系統(tǒng)性紅斑狼瘡患兒血清sCTLA4、TNF-α水平表達(dá)及其臨床意義

信 軍，康 樂(lè)，張藝森，張 劍

(河南省駐馬店市中心醫(yī)院新生兒科，河南 駐馬店 463000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，多認(rèn)為以各種免疫異常為特征，包括T細(xì)胞和B細(xì)胞活化失調(diào)及循環(huán)中B細(xì)胞多克隆活化，產(chǎn)生大量自身反應(yīng)性抗體和大量免疫復(fù)合物，導(dǎo)致機(jī)體多器官損傷[1]。研究證實(shí)[2，3]，T細(xì)胞活化需要雙信號(hào)，B7-CD28通路構(gòu)成的協(xié)同刺激信號(hào)作為T(mén)細(xì)胞活化的第二信號(hào)參與多種免疫性疾病及腫瘤的發(fā)病過(guò)程。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4(CTLA4)屬免疫球蛋白超家族成員，可與CD28競(jìng)爭(zhēng)性與B7結(jié)合，阻止T細(xì)胞進(jìn)一步活化[4]。sCTLA4是CTLA4的可溶形式，目前關(guān)于sCTLA4的報(bào)道較少。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，研究發(fā)現(xiàn)它在免疫系統(tǒng)細(xì)胞間具相互聯(lián)系的介導(dǎo)作用，在自身免疫性疾病中或可起到一定作用[5]。本研究檢測(cè)SLE患兒血清中sCTLA4、TNF-α的水平表達(dá)，并分析sCTLA4、TNF-α在SLE發(fā)病中的作用及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年10月至2018年10月我院就診的SLE患兒40例(SLE組)，均符合《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)及治療進(jìn)展》診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且排除全身嚴(yán)重急性感染、合并其他自身免疫性疾病、腫瘤及嚴(yán)重心、肺、腎臟疾病者。男9例，女31例，年齡5～16歲[(10.85±4.26)歲]；病程1月至3年[(12.55±5.60)年]；根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)評(píng)分[7]將患兒分為活動(dòng)期組(SLEDAI評(píng)分≥10分，22例)和靜止期組(SLEDAI評(píng)分<10分，18例)。選取同期同年齡組無(wú)過(guò)敏性疾病及腫瘤疾病家族史的健康兒童40例為對(duì)照組，男11例，女29例，年齡6～16歲[(11.24±4.72)歲]。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法采集兩組研究對(duì)象晨間空腹?fàn)顟B(tài)靜脈血3 ml，1500 r/min離心10 min，分離血清后凍存于-80 ℃冰箱。擇期行雙抗體夾心ELISA方法測(cè)定血清標(biāo)本中sCTLA4、TNF-α水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE組與對(duì)照組血清sCTLA4、TNF-α水平比較SLE組血清sCTLA4、TNF-α水平高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 SLE組與對(duì)照組血清sCTLA4、TNF-α水平比較

2.2 活動(dòng)期組與靜止期組血清sCTLA4、TNF-α水平比較活動(dòng)期組血清sCTLA4、TNF-α水平高于靜止期組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 活動(dòng)期組與靜止期組血清sCTLA4、TNF-α水平比較

2.3 SLE患兒血清sCTLA4、TNF-α水平與SLEDAI評(píng)分的相關(guān)性分析SLE患兒血清sCTLA4、TNF-α水平均與SLEDAI評(píng)分顯著正相關(guān)(r=0.770，0.757，P<0.05)。見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 SLE患兒血清sCTLA4與SLEDAI評(píng)分的相關(guān)性分析

