瑞-吉染色法在惡性漿膜腔積液快速鑒別診斷中的應(yīng)用價值

陳將南 許文芳 柳紅梅 周艷麗 金琦銘

漿膜腔積液常規(guī)檢查耗時短、易操作、檢驗結(jié)果報告快[1]，廣泛應(yīng)用于臨床，對判斷漿膜腔積液性質(zhì)有重要作用。漿膜腔積液瑞-吉染色法檢查鑒別良惡性腫瘤越來越受到檢驗工作者的重視，其對惡性腫瘤的診斷具有重要價值[2]。但運用漿膜腔積液瑞-吉染色法查找惡性腫瘤細胞常被忽視，使臨床醫(yī)師在無脫落細胞病理學(xué)檢查支持時，對惡性漿膜腔積液常缺乏有效的判斷依據(jù)。本研究對148例惡性漿膜腔積液行常規(guī)瑞-吉染色法與液基細胞學(xué)技術(shù)的結(jié)果進行比較，探討瑞-吉染色法的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集本院2015年1月至2018年6月臨床最終診斷惡性漿膜腔積液患者148例，其中男83例，女 65 例，年齡 14～88（62.90±16.68）歲。重炎性標(biāo)本指有核細胞計數(shù)＞7.0×109/L，重血性標(biāo)本指紅細胞計數(shù)＞15×109/L；惡性漿膜腔積液指患者出院診斷為惡性積液或疑似惡性漿膜腔積液隨訪中診斷為惡性漿膜腔積液。標(biāo)本周轉(zhuǎn)時間（TAT）指實驗室接收標(biāo)本到檢驗報告完成的時間。

1.2 漿膜腔積液瑞-吉染色制片法 采用珠海貝索試劑。用含EDTA-K2抗凝劑的漿膜腔積液專用采集管采集積液10ml，1 500r/min，離心10min，用滴管吸盡上清液（必要時可用移液槍吸棄），沉渣推制高質(zhì)量涂片1～3張（細胞多的積液可推制更多涂片以提高陽性率），如積液細胞太多可酌情增加殘留液體，干燥后行瑞-吉染色[3]。由2位經(jīng)驗豐富的檢驗技師閱片確認(rèn)。結(jié)果判定：陽性為找到腫瘤細胞或疑似腫瘤細胞，陰性為未找到腫瘤細胞。

1.3 瑞-吉染色法油鏡下常見惡性腫瘤細胞形態(tài)特征及檢查方法[3-4]（1）腺癌細胞：胞體大小不一，多數(shù)細胞可見相互粘連、腺腔樣排列，細胞質(zhì)豐富，漿界不清，細胞內(nèi)可見大小不一，數(shù)量不等的分泌泡；（2）低分化癌細胞：排列較緊密，細胞質(zhì)很少，無分泌泡，成團狀排列或呈單個裸核樣細胞，多數(shù)細胞核較小，也可見個別核較大；（3）淋巴瘤細胞：細胞體積較大，細胞質(zhì)多少不一，細胞質(zhì)內(nèi)可見大量蜂窩狀或散在空泡；核較大，核形不規(guī)則，有凹陷內(nèi)折現(xiàn)象，核染色質(zhì)粗顆粒狀，排列疏松；核仁明顯；（4）檢查方法：采用低倍鏡觀察全片，需特別重視尾部“海岸線”上細胞，仔細觀察是否有成團的細胞或單個體積比較大的異常細胞，對于可疑的細胞采用油鏡仔細觀察、鑒別并分類計數(shù)。

1.4 漿膜腔積液液基薄層制片法 將送檢漿膜腔積液標(biāo)本放置30min，棄上清液，將剩余底部標(biāo)本15ml，置有抗凝劑的離心管中2 400r/min離心10min，棄上清液，取沉淀物置入液基細胞保存液中混勻，放入制片倉現(xiàn)降10min，去掉多余液體，無水乙醇固定1min，HE染色，脫水、封片鏡檢。由2位病理科醫(yī)師閱片確認(rèn)。結(jié)果判定：陽性為找到腫瘤細胞或異形細胞，陰性為未找到腫瘤細胞。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。計量資料用表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 148例患者的原發(fā)病及積液類型 148例惡性漿膜腔積液患者中，以肺癌最多，其次為肝、膽細胞癌及胃、腸癌；見表1。

