添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素發(fā)酵過(guò)程中理化指標(biāo)與活性成分變化的影響

唐思煜,翁云丹,毛 舸,蔡成崗,2,3,*,毛建衛(wèi),2,3,*

(1.浙江省農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)與生物加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江省農(nóng)業(yè)生物資源生化制造協(xié)同創(chuàng)新中心,浙江科技學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院,浙江杭州 310023;2.浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院,浙江杭州 310058)

燕麥?zhǔn)枪阮?lèi)中最好的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)食品之一,能夠治療和預(yù)防心腦血管疾病[1]、糖尿病[2]和肥胖病[3],同時(shí)還具有改善便秘[4]、促進(jìn)傷口愈合[5]、預(yù)防骨質(zhì)疏松的功效。燕麥中蛋白質(zhì)含量一般為13%～17%[6],氨基酸的含量均衡,且賴氨酸含量高;燕麥籽粒脂肪[7]含量約為5%～7%,其中非不飽和脂肪酸所占比例大[8];燕麥還含有豐富的膳食纖維和維生素E、B1和B2等,具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。

食用植物酵素是以一種或多種新鮮蔬菜、水果、谷豆類(lèi)、海藻類(lèi)、藥食兩用本草類(lèi)等食材為原料,加(或不加)糖類(lèi)物質(zhì),經(jīng)多種有益菌通過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間發(fā)酵而生產(chǎn)的功能性微生物發(fā)酵產(chǎn)品[9-12]。隨著人們保健意識(shí)的增強(qiáng),酵素受到了廣泛關(guān)注,酵素種類(lèi)呈多樣化發(fā)展。發(fā)酵加工不僅保留了原料本身的營(yíng)養(yǎng)成分,而且在發(fā)酵過(guò)程中通過(guò)菌種生長(zhǎng)代謝產(chǎn)生新的活性物質(zhì),如氨基酸、酶、維生素、酚類(lèi)等[13-14],促進(jìn)谷物酵素抗氧化、調(diào)節(jié)腸道平衡、增強(qiáng)免疫、減肥、解酒、抗菌、促進(jìn)傷口愈合等[15-19]功能。此外,發(fā)酵加工可以延長(zhǎng)谷物產(chǎn)品的貨架期,改善品質(zhì)結(jié)構(gòu)和口感,提高食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,同時(shí)產(chǎn)生豐富的風(fēng)味物質(zhì)[20],使其更容易被大眾接受,是一種具有研發(fā)前景的高附加值加工方法。

目前國(guó)內(nèi)外的燕麥產(chǎn)品除了燕麥片、燕麥粥之外,還有通過(guò)發(fā)酵制得的燕麥乳酸飲料、燕麥面包、燕麥酸奶、燕麥啤酒[21-26]等,但是以裸燕麥種子為單一原料進(jìn)行酵母發(fā)酵生產(chǎn)酵素的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以裸燕麥種子為原料,添加純種酵母菌促進(jìn)酵解,添加糖類(lèi)成分加速發(fā)酵,同時(shí)對(duì)比不添加糖類(lèi)成分的裸燕麥種子發(fā)酵,選擇多酚含量為功能性成分指標(biāo)、還原糖和酒精含量為發(fā)酵進(jìn)程指標(biāo),并對(duì)基本營(yíng)養(yǎng)成分可溶性蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)試,以考察不同發(fā)酵階段各物質(zhì)成分的變化情況,為新型裸燕麥酵素工藝優(yōu)化及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

菌種:安琪活性干酵母 安琪酵母股份有限公司;山西裸燕麥 太谷縣綠寶種業(yè)有限公司;蔗糖 市售;中性-α-淀粉酶(10000 U/g)、糖化酶(100000 U/g)、福林酚、沒(méi)食子酸、DNS、氫氧化鈉、重蒸酚、無(wú)水亞硫酸鈉、酒石酸鉀鈉、碳酸鈉、考馬斯亮藍(lán)、磷酸、乙醇(均為分析純) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;叔丁醇(色譜純) 阿拉丁化學(xué)試劑有限公司。

