不同苯磺酸氨氯地平片的人體相對生物利用度及生物等效性研究

苯磺酸氨氯地平為新型、長效的二氫吡啶Ca2+拮抗劑，通過抑制Ca2+進入心肌細胞，進而對心肌、平滑肌的收縮進行控制，作用于外周血管、腎動脈和冠狀動脈，降低外周阻力[1]。目前，該藥物已作為治療高血壓、心絞痛的首選藥物。由于該藥物難溶于血漿，血藥水平低，普通檢測手段難以測定人體血藥濃度[2]。已有研究采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(high-performance liquid chromatography，HPLC-MS)法檢測樣品，但只分析了藥物的血漿濃度和生物等效性，未明確地分析苯磺酸氨氯地平的生物利用度及治療效果[3]。為此本研究通過采用HPLC-MS法測定不同苯磺酸氨氯地平片在人體內(nèi)的相對生物利用度、生物等效性及臨床效果進行比較研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年3月—2017年3月在我院就診的原發(fā)性高血壓病人160例，隨機分為左旋組與絡(luò)活喜組，每組80例。左旋組：男48例，女32例；年齡(49.6±13.6)歲。絡(luò)活喜組：男46例，女34例；年齡(50.2±10.8)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 納入和排除標準

1.2.1 納入標準 ①使用超聲動態(tài)血壓監(jiān)測儀檢測血壓值：收縮壓≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，舒張壓≥90 mmHg；②高血壓的診斷采用2016年中國高血壓治療指南建議的標準[4]；③獲得研究對象的知情同意及醫(yī)學倫理委員會的批準。

1.2.2 排除標準 ①腎功能異常，鈉、鉀代謝異常者；②近期(3個月內(nèi))使用降壓藥、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、抗菌藥物、降血脂藥物；③合并嚴重的肝功能損害、消化道活動性出血疾??；④有藥物過敏史。

1.3 實驗藥品、試劑與儀器 苯磺酸左旋氨氯地平片[規(guī)格：2.5 mg×7片×2板；批號：國藥準字H19991083；施慧達藥業(yè)集團(吉林)有限公司]。苯磺酸氨氯地平片(商品名：絡(luò)活喜，規(guī)格：每片5 mg，批號：國藥準字H10950224，輝瑞制藥有限公司)。對照品：中國藥品生物制品檢定所檢定的苯磺酸氨氯地平，其純度為99.9%。內(nèi)標對照品：廣東華南藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)的尼莫地平片劑，含量為99.7%。分析中使用的甲醇、乙腈均為色譜純標準，其余實驗試劑均為分析純。實驗儀器主要為：超高效液相色譜分析儀(UPLC，安捷倫公司)，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS美國Waters公司)。

1.4 血液收集和血藥濃度檢測方法

1.4.1 血樣處理 病人每次用藥時分別服用苯磺酸左旋氨氯地平片、苯磺酸氨氯地平片，每次用藥間隔2周。兩組均在給藥前1 d 21:00禁食12 h，第2天09:00左旋組單次服用苯磺酸左旋氨氯地平片，2.5 mg；絡(luò)活喜組單次服用苯磺酸氨氯地平片，2.5 mg；以溫開水150 mL送服。服藥2 h后適量飲水，4 h和9 h后進食低脂標準餐。分別于給藥后1 h、3 h、5 h、7 h、8 h、9 h、11 h、13 h、16 h、20 h、24 h，在上肢靜脈抽血4.5 mL，置于肝素預(yù)抗凝EP管中，常溫靜置30 min，3 500 r/min離心10 min，分離上層血漿約22.5 mL，-40 ℃避光保存?zhèn)溆?。精密吸取待測血漿200 μL，加到2 mL離心管后精密加入內(nèi)標工作液20 μL，渦旋30 s，再加入80 μL飽和碳酸鈉溶液，渦旋30 s，然后按照“空白血漿樣品處理”方法處理，進行HPLC-MS分析。

1.4.2 色譜條件 選用Welch Ultimate XB-C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，3 μm)；預(yù)柱：菲羅門C18保護柱(4 mm×2.0 mm，3 μm)；柱溫：40 ℃；流動相：總流速為0.6 mL/min，進樣體積為10 μL。乙腈和甲酸銨溶液2 mmol/L(甲酸調(diào)至pH 3.0)，梯度洗脫；當乙腈到達90%時保持0.7 min；乙腈從90%下降到30%平衡至4 min，結(jié)束分析。