表1 148例患者的原發(fā)病及積液類型（例）

2.2 兩種方法陽性檢出率及TAT的比較 瑞-吉染色法惡性腫瘤細胞檢出率為81.1%，液基細胞學(xué)技術(shù)惡性腫瘤細胞檢出率為82.4%，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.091，P ＞0.05）。其中液基細胞學(xué)技術(shù)陰性而瑞-吉染色法陽性24例，液基細胞學(xué)技術(shù)陽性而瑞-吉染色法陰性26例。瑞-吉染色法TAT明顯少于液基細胞學(xué)技術(shù)，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=94.495，P＜0.01）。見表2。

表2 瑞-吉染色法與液基細胞學(xué)技術(shù)結(jié)果陽性率及TAT的比較

2.3 兩種方法在不同特性標(biāo)本中陽性檢出率比較 148例惡性漿膜腔積液中重血性和（或）重炎性標(biāo)本66例（占44.6%）。在非重血性、非重炎性標(biāo)本中瑞-吉染色法的惡性腫瘤細胞檢出率均高于液基細胞學(xué)技術(shù)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在重血性標(biāo)本中瑞-吉染色法的惡性腫瘤細胞檢出率低于液基細胞學(xué)技術(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在重炎性標(biāo)本中瑞-吉染色法的惡性腫瘤細胞檢出率低于液基細胞學(xué)技術(shù)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。瑞-吉染色法在重血性、重炎性標(biāo)本中惡性腫瘤細胞檢出率分別低于非重血性、非重炎性標(biāo)本，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而液基細胞學(xué)技術(shù)兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3、4。

表3 瑞-吉染色法與液基細胞學(xué)技術(shù)在重血性標(biāo)本與非重血性標(biāo)本中結(jié)果比較[例（%）]

表4 瑞-吉染色法與液基細胞學(xué)技術(shù)在重炎性標(biāo)本與非重炎性標(biāo)本中結(jié)果比較

3 討論

漿膜腔積液脫落細胞學(xué)檢測對惡性腫瘤的診斷及鑒別診斷具有重要價值。在漿膜腔積液中直接查到惡性細胞仍是目前確診惡性胸腹水的最迅速、可靠、經(jīng)濟的方法[5]。瑞-吉染色法多張涂片查找腫瘤細胞是非常有效的方法[6]，因此越來越受到臨床和檢驗科的重視。

本研究148例惡性漿膜腔積液中，以肺癌為主，占60.8%。而在肺癌中以胸腔轉(zhuǎn)移最常見（86.7%），其次乳腺癌也以胸腔轉(zhuǎn)移為主。卵巢癌以腹腔轉(zhuǎn)移為主，其次胃癌、肝癌也以腹腔轉(zhuǎn)移較多[7]。