FA2004電子天平 上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;RHP-600型高速多功能粉碎機(jī) 浙江榮浩工貿(mào)有限公司;UV-5500紫外分光光度計(jì) 上海元析儀器有限公司;PHS-3C 數(shù)顯酸度計(jì) 杭州奧利龍儀器有限公司;GC-2010 Pro 島津企業(yè)管理(中國(guó))有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 裸燕麥酵素的制作 將揀過(guò)雜質(zhì)、碎粒的裸燕麥種子粉碎,過(guò)20目篩,按1∶10加入去離子水,在80 ℃下水浴糊化20 min,加入淀粉酶(相對(duì)底物數(shù)量添加的酶量為12 U/g),在60 ℃、pH6.0下液化50 min,調(diào)節(jié)pH至4.5,加入糖化酶(相對(duì)底物數(shù)量添加的酶量為100 U/g),在65 ℃下糖化50 min。糖化結(jié)束后121 ℃高溫殺菌20 min,確保樣品接種酵母菌后保持純種發(fā)酵狀態(tài)。將滅菌后的樣品分為六個(gè)平行,每三個(gè)平行為一組,每個(gè)平行約10 L,分別裝入20 L發(fā)酵罐中,各組皆加入5%的活化酵母菌(W/W),一組全加糖(9%,W/W),一組全不加糖,在28 ℃的環(huán)境下發(fā)酵168 h,每24 h取樣。樣品在8000 r/min下離心15 min,取上清液-20 ℃下冷凍保存,待測(cè)。

1.2.2 指標(biāo)檢測(cè)方法

1.2.2.1 還原糖含量測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:吸取0.05、0.01、0.15、0.2、0.25、0.3 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/mL)于10 mL試管中,用去離子水補(bǔ)至1 mL,加入3 mL的DNS試劑,混勻后在沸水浴中加熱5 min,冷卻后定容至10 mL,放置30 min,在520 nm下測(cè)定吸光度,以去離子水作為空白對(duì)照。

樣品測(cè)定:準(zhǔn)確吸取待測(cè)液,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作測(cè)定吸光度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算發(fā)酵液中還原糖含量(以葡萄糖計(jì))。

1.2.2.2 pH測(cè)定 使用PHS-3C數(shù)顯酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)定,每個(gè)樣品平行三次。

1.2.2.3 酒精含量測(cè)定 參照GB 5009.225-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)酒中乙醇濃度的測(cè)定》[27]中方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2.4 可溶性蛋白含量測(cè)定 裸燕麥酵素中可溶性蛋白含量(以牛血清蛋白計(jì))測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法[28]。準(zhǔn)確吸取0、0.06、0.10、0.14、0.18、0.20 mL 1 mg/mL牛血清蛋白溶液,加入0.15 mg/L的NaCl溶液至1 mL,加入考馬斯亮藍(lán)試劑5 mL,避光反應(yīng)10 min,于595 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。樣品測(cè)定:準(zhǔn)確吸取待測(cè)液,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作測(cè)定吸光度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算發(fā)酵液中可溶性蛋白含量(以牛血清蛋白計(jì))。

1.2.2.5 總酚含量測(cè)定 參照文獻(xiàn)[29]方法稍作修改。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:配制0、100、200、300、400、500 μg/mL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,取0.1 mL于10 mL離心管中,加入5 mL去離子水,0.5 mL 1 mol/L Folin-Ciocalteau試劑,混勻靜置8 min后,加入7.5 g/100 mL的Na2CO3溶液4 mL,充分混勻后在25 ℃水浴遮光靜置1 h,于765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,以去離子水做空白。樣品測(cè)定:準(zhǔn)確吸取待測(cè)液,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作測(cè)定吸光度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算發(fā)酵液中總酚含量(以沒(méi)食子酸計(jì))。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)中每個(gè)樣品做三個(gè)平行,每個(gè)處理重復(fù)三次,數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式呈現(xiàn),采用SPSS 24.0數(shù)據(jù)處理,使用T檢驗(yàn)、相關(guān)性分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.1 還原糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線 如圖1所示,還原糖含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2.0236x-0.1268(R2=0.9997)。

圖1 還原糖含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.2 酒精含量標(biāo)準(zhǔn)曲線 如圖2所示,乙醇/叔丁醇濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0039x-0.0163(R2=0.9996)。

圖2 乙醇/叔丁醇濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.3 可溶性蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線 如圖3所示,得可溶性蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3.9544x+0.2326(R2=0.9999)。

