影视在线免费观看| 黄片播放在线免费| 三级毛片av免费| 亚洲一码二码三码区别大吗| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品影院久久| 久久精品91蜜桃| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久国产成人精品二区| 亚洲人成电影免费在线| a在线观看视频网站| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲激情在线av| 久久久久久人人人人人| 国产伦一二天堂av在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 精品久久久久久成人av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 69av精品久久久久久| 黄片小视频在线播放| 丁香欧美五月| 亚洲专区中文字幕在线| 国产乱人伦免费视频| 日本三级黄在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 女人被狂操c到高潮| 成年人黄色毛片网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产主播在线观看一区二区| 97碰自拍视频| 国产精品1区2区在线观看.| 在线观看舔阴道视频| 91老司机精品| www.熟女人妻精品国产| 亚洲欧美精品综合久久99| 成年人黄色毛片网站| 午夜福利在线观看吧| 成在线人永久免费视频| 国产精品,欧美在线| 波多野结衣av一区二区av| 午夜免费成人在线视频| 最好的美女福利视频网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美久久黑人一区二区| aaaaa片日本免费| 淫秽高清视频在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 久久久久久久久中文| 制服人妻中文乱码| 性欧美人与动物交配| 一区二区三区精品91| 日本a在线网址| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美在线黄色| 真人做人爱边吃奶动态| 少妇的丰满在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲av成人av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久久久九九精品影院| 欧美激情极品国产一区二区三区| www.自偷自拍.com| 免费在线观看日本一区| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久久国产成人精品二区| 人人妻人人澡人人看| 又大又爽又粗| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久久久久久久久久久大奶| 国产成年人精品一区二区| 午夜福利欧美成人| 免费少妇av软件| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产1区2区3区精品| 国产1区2区3区精品| 国产人伦9x9x在线观看| 婷婷丁香在线五月| 一进一出抽搐动态| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产野战对白在线观看| 麻豆成人av在线观看| 伦理电影免费视频| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美中文综合在线视频| 大码成人一级视频| 免费不卡黄色视频| 禁无遮挡网站| 中亚洲国语对白在线视频| 满18在线观看网站| 亚洲五月天丁香| 丝袜人妻中文字幕| 一本大道久久a久久精品| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产成+人综合+亚洲专区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜久久久久精精品| www.精华液| 午夜成年电影在线免费观看| 无人区码免费观看不卡| tocl精华| 成年人黄色毛片网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 99riav亚洲国产免费| 91av网站免费观看| 丝袜美腿诱惑在线| 淫秽高清视频在线观看| 免费高清视频大片| 国产三级黄色录像| 久久精品人人爽人人爽视色| 叶爱在线成人免费视频播放| 嫩草影院精品99| 免费观看人在逋| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久亚洲真实| 在线观看午夜福利视频| 日本vs欧美在线观看视频| 制服诱惑二区| 久久久国产成人免费| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久性视频一级片| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费看十八禁软件| 精品欧美国产一区二区三| 久久久久久大精品| 国产高清有码在线观看视频 | 大陆偷拍与自拍| 最近最新免费中文字幕在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 操出白浆在线播放| 欧美一级a爱片免费观看看 | 久久性视频一级片| 中文字幕久久专区| 欧美性长视频在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| av视频免费观看在线观看| 亚洲国产精品999在线| 久久久久久人人人人人| 自线自在国产av| 国产成人系列免费观看| 亚洲第一av免费看| 国产精品影院久久| 国产精品综合久久久久久久免费 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 丝袜人妻中文字幕| 午夜福利在线观看吧| 色在线成人网| 国产精品免费一区二区三区在线| 精品欧美国产一区二区三| 99国产精品99久久久久| 午夜免费成人在线视频| 99国产综合亚洲精品| 男女之事视频高清在线观看| 一夜夜www| 国产亚洲av嫩草精品影院| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久久久国产一级毛片高清牌| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲中文av在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲第一青青草原| 亚洲熟妇熟女久久| 国产亚洲精品久久久久5区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | a级毛片在线看网站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 男女之事视频高清在线观看| 嫩草影院精品99| 国产精品二区激情视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产精品九九99| 男女下面插进去视频免费观看| 51午夜福利影视在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久香蕉激情| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久国内视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 三级毛片av免费| 国产激情久久老熟女| 我的亚洲天堂| 国产精品国产高清国产av| 妹子高潮喷水视频| 美女免费视频网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品欧美国产一区二区三| 操美女的视频在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 韩国精品一区二区三区| 亚洲精品一区av在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜福利,免费看| 亚洲av成人av| 最近最新中文字幕大全免费视频| 69av精品久久久久久| 51午夜福利影视在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91精品国产国语对白视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 