圖2 SLE患兒血清TNF-α水平與SLEDAI評(píng)分的相關(guān)性分析

3 討論

SLE發(fā)病原因至今未明，多認(rèn)為是在易患基因基礎(chǔ)上受多種因素作用的結(jié)果，其中B細(xì)胞慢性持續(xù)性多克隆激活是激活是其發(fā)病的主要原因，病變可涉及多種組織、器官及系統(tǒng)，發(fā)病過(guò)程中伴多種細(xì)胞因子間的失衡[8]。產(chǎn)生自身抗體的B細(xì)胞活化需要T細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子和共刺激分子輔助，而T細(xì)胞活化需要雙信號(hào)刺激：T細(xì)胞抗原受體(TCR)識(shí)別由抗原提呈細(xì)胞(APC)提呈的抗原肽復(fù)合物而傳遞的信號(hào)為第一信號(hào)，T細(xì)胞上共刺激受體與T細(xì)胞表面多個(gè)黏附分子相互作用時(shí)產(chǎn)生的輔助信號(hào)為第二信號(hào)。目前越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)[9，10]，第二信號(hào)的表達(dá)是建立在第一信號(hào)正常傳遞的基礎(chǔ)上，第一信號(hào)傳遞受阻，則免疫反應(yīng)無(wú)法進(jìn)行；但若僅有APC作用的第一信號(hào)傳遞正常而缺少第二信號(hào)，就無(wú)法有效激活T細(xì)胞，導(dǎo)致T細(xì)胞克隆無(wú)反應(yīng)或程序化細(xì)胞死亡，使機(jī)體喪失免疫監(jiān)視作用，從而使免疫性疾病發(fā)病。劉芝翠等[11，12]研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞活化的第二信號(hào)異常參與多種免疫性疾病及腫瘤行疾病的發(fā)病。

B7-CD28通路構(gòu)成的協(xié)同刺激信號(hào)在T細(xì)胞活化受機(jī)體多細(xì)胞因子調(diào)節(jié)過(guò)程中起著重要作用，可維持機(jī)體免疫平衡穩(wěn)定性，是免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)[13]。而CTLA4屬免疫球蛋白超家族成員，在氨基酸水平與CD28具有高度同源性，皆帶有兩個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域，但與CD28分子功能卻截然相反，可與CD28競(jìng)爭(zhēng)性與B7結(jié)合，干擾B7與CD28介導(dǎo)的共刺激，產(chǎn)生負(fù)性調(diào)節(jié)信號(hào)，抑制T細(xì)胞活化、增殖。Dahal等[14]研究發(fā)現(xiàn)，SLE、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等自身免疫性疾病的T細(xì)胞表面CD28、CTLA4的表達(dá)都發(fā)生了變化，提示這些共刺激分子異常表達(dá)或許與自身免疫性耐受的喪失導(dǎo)致的自身免疫性疾病相關(guān)。王璇等[15]動(dòng)物研究對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠注射CTLA-4拮抗劑基因起到了治療自身免疫性甲狀腺炎的效果。sCTLA4是CTLA4的可溶形式，可通過(guò)干擾T細(xì)胞活化的第二信號(hào)參與多種免疫性疾病的發(fā)病。本研究對(duì)比發(fā)現(xiàn)，SLE組患兒血清sCTLA4水平顯著高于對(duì)照組，活動(dòng)期組患兒血清sCTLA4水平顯著高于靜止期組，且SLE患兒血清sCTLA4水平與SLEDAI評(píng)分顯著正相關(guān)，提示SLE患兒血清sCTLA4水平異常升高，且隨病情嚴(yán)重程度加重而持續(xù)升高，可推測(cè)sCTLA4在SLE患兒的發(fā)病及病情進(jìn)展過(guò)程中可能具重要作用。

TNF-α是由活化的單核-巨噬細(xì)胞及T、B細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，具有多種生物學(xué)活性。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究[16，17]已證實(shí)TNF-α可誘導(dǎo)角朊細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子，從而提供中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的黏附位點(diǎn)，但其大量產(chǎn)生可導(dǎo)致機(jī)體免疫平衡被破壞，與其他炎癥因子介導(dǎo)多種病理?yè)p傷，在炎癥及自身免疫反應(yīng)中具重要調(diào)控作用。本研究對(duì)比發(fā)現(xiàn)，SLE組患兒血清TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，活動(dòng)期組患兒血清TNF-α水平顯著高于靜止期組，且SLE患兒血清TNF-α水平與SLEDAI評(píng)分顯著正相關(guān)，與既往研究相符[18]，認(rèn)為T(mén)NF-α水平異常升高可能會(huì)影響機(jī)體免疫紊亂，參與SLE的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，sCTLA4、TNF-α參與了兒童SLE的發(fā)病過(guò)程，且與SLEDAI評(píng)分密切相關(guān)，可考慮作為監(jiān)測(cè)兒童SLE病情活動(dòng)嚴(yán)重程度的參考指標(biāo)，有助于疾病的病情及預(yù)后評(píng)估。