圖3 可溶性蛋白含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.4 多酚含量標(biāo)準(zhǔn)曲線 如圖4所示,得回歸方程為y=1.5315x+0.0183(R2=0.99895)。

圖4 總酚含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中理化指標(biāo)和活性成分的影響

2.2.1 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中還原糖含量的影響 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中還原糖含量變化見(jiàn)圖5。發(fā)酵0 h時(shí)添加蔗糖與不添加蔗糖的發(fā)酵液中還原糖濃度差最大,為16.53 mg/mL,之后濃度差減小。這是因?yàn)榻湍妇M(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,種群數(shù)量劇增,營(yíng)養(yǎng)消耗劇大,還原糖濃度迅速下降,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng),加糖裸燕麥酵素在72 h到達(dá)最低點(diǎn),還原糖含量為4.45 mg/mL,之后有略微回升。這可能是因?yàn)檎崽堑奶砑哟偈菇湍妇敝乘俣燃涌?相比不加糖樣品更快進(jìn)入發(fā)酵后期,酵母菌死亡速度超過(guò)繁殖速度,糖類(lèi)物質(zhì)消耗速度減緩,死亡的菌體溶解于發(fā)酵液導(dǎo)致還原糖含量有所上升。而不加糖酵素在48 h后趨勢(shì)平緩下降,168 h時(shí)樣品中還原糖含量達(dá)到3.15 mg/mL。蔗糖添加與否對(duì)于裸燕麥酵素還原糖含量變化影響不明顯。

圖5 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中還原糖含量的影響

沈昌等[30]接種10%的酵母菌發(fā)酵糙米汁、麥芽汁和黃豆芽汁混合液48h,還原糖含量在18 h達(dá)到最低,之后趨于穩(wěn)定。杜慶爽[31]在紅棗汁中接種5%的不同酵母于27 ℃下發(fā)酵7 d,結(jié)果表明,10種酵母菌發(fā)酵液中還原糖含量變化趨勢(shì)相同,在0～2 d內(nèi)還原糖含量急劇下降,之后速度趨緩,直至基本保持不變。這些研究均與本文結(jié)果一致。在生長(zhǎng)初期,酵母菌需要利用還原糖使自身菌體濃度增加,酵母菌的大量繁殖也促使還原糖進(jìn)一步被快速消耗。

2.2.2 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素pH的影響 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素pH含量影響的變化如圖6所示。高溫處理后,加糖的燕麥溶液pH較不加糖溶液pH低,可能是高溫滅菌過(guò)程中,蔗糖水解成部分的葡萄糖,進(jìn)一步解離成葡萄糖酸,降低了溶液中的pH,另外可能是蔗糖與燕麥中其他成分反應(yīng)等原因降低了溶液的pH,其原因需要進(jìn)一步探討。發(fā)酵過(guò)程中加糖裸燕麥酵素的pH在發(fā)酵過(guò)程中始終低于不加糖裸燕麥酵素,兩者變化趨勢(shì)相似,在24 h時(shí)pH分別由4.37、5.42降到3.48、4.16,且隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)趨于穩(wěn)定。不加糖裸燕麥酵素pH穩(wěn)定在4左右,而加糖裸燕麥酵素pH在3.5上下浮動(dòng)。酵母菌通過(guò)糖酵解途徑和三羧酸循環(huán),在生長(zhǎng)期產(chǎn)生大量有機(jī)酸等酸類(lèi)物質(zhì),導(dǎo)致pH驟降[30]。

圖6 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素pH的影響

2.2.3 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素酒精含量的影響 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素發(fā)酵過(guò)程中酒精含量的變化對(duì)比見(jiàn)圖7。由圖7可知,不加糖裸燕麥酵素酒精含量發(fā)酵48 h時(shí),從0.09%上升到1.48%,48 h后趨于穩(wěn)定。加糖裸燕麥酵素在72 h時(shí),酒精含量達(dá)到最大值5.26%,之后逐漸降低,168 h時(shí)酒精含量為4.03%。杜慶爽[31]研究10種酵母菌發(fā)酵紅棗酒過(guò)程中酒精度變化趨勢(shì)發(fā)現(xiàn),4 d后酒精含量變化較平緩,7 d時(shí)酒精含量最高為8.2%,高于本試驗(yàn)所做的裸燕麥酵素。