1.4.3 質(zhì)譜條件 離子檢測方式：正離子多反應(yīng)監(jiān)測離子檢測(MRM)；離子化方式：電噴霧離子化(ESI)；氣簾氣(CUR)、碰撞氣(CAD)、離子源電壓(IS)、離子源溫度(TEM)、霧化氣(GS 1)、輔助加熱氣(GS 2)、接口加熱器(ihe)參數(shù)分別為：10 psi(1 psi ≈ 6.9 kPa)、Medium、5.5 kV、500 ℃、50 psi、50 psi、On。苯磺酸氨氯地平檢測離子對為409.0/238.0，去簇電壓DP為61 V，碰撞能CE為15 V，出室電壓CXP為15 V，入室電壓EP為10 V；氘代內(nèi)標檢測離子對為413.1/238.3，去簇電壓DP為50 V，碰撞能CE為18 V，出室電壓CXP為18 V，入室電壓EP為10 V[5]。

1.4.4 溶液配制 對照品溶液：甲醇配與兩種苯磺酸氨氯地平配制10.0 g/L儲備液，用水、甲醇以 1∶1比例將儲備液稀釋成不同濃度的對照溶液。內(nèi)標溶液：用甲醇配制1.0 g/L，用水、甲醇以 1∶1比例稀釋成100.0 μg/L的內(nèi)標工作液[6]?？瞻籽獫{樣品處理：精密吸取空白血漿200 μL，置2 mL離心管中，加入飽和碳酸鈉溶液80 μL，渦旋30 s，再加入甲基叔丁基醚1 mL，渦旋混合10 min，于4 ℃ 10 000 r/min離心10 min，吸取上清液800 μL于1.5 mL離心管中，40 ℃氮氣吹干，然后用流動相(乙腈-2 mmol/L甲酸銨，50∶50)80 μL復溶，渦旋混合2 min后，于4 ℃、15 000 r/min離心10 min，取上清液10 μL進行LC-MS/MS分析[7]。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用DAS 2.0程序?qū)κ茉囌叩难獫{藥學動力學參數(shù)進行分析。實驗測得Cmax、Tmax的實際值，以梯形面積法計算AUC0-∞=AUC0-tn+Ctn/Ke(tn是最后1次可檢測血藥濃度的采樣時間，Ctn為最后1次可測定樣本的藥物濃度，Ke為吸收速度常數(shù))；CL/F=D/AUC0-∞(D 為給藥劑量，F(xiàn)為相對生物利用度)，Vd/F=CL/(F·Ke)。對Tmax進行非參數(shù)檢驗，對Cmax、AUC的對數(shù)轉(zhuǎn)換值進行方差分析和雙單側(cè)t檢驗，以Cmax70%～143%、AUC 80%～125%為判定標準，觀察兩種不同藥物是否具有生物等效性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床資料比較 治療前兩組年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、收縮壓、舒張壓等基本資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表1。

組別例數(shù)年齡(歲) 性別(例) 男女BMI(kg/m2)吸煙史(例)糖尿病(例)酗酒史(例)收縮壓(mmHg)舒張壓(mmHg)左旋組 8049.6±13.6483223.2±2.1423323190.1±28.3130.3±22.5絡(luò)活喜組8050.2±10.8463423.0±1.9394017191.4±27.8128.3±24.7統(tǒng)計值t=-0.784χ2=0.166t=0.654χ2=0.345χ2=0.661χ2=0.317t=-1.996t=1.683P0.4820.6320.5140.4560.4870.5740.0570.094

2.2 兩組不同給藥時間血清中血藥濃度比較 左旋組和絡(luò)活喜組在同一用藥劑量治療的情況下，治療過程中病人血清中血藥濃度隨時間變化差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表2。

組別 例數(shù)1 h3 h5 h7 h8 h左旋組 801.225±1.3563.485±1.6624.998±2.2336.942±2.8716.667±2.132絡(luò)活喜組 801.333±1.0333.666±1.5524.779±2.1136.524±2.6636.423±2.036t值-0.215-0.6250.3210.2190.318P>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05組別 9 h11 h13 h16 h20 h24 h左旋組 6.155±1.9985.992±2.0015.512±1.8895.121±1.8474.866±1.8994.789±1.789絡(luò)活喜組 6.112±2.0235.877±1.9585.333±1.8235.021±1.7954.799±1.6994.721±1.623t值0.3460.3520.3160.3880.3660.395P>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05

