MTHFR C677T位點(diǎn)，ABCG2 G34A位點(diǎn)基因型與Ⅳ期結(jié)腸腺癌無(wú)進(jìn)展生存期的關(guān)系

張衛(wèi)華,代婀娜,何源雄

結(jié)直腸癌起病隱匿，確診時(shí)患者多已進(jìn)入中晚期，約20%患者在確診時(shí)已為Ⅳ期，其中75%～90%患者的腫瘤轉(zhuǎn)移灶已無(wú)法切除[1]。對(duì)Ⅳ期結(jié)腸癌患者，姑息切除或根治切除聯(lián)合術(shù)后化療能夠獲得較好的預(yù)后[2]，其中化療方案主要包括以?shī)W沙利鉑為主的FOLFOX、XELOX方案及以伊利替康為主的FOLFIRI方案，療效接近[3-4]。但并非所有患者均能從上述治療中獲益[5]，明確影響預(yù)后的因素，對(duì)制定個(gè)體化治療方案、提升患者預(yù)后有重要價(jià)值。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)參與葉酸的代謝，對(duì)5-氟尿嘧啶抗腫瘤作用有一定影響[6]；三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族第2成員(ATP-binding cassette sub-family G member 2, ABCG2)與結(jié)直腸癌細(xì)胞地西他濱藥物敏感性有關(guān)[7]。這提示MTHFR、ABCG2基因突變可能對(duì)Ⅳ期結(jié)腸腺癌患者預(yù)后造成影響，但目前尚欠缺直接報(bào)道，本研究擬重點(diǎn)研究該問(wèn)題，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)2011年1月至2015年1月收治的137例結(jié)腸腺癌患者進(jìn)行回顧性分析，本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，納入患者均知情且簽署同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床病歷資料完整；(2)參考《結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2010年版)》[8]確診為T(mén)NM Ⅳ期原發(fā)性結(jié)腸腺癌；(3)伴有手術(shù)無(wú)法切除的轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)病灶，可供評(píng)價(jià)；(4)一般狀態(tài)較好，能夠耐受化療，采用FOLFOX、XELOX或FOLFIRI方案作為術(shù)后一線化療方案；(5)無(wú)吸煙史，無(wú)飲酒史或飲酒折合乙醇量<140克/周。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)未接受新輔助化療者；(2)局限性單純肝或肺轉(zhuǎn)移，已根治性切除轉(zhuǎn)移灶者；(3)根治性切除后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者；(4)失訪患者；(5)一線化療結(jié)束后接受其它化療方案者。137例患者中，男78例、女59例；年齡47～79歲，平均(63.37±7.52)歲；T1～3期者47例、T4期者90例；N0～1期者61例、N2期者76例；腫瘤中高分化者74例、低分化者63例；原發(fā)灶根治性切除者92例、姑息性切除45例；一線化療采用FOLFOX/XELOX者81例、采用FOLFIRI方案者56例。

1.2 基因多態(tài)性檢測(cè)

術(shù)后采集患者外周血，檢測(cè)MTHFR C677T位點(diǎn)，ABCG2 G34A位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)，步驟如下：(1)采用全血基因組提取試劑盒(日本Fuji Film)提取DNA；(2)采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增MTHFR C677T位點(diǎn)，ABCG2 G34A位點(diǎn)；(3)使用3730XL DNA測(cè)序儀(美國(guó)Applied Biosystems)進(jìn)行DNA測(cè)序及SNP分型(引物序列見(jiàn)表1)。

1.3 隨訪指標(biāo)

持續(xù)隨訪，每1～3個(gè)月返院復(fù)查或電話隨訪1次，統(tǒng)計(jì)患者無(wú)進(jìn)展生存期(progression free survival, PFS)，以此評(píng)估預(yù)后，兩者時(shí)間起點(diǎn)均為一線化療開(kāi)始前，末次隨訪時(shí)間為2018年5月30日。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0處理數(shù)據(jù)。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，對(duì)存在交叉的生存曲線，采用Two-Stage進(jìn)行對(duì)比分析，對(duì)不存在交叉的生存曲線，采用Log-rank進(jìn)行對(duì)比分析，從而確定PFS、OS與臨床特征及基因分型的關(guān)系；采用逐步進(jìn)入的多因素Cox回歸模型分析PFS、OS的影響因素，其中進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)0.05，剔除標(biāo)準(zhǔn)0.10?；蚍植疾捎肏ardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)驗(yàn)證是否處于遺傳平衡。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性遺傳平衡檢驗(yàn)

137例患者M(jìn)THFR C677T位點(diǎn)、ABCG2 G34A位點(diǎn)的SNP均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表1 引物序列

表2 MTHFR C677T位點(diǎn)、ABCG2 G34A位點(diǎn)的SNP遺傳平衡檢驗(yàn)

2.2 MTHFR、ABCG2基因多態(tài)性與患者PFS的關(guān)系

2.3 MTHFR、ABCG2優(yōu)勢(shì)基因與患者PFS關(guān)系

參考前述分析，MTHFR C677T位點(diǎn)野生型及ABCG2 G34A位點(diǎn)突變型患者的中位PFS對(duì)應(yīng)略長(zhǎng)于MTHFR C677T位點(diǎn)突變型及ABCG2 G34A位點(diǎn)野生型患者，因此取MTHFR C677T位點(diǎn)野生型及ABCG2 G34A位點(diǎn)突變型為優(yōu)勢(shì)基因。