圖7 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素酒精含量的影響

2.2.4 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素可溶性蛋白的影響 圖8為添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中可溶性蛋白含量變化的影響。由圖8可知,蔗糖含量的添加對(duì)裸燕麥酵素發(fā)酵過(guò)程中可溶性蛋白含量有非常明顯的影響。發(fā)酵48 h,加糖裸燕麥酵素的可溶性蛋白含量相比發(fā)酵前增加23.98%,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng),可溶性蛋白含量緩慢上升,發(fā)酵168 h時(shí),增加量達(dá)到41.52%。與加糖裸燕麥酵素不同,不加糖裸燕麥酵素的可溶性蛋白含量在發(fā)酵48 h時(shí)下降54.24%,在48 h以后可溶性蛋白含量有所回升,但總體呈下降趨勢(shì)。蔗糖的添加降低了酵母對(duì)燕麥底物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用,相比于不加糖樣品,酵母菌繁殖后產(chǎn)生大量菌體蛋白,同時(shí)大分子蛋白水解成小分子溶于發(fā)酵液中,因此整體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。

圖8 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中可溶性蛋白的影響

沈昌等[30]研究發(fā)現(xiàn),以糙米為主要原料的富硒酵母發(fā)酵液在發(fā)酵過(guò)程中,可溶性蛋白含量迅速降低,18 h后緩慢上升。發(fā)酵初期,可溶性蛋白被菌種利用,導(dǎo)致其含量迅速下降,之后含量有所上升,可能是因?yàn)榫N死亡自溶引起胞內(nèi)蛋白質(zhì)溢出。羅建成等[32]以玉米秸稈為原料經(jīng)多菌體發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)可溶性蛋白與發(fā)酵前相比,增幅為112.4%,與本試驗(yàn)結(jié)論類(lèi)似,說(shuō)明通過(guò)菌種發(fā)酵加工可以提高發(fā)酵產(chǎn)品中可溶性蛋白的含量。

2.2.5 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素多酚含量的影響 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素發(fā)酵過(guò)程中多酚含量的變化見(jiàn)圖9。發(fā)酵0 h時(shí),多酚含量結(jié)果相差(0.053±0.01) mg/mL,即(0.053±0.01) g/L,由于試驗(yàn)采用20 L的發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵,初始成分含量差異可能是由系統(tǒng)誤差引起的。由圖9可知,添加蔗糖可使裸燕麥酵素多酚含量明顯增加。隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng),168 h時(shí)加糖發(fā)酵的裸燕麥酵素中多酚含量增加12.10%;不加糖發(fā)酵的裸燕麥酵素在發(fā)酵過(guò)程中多酚含量總體呈下降趨勢(shì),發(fā)酵168 h時(shí)多酚含量下降4.13%,此時(shí)加糖裸燕麥酵素多酚含量比不加糖裸燕麥酵素高24.23%。

圖9 添加蔗糖對(duì)裸燕麥酵素中多酚含量的影響

發(fā)酵初始,加糖發(fā)酵液還原糖濃度為52.98 mg/mL,不加糖發(fā)酵液還原糖濃度為36.45 mg/mL。多酚含量的增加可能是因?yàn)樘砑诱崽翘岣吡税l(fā)酵液中糖的濃度,促進(jìn)燕麥中多酚等成分析出;糖類(lèi)物質(zhì)促使酵母菌發(fā)酵降解燕麥,也使得發(fā)酵液中多酚含量增加。沒(méi)有添加蔗糖的發(fā)酵液中碳源相對(duì)于添加蔗糖組的少,因此后者樣品中有效成分,如多酚類(lèi)物質(zhì)可能被酵母菌利用而導(dǎo)致其濃度降低。張敏[33]在酵母菌發(fā)酵蜂蜜酒研究中發(fā)現(xiàn),發(fā)酵后蜂蜜酒中總酚和總黃酮含量均上升,分別達(dá)56.6%和55.4%,隨著初始糖度的增加,蜂蜜酒總酚和總黃酮的相對(duì)變化量呈逐漸減小趨勢(shì)。在酸茶釀制過(guò)程中,任翠娟等[34]發(fā)現(xiàn)釀制至21 d,隨著蔗糖添加量的增加,添加量為10%、13%的試驗(yàn)組釀制品茶多酚含量整體呈上升趨勢(shì),其余試驗(yàn)組釀制品茶多酚含量隨著釀制時(shí)間延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)。