2.3 兩組給藥后主要藥動學參數(shù)比較 左旋組和絡(luò)活喜組中病人的血藥峰濃度(Cmax)、峰時間(tmax)、半衰期(t1/2)，藥時曲線下面積(AUC0-t)等生物等效性比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 兩組給藥后主要藥動學參數(shù)比較

2.4 兩組治療效果及不良反應(yīng)發(fā)生率比較 左旋組經(jīng)治療后，76例病人血壓穩(wěn)定在正常值，治愈率為95.00%，治療過程中有2例病人出現(xiàn)不良反應(yīng)，不良反應(yīng)率為2.50%；絡(luò)活喜組經(jīng)治療后，73例病人血壓穩(wěn)定在正常值，治愈率為91.25%，治療過程中7例病人出現(xiàn)不良反應(yīng)，不良反應(yīng)率為8.75%；兩組治愈率和不良反應(yīng)率比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且左旋組優(yōu)于絡(luò)活喜組(P<0.05)。詳見表4。

表4 兩組治療效果及不良反應(yīng)發(fā)生率比較 %

3 討 論

苯磺酸氨氯地平片通過改變藥物與受體的結(jié)合和解離的漸進性而改變鈣離子通道的活性。本品是外周動脈擴張劑，直接作用于血管平滑肌，降低外周血管阻力，從而降低血壓[8]。還能通過擴張外周小動脈緩解心絞痛，降低心肌耗氧量[9]?？诜笕梭w吸收緩慢，需要較長時間才能發(fā)揮藥理學效應(yīng)，每日1次的服用量，提高血液中的藥物含量。本藥治療心血管疾病時，使用劑量低、吸收速度慢，因此血藥濃度低[10]。臨床采用高效液相色譜-紫外法(HPLC-UV)法無法準確測量血藥濃度；高效液相色譜-電化學法(HPLC-ECD)法影響因素較多，難以操作；HPLC-MS法則有較高的靈敏度、專一性和準確性，是一種新型的血藥分析方法[11]。HPLC-MS法測量血藥濃度，操作簡便，所需時間短，能夠快速精確的測量血藥濃度，可保證測定血漿中的低濃度藥物含量的準確性，因此該測量方法適合于苯磺酸氨氯地平的藥物動力學及生物等效性的分析[12]。

通過HPLC-MS法測量血藥濃度，左旋組和絡(luò)活喜組在同一用藥劑量治療的情況下，左旋組與絡(luò)活喜組病人血清中血藥濃度隨時間變化差異無統(tǒng)計學意義，與已有研究結(jié)果的結(jié)論相一致[13]。兩種氨氯地平苯磺酸片的藥動學參數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義，表明兩組藥物的生物等效性無差別。這與已有研究結(jié)果表明兩種不同的苯磺酸氨氯地平的生物等效性相似的結(jié)果相一致[14]。本研究結(jié)果顯示，左旋組的治愈率為95.00%，不良反應(yīng)率為2.50%；絡(luò)活喜組的治愈率為91.25%，不良反應(yīng)發(fā)生率為8.75%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義，表明苯磺酸左旋氨氯地平片的治療效果比苯磺酸氨氯地平片好，且能夠降低不良反應(yīng)發(fā)生率。

本研究中采用HPLC-MS法測量血藥濃度，對比分析兩組病人的血藥濃度到達峰值的含量和藥學動力參數(shù)，充分表明不同產(chǎn)地的苯磺酸氨氯地平的生物利用程度存在差異，但生物等效性基本相一致。通過對比分析兩組病人的治愈率及不良反應(yīng)發(fā)生率，可判斷不同產(chǎn)地藥物的臨床效果，選擇效果更好的藥物以供臨床廣泛使用。已有的研究只分析了兩種藥物的生物等效性及生物利用程度，未對兩種藥物的臨床效果進行分析[15]。說明本研究的方法優(yōu)于以往的研究方法。

本研究表明不同苯磺酸氨氯地平片在各組人體中的血藥濃度、相對生物利用度無明顯差異，且生物等效性相同。左旋組的治愈率和不良反應(yīng)率優(yōu)于絡(luò)活喜組。