圖1 MTHFR C677T位點(diǎn)SNP與患者PFS關(guān)系

圖2 ABCG2 G34A位點(diǎn)SNP與患者PFS關(guān)系

圖3 MTHFR、ABCG2優(yōu)勢(shì)基因與患者PFS關(guān)系

2.4 患者PFS影響因素的單因素及多因素Cox回歸分析

納入MTHFR、ABCG2優(yōu)勢(shì)基因型個(gè)數(shù)(0～1個(gè)=1，2個(gè)=2)、性別(男=1，女=0)、年齡(≥60歲=1，<60歲=0)、T分期(T1～3期=1，T4期=2)、N分期(N0～1期=1，N2期=2)、腫瘤分化程度(中高分化=1，低分化者=0)、原發(fā)病灶是否根治性切除(是=1，否=0)、一線化療方案(FOLFOX/XELOX者=1，F(xiàn)OLFIRI方案=2)、轉(zhuǎn)移臟器數(shù)目(一個(gè)=1，多個(gè)=2)，經(jīng)單因素分析顯示，優(yōu)勢(shì)基因個(gè)數(shù)、原發(fā)病灶是否根治性切除、轉(zhuǎn)移臟器數(shù)是患者PFS的影響因素(P<0.05)，進(jìn)一步納入上述因素進(jìn)行多因素Cox回歸分析，顯示僅原發(fā)病灶是否根治性切除、轉(zhuǎn)移臟器數(shù)是患者PFS的影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表3、表4。

表3 患者PFS影響因素的單因素Cox回歸分析

表4 患者PFS影響因素的多因素Cox回歸分析

3 討論

隨著腫瘤診療技術(shù)的發(fā)展，Ⅳ期結(jié)腸腺癌患者預(yù)后已得到顯著提升，通過(guò)新輔助放化療、根治性或姑息性手術(shù)、術(shù)后放化療及靶向治療等方案，患者生存時(shí)間已得到有效延長(zhǎng)[9-10]。但仍有部分患者難以從綜合治療中獲益，通過(guò)有效的預(yù)測(cè)因子預(yù)測(cè)預(yù)后，對(duì)選擇個(gè)體化治療方案有重要價(jià)值。目前研究顯示[11-13]，基因遺傳學(xué)在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、耐藥性產(chǎn)生等方面發(fā)揮重要作用。

MTHFR C677T位點(diǎn)及ABCG2 G34A位點(diǎn)的SNP與腫瘤的關(guān)系是目前研究的幾個(gè)重要方向重點(diǎn)方向。MTHFR是5，10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為5-亞甲基四氫葉酸的關(guān)鍵酶，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)前者水平較高時(shí)，5-氟尿嘧啶類(lèi)藥物的療效較好，C677T位點(diǎn)突變可導(dǎo)致MTHFR活性下降，從而導(dǎo)致5-氟尿嘧啶類(lèi)藥物療效下降[14]，進(jìn)而影響接受此類(lèi)藥物化療的Ⅳ期結(jié)腸腺癌患者預(yù)后。臺(tái)灣報(bào)道[15]顯示對(duì)接受5-氟尿嘧啶為主方案化療的結(jié)直腸癌患者，MTHFR C677T位點(diǎn)突變可導(dǎo)致患者預(yù)后下降。但本研究顯示該基因突變預(yù)后，與患者預(yù)后無(wú)明顯關(guān)系，推測(cè)原因是該基因僅對(duì)5-氟尿嘧啶類(lèi)藥物療效有一定影響，而對(duì)結(jié)直腸癌其它病理生理指標(biāo)無(wú)明顯影響，這與Haerian等[16]研究結(jié)論相符。而Ⅳ期結(jié)腸腺癌一線化療均為綜合用藥，能夠在一定程度上避免該基因突變對(duì)化療療效的影響。

ABCG2參與多種化療藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)及清除，報(bào)道[17]顯示其與伊利替康化療療效有關(guān)，早期研究[18]顯示該基因G34A位點(diǎn)突變可影響ABCG2的表達(dá)并降低其ATP酶的活性，使ABCG2外排功能下降，故上述突變可以提高細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。但本研究顯示其與結(jié)腸癌患者預(yù)后無(wú)明顯關(guān)系，符合Nielsen等[19]觀察結(jié)果，其具體機(jī)制尚待研究，推測(cè)可能是因?yàn)槠洳⒉恢苯佑绊懸晾婵档人幬锏拇x。

既往報(bào)道[20]認(rèn)為綜合分析多個(gè)SNP，能夠更準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)晚期腫瘤患者預(yù)后預(yù)測(cè)因子，本研究納入MTHFR C677T位點(diǎn)及ABCG2 G34A位點(diǎn)進(jìn)行綜合分析，顯示具備2個(gè)優(yōu)勢(shì)基因型的患者預(yù)后較好，可能是因?yàn)镸THFR、ABCG2分別與不同的化療藥物代謝過(guò)程相關(guān)，患者聯(lián)合化療期間藥物作用必然涉及多個(gè)酶，故聯(lián)合檢測(cè)兩個(gè)位點(diǎn)SNP，對(duì)評(píng)估預(yù)后有一定價(jià)值。但多因素分析顯示優(yōu)勢(shì)基因個(gè)數(shù)并不是影響患者PFS的獨(dú)立因素，這可能是因?yàn)閮?yōu)勢(shì)基因型的作用被原發(fā)病灶是否根治性切除、轉(zhuǎn)移臟器數(shù)掩蓋所致。

綜上，本研究顯示MTHFR、ABCG2的SNP與Ⅳ期結(jié)腸腺癌預(yù)后有一定關(guān)系，但具備優(yōu)勢(shì)基因型并不是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。