黄色视频,在线免费观看| 免费在线观看亚洲国产| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 两个人看的免费小视频| 在线观看舔阴道视频| 老司机在亚洲福利影院| 丝袜在线中文字幕| 午夜视频精品福利| 亚洲 国产 在线| 国产成人系列免费观看| 精品久久久久久,| 变态另类丝袜制服| 亚洲国产精品成人综合色| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 午夜免费激情av| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 久久九九热精品免费| 久久草成人影院| 日日夜夜操网爽| 亚洲全国av大片| 老鸭窝网址在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 久久九九热精品免费| 国产区一区二久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 黄片大片在线免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 色播在线永久视频| 美女大奶头视频| 日韩视频一区二区在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 免费无遮挡裸体视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 色老头精品视频在线观看| 深夜精品福利| 操美女的视频在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久久国产a免费观看| 中出人妻视频一区二区| 国产99白浆流出| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产av一区在线观看免费| 亚洲全国av大片| 国产亚洲精品久久久久5区| xxx96com| 亚洲三区欧美一区| 日本 av在线| 桃色一区二区三区在线观看| 成人精品一区二区免费| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 精品久久蜜臀av无| 不卡一级毛片| 电影成人av| 丁香六月欧美| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99久久国产精品久久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩三级视频一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 啦啦啦免费观看视频1| av超薄肉色丝袜交足视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 韩国精品一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产一区在线观看成人免费| 国产一区二区激情短视频| 欧美日韩一级在线毛片| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产午夜精品久久久久久| 成人国语在线视频| 久久精品91蜜桃| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产成人av激情在线播放| 午夜视频精品福利| 国产高清有码在线观看视频 | 免费无遮挡裸体视频| 久久久久久国产a免费观看| www.熟女人妻精品国产| 欧美亚洲日本最大视频资源| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费在线观看日本一区| 99re在线观看精品视频| 制服诱惑二区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 黄色视频不卡| 亚洲第一电影网av| 黄色 视频免费看| 人成视频在线观看免费观看| 一区二区三区国产精品乱码| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 9色porny在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 九色亚洲精品在线播放| 嫩草影院精品99| 国产精品一区二区免费欧美| av在线播放免费不卡| 中文字幕人妻熟女乱码| 老司机在亚洲福利影院| 国产成人精品在线电影| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲欧美日韩无卡精品| e午夜精品久久久久久久| 在线观看www视频免费| 国产高清有码在线观看视频 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲av美国av| 成人亚洲精品av一区二区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 麻豆国产av国片精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产99久久九九免费精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 韩国精品一区二区三区| 久久午夜亚洲精品久久| 少妇 在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲精品一区二区www| 女性生殖器流出的白浆| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久久国产成人免费| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品精品国产色婷婷| 看免费av毛片| 亚洲av美国av| 黄色丝袜av网址大全| av在线播放免费不卡| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 90打野战视频偷拍视频| 国产99久久九九免费精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 黄色丝袜av网址大全| 中文字幕人成人乱码亚洲影| aaaaa片日本免费| 日韩免费av在线播放| 制服诱惑二区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| www.www免费av| 岛国在线观看网站| 制服丝袜大香蕉在线| 国产亚洲精品av在线| 美女高潮到喷水免费观看| av天堂久久9| 美女午夜性视频免费| 亚洲免费av在线视频| 在线观看www视频免费| cao死你这个sao货| 国产伦一二天堂av在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲 国产 在线| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 大型av网站在线播放| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 制服丝袜大香蕉在线| av电影中文网址| 免费观看人在逋| 一本大道久久a久久精品| 久久中文字幕人妻熟女| 精品国产国语对白av| 国产成人精品在线电影| 丝袜美足系列| 久久久国产精品麻豆| 精品高清国产在线一区| 啦啦啦 在线观看视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 制服人妻中文乱码| 久久中文看片网| 制服人妻中文乱码| 亚洲,欧美精品.| 欧美久久黑人一区二区| 18禁国产床啪视频网站| 成人18禁在线播放| 亚洲av美国av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 国产在线精品亚洲第一网站| 88av欧美| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久香蕉国产精品| 午夜日韩欧美国产| or卡值多少钱| 91九色精品人成在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| av电影中文网址| 欧美成人性av电影在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久精品91无色码中文字幕| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲五月天丁香| 久久国产精品影院| 国产精华一区二区三区| 黄色 视频免费看| bbb黄色大片|