王吉成等[35]通過(guò)接種冠突散囊菌孢子對(duì)桑葉進(jìn)行固、液態(tài)發(fā)酵,研究表明發(fā)酵后桑葉70%乙醇提取物中總多酚含量均降低,而對(duì)于桑葉水提取物,固態(tài)發(fā)酵降低其總多酚含量,液態(tài)發(fā)酵則無(wú)顯著影響。這與本文研究結(jié)果不同,可能是相比于酵母菌發(fā)酵,冠突散囊菌發(fā)酵處理使桑葉中的化合物被轉(zhuǎn)化類(lèi)型有所不同。

2.3 裸燕麥酵素發(fā)酵過(guò)程中各指標(biāo)的相關(guān)性分析

添加蔗糖使燕麥中物質(zhì)含量的相關(guān)性產(chǎn)生變化(表1、表2)。多酚與可溶性蛋白(r=0.723)在加糖發(fā)酵樣品中具有顯著正相關(guān)性(p<0.05),而在不加糖樣品中兩者不存在相關(guān)性或者相關(guān)性極低,多酚與還原糖(r=0.855)、pH(r=0.879)、酒精含量(r=-0.923)存在極顯著的相關(guān)性(p<0.01)。發(fā)酵液中加入糖類(lèi)物質(zhì),酵母菌大量吸收糖類(lèi)物質(zhì)并轉(zhuǎn)化為可溶性蛋白和多酚等活性成分。而不加糖發(fā)酵液中,多酚、蛋白等隨著還原糖一起被酵母菌利用,維持自身生長(zhǎng)繁殖。

表1 加糖裸燕麥酵素中各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析Table 1 Correlation analysis of the indexes in oat jiaosu with sucrose

表2 不加糖裸燕麥酵素中各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析Table 2 Correlation analysis of the substances contents in oat jiaosu without sucrose

此外,加糖發(fā)酵樣品的可溶性蛋白與酒精含量(r=0.831)具有顯著正相關(guān)性(p<0.05),與還原糖(r=-0.893)、pH(r=-0.863)具有極顯著負(fù)相關(guān)(p<0.01),與不加糖樣品趨勢(shì)相反。這也說(shuō)明了添加的蔗糖作為燕麥中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代替品被酵母菌吸收,從而減少了對(duì)燕麥底物本身的消耗,燕麥中的營(yíng)養(yǎng)成分不斷溶解于發(fā)酵液中,酵母菌合成相關(guān)產(chǎn)物,共同影響發(fā)酵液中多酚及可溶性蛋白含量的上升。相似的是,兩種樣品的酒精含量與pH、還原糖之間都相互存在極顯著的相關(guān)性(p<0.01)。這說(shuō)明一定程度的蔗糖添加不會(huì)過(guò)多影響酵母菌對(duì)還原糖的利用和酒精的產(chǎn)出。

3 結(jié)論

本研究通過(guò)添加蔗糖是否對(duì)裸燕麥酵素中理化和生理活性成分產(chǎn)生影響進(jìn)行初步考察,結(jié)果表明,加糖裸燕麥酵素pH始終低于不加糖裸燕麥酵素,還原糖含量在72 h降到最低,相比于不加糖樣品更快進(jìn)入發(fā)酵后期。168 h時(shí)加糖裸燕麥酵素中酒精含量、可溶性蛋白含量、多酚含量分別高出不加糖裸燕麥酵素205.30%、83.33%、24.23%。蔗糖的添加也影響各指標(biāo)間的相關(guān)性。多酚與可溶性蛋白、可溶性蛋白與酒精含量在加糖發(fā)酵樣品中具有顯著(p<0.05)正相關(guān)性;而不加糖樣品中多酚與其余指標(biāo)、可溶性蛋白與還原糖、pH之間存在顯著(p<0.01或p<0.05)的相關(guān)性。添加蔗糖可以降低酵母菌對(duì)燕麥營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗,同時(shí)轉(zhuǎn)化出有效的活性成分,相比于不添加蔗糖的裸燕麥酵素發(fā)酵更快,更有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的析出和活性成分的富集。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣說(shuō)明蔗糖添加量可以作為裸燕麥酵素工藝的一個(gè)考察因素,其添加量等相關(guān)因素將在下一步酵素工藝優(yōu)化試驗(yàn)中進(jìn)行考察。