本研究提示在非重血性和非重炎性的標(biāo)本中，瑞-吉染色法陽性率（分別為89.1%和86.2%）高于液基細胞學(xué)技術(shù)（分別為82.2%和84.5%）。本研究中24例液基細胞學(xué)技術(shù)陰性而瑞-吉染色法陽性的樣本中，以非重血性和非重炎性的標(biāo)本為主，瑞-吉染色法制片滿意度高。特別是惡性細胞數(shù)量較少的標(biāo)本，液基細胞學(xué)技術(shù)制片滿意度不高[8]，影響其陽性檢出率。瑞-吉染色法在油鏡下放大1 000倍對單個或成堆的細胞進行觀察，細胞質(zhì)、核清晰，對細胞質(zhì)量的多少和染色特性、對細胞核和核仁的結(jié)構(gòu)特征進行細致的觀察綜合分析能較好鑒別細胞的良惡性質(zhì)[9]。而液基細胞學(xué)技術(shù)在高倍鏡下放大400倍觀察涂片細胞，注重觀察脫落細胞成堆或組織結(jié)構(gòu)對細胞良惡性質(zhì)進行鑒別，當(dāng)腫瘤早期腹腔轉(zhuǎn)移或惡性細胞脫落較少、散在時，易造成假陰性[10]。本研究中瑞-吉染色法檢出的6例惡性淋巴瘤細胞，在液基細胞學(xué)技術(shù)中均未檢出。因為瑞-吉染色法更有利于單個細胞的識別，不僅能對單散存在的淋巴瘤細胞結(jié)構(gòu)在油鏡下清晰、細致的辨認(rèn)，對各種血細胞（如白血病細胞、淋巴細胞）及寄生蟲、真菌等染色效果更好，更易識別[2]，而液基細胞學(xué)技術(shù)則非常困難[11]。因此，對于細胞結(jié)構(gòu)特征的觀察，瑞-吉染色法要優(yōu)于液基細胞學(xué)技術(shù)，對于癌細胞少量脫落、組織結(jié)構(gòu)不明顯、惡性血液腫瘤侵犯漿膜腔的檢出，瑞-吉染色法更有優(yōu)勢。本研究中有26例瑞-吉染色法陰性而液基細胞學(xué)技術(shù)陽性，這些標(biāo)本以重血性和重炎性為主，分析原因是大量的紅細胞或炎性細胞和惡性腫瘤細胞同時被濃縮，當(dāng)惡性腫瘤細胞脫落到漿膜腔的量較少時，在積液中會被大量的紅細胞或炎性細胞稀釋，或被炎性物質(zhì)破壞，在涂片鏡檢時易導(dǎo)致假陰性。因此，在行瑞-吉染色法查找惡性細胞時，離心后應(yīng)盡量吸盡上清液并吸取有核細胞層制片，以提高惡性細胞的含量，必要時可制多片鏡檢，提高陽性檢出率。

本研究中有2例患者臨床最終診斷惡性胸腔積液而瑞-吉染色法和液基細胞學(xué)技術(shù)均為陰性結(jié)果。2例患者分別為肺癌伴血性膿性胸腔積液和肺癌伴膿性胸腔積液，積液CEA均＞10 000ng/ml，有核細胞計數(shù)分別為156×109/L和478×109/L。瑞-吉染色后油鏡下查細胞以破碎、退化中性粒細胞和紅細胞為主。分析原因可能為大量的血液細胞稀釋了癌細胞，或膿性胸腔環(huán)境和膿性滲出物破壞了癌細胞的結(jié)構(gòu)，降低了癌細胞的檢出率[3]。因此對于嚴(yán)重膿性積液患者，結(jié)合其他生化免疫指標(biāo)等檢查綜合分析顯得尤為重要。

本研究顯示瑞-吉染色法與液基細胞學(xué)技術(shù)對惡性漿膜腔積液查找惡性細胞陽性率無明顯差異。而瑞-吉染色法的TAT要明顯優(yōu)于液基細胞學(xué)技術(shù)。瑞-吉染色法操作簡便，能在較短的時間內(nèi)進行涂片、干燥、染色鏡檢，完成檢驗。因此瑞-吉染色法能為臨床快速鑒別漿膜腔積液的性質(zhì)提供依據(jù)，能在短時間內(nèi)了解患者病情，為患者爭取治療的時間，減少患者不必要的檢查和治療，減輕患者經(jīng)濟壓力等方面都有積極的作用和優(yōu)勢。

本研究中有11例患者，瑞-吉染色法發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)存在異常，液基細胞學(xué)技術(shù)未找到腫瘤細胞，積液腫瘤標(biāo)志物升高，在隨訪中丟失，未納入統(tǒng)計。不同的醫(yī)療單位，檢驗者技術(shù)水平存在差異，本研究的數(shù)據(jù)僅反映了本單位的情況，但檢驗者均應(yīng)不斷提高自身的技術(shù)水平，以提高漿膜腔積液惡性腫瘤細胞的陽性檢出率。