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    山桐子油對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌線粒體的保護(hù)作用

    2019-08-22 10:06:18潘文文吳立明
    中國(guó)油脂 2019年7期
    關(guān)鍵詞:山桐子油組力竭

    潘文文,吳立明,崔 潔

    (1.齊齊哈爾大學(xué)體育學(xué)院,黑龍江 齊齊哈爾 161000; 2.河北對(duì)外經(jīng)貿(mào)職業(yè)學(xué)院 體育部, 河北 秦皇島 066311; 3.哈爾濱工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,哈爾濱 150086)

    山桐子,別名水冬瓜、水東桐、椅桐等,屬落葉喬木。山桐子主要分布在中國(guó)、日本、朝鮮等東亞國(guó)家,在我國(guó)主要分布在四川、陜西、云南、貴州等省份[1]。山桐子對(duì)于環(huán)境的適應(yīng)性很強(qiáng),具有耐寒、耐旱、耐高低溫等特點(diǎn)[2]。山桐子的果肉占果實(shí)總質(zhì)量的62.3%,種子占37.6%,山桐子的果實(shí)、種子、果肉都可以用作油料,但是其不同部位的含油率差距較大,果肉含油率為43.6%,種子含油率為22.4%~25.9%[3-4]。山桐子油的脂肪酸組成很豐富,不飽和脂肪酸含量達(dá)到82%以上,其中包括亞油酸66%以上、油酸6.6%以上,果肉油還含棕櫚酸5.12%,具有很高的食用價(jià)值[5]。山桐子油還含有一些甾醇類物質(zhì)β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇等,其中β-谷甾醇相對(duì)含量較高,山桐子油維生素E含量高達(dá)111.75 mg/g[6-7]。生育酚是一種重要的生物抗氧化劑和自由基清除劑,可以增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力和免疫能力[8]。當(dāng)前對(duì)于山桐子油的研究主要集中在栽培、繁育等方面,對(duì)于食用價(jià)值以及營(yíng)養(yǎng)保健方面研究甚少。

    目前,大強(qiáng)度體育訓(xùn)練導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)員猝死的事件頻頻發(fā)生。研究表明,力竭運(yùn)動(dòng)可以造成心肌組織功能損傷形成氧化應(yīng)激,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、Ca2+超載以及能量代謝障礙等[9]。線粒體是能量產(chǎn)生的主要場(chǎng)所,其主要作用是改變心肌能量代謝障礙,機(jī)體在力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生較多的自由基,自由基增多產(chǎn)生細(xì)胞毒性,導(dǎo)致心肌損傷[10]。本文通過(guò)建立力竭大鼠模型,研究山桐子油對(duì)力竭大鼠心肌線粒體的影響,以期為山桐子油的應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    山桐子,采自福建省華安地區(qū);正己烷,天津科密歐試劑有限公司;活性白土(食品級(jí)),濟(jì)南奧凱化工有限公司;氫氧化鉀,天津科密歐試劑有限公司;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)試劑盒,上海哈靈生物科技有限公司;ATP試劑盒、Ca2+試劑盒,上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

    50只健康SD雄性大鼠,平均體重(180±5)g,北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心(SYXK(京)2012-0004)。

    TGL-16M型高速離心機(jī),常州市金壇高科儀器廠;XB120A-SCS型電子天平,上海精密科學(xué)儀器有限公司;SA101型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái),江蘇賽昂斯生物科技有限公司;QM-SXT-2型索氏提取器,琪摩(上海)電子科技有限公司;RE-501L型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上??粕齼x器有限公司;安捷倫6890N+5973氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀,安捷倫科技(中國(guó))有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 山桐子油的制備

    將山桐子洗凈并晾干,稱取適量,粉碎過(guò)40目篩,放入索氏提取器中,加入正己烷,加熱回流2.5 h,減壓蒸餾并回收溶劑,得到山桐子毛油。山桐子毛油經(jīng)堿煉脫酸、白土脫色后得到山桐子油[11-12]。

    1.2.2 山桐子油理化指標(biāo)測(cè)定

    酸價(jià)測(cè)定,參照GB/T 5510—2011;碘值測(cè)定,參照GB/T 5532—2008;皂化值測(cè)定,參照GB/T 5534—2008;甾醇、維生素E含量測(cè)定,參照文獻(xiàn)[13] 。

    1.2.3 山桐子油主要脂肪酸組成分析

    山桐子油經(jīng)甲酯化后進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析。

    氣相色譜條件:安捷倫DB-624毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×1.4 μm);升溫程序?yàn)?55℃保持5 min,5℃/min升至240℃,保持20 min;載氣為高純度氮?dú)?,流量?.0 mL/min;柱前壓90.6 kPa;進(jìn)樣量1 μL;分流比20∶1。

    質(zhì)譜條件:EI離子源,離子源溫度200℃;電子能量70 eV;接口溫度240℃;溶劑延時(shí)4 min;倍增器電壓1.5 kV;掃描范圍 40~500 u。

    1.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組以及測(cè)試

    將大鼠隨機(jī)分成5組,分別為對(duì)照組,力竭運(yùn)動(dòng)組,低、中、高劑量山桐子油組,其中對(duì)照組不進(jìn)行任何運(yùn)動(dòng),力竭運(yùn)動(dòng)組進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練,低、中、高劑量山桐子油組進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的同時(shí),運(yùn)動(dòng)后2 h分別灌胃山桐子油50、100、150 mg/kg。實(shí)驗(yàn)持續(xù)6周,每周6 d,周日休息。

    跑步運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方法:將除了對(duì)照組之外的其余4組SD大鼠放置在運(yùn)動(dòng)跑臺(tái)上進(jìn)行訓(xùn)練,第一周先進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練,每組大鼠進(jìn)行0°、10 m/min、30 min的運(yùn)動(dòng),第二周開(kāi)始每組大鼠進(jìn)行5°、20 m/min的運(yùn)動(dòng),直至力竭,記錄大鼠運(yùn)動(dòng)的力竭時(shí)間。判斷力竭的標(biāo)準(zhǔn)為:使用毛刷刺激大鼠尾部,如果大鼠跟不上預(yù)設(shè)速度,臀部壓在跑臺(tái)上,大鼠的后肢跟隨轉(zhuǎn)動(dòng)跑臺(tái)的皮帶后拖達(dá)到30 s[14]。

    在訓(xùn)練周的最后一日,待力竭運(yùn)動(dòng)組,低、中、高劑量山桐子油組進(jìn)行完力竭運(yùn)動(dòng)后,將以上4組和對(duì)照組的大鼠立即斷頭處死,取出心臟,并用生理鹽水沖凈,取心肌組織30 mg,在冰浴中將心肌組織剪成碎片,加生理鹽水制備10%的勻漿,過(guò)濾并棄濾渣,濾液在3 300 r/min下離心10 min,棄上清液,沉淀即為心肌線粒體,用生理鹽水制成線粒體混懸液,于4℃留存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.5 SOD、GSH-Px、CAT、MDA、ATP、Ca2+含量測(cè)定

    根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

    1.2.6 數(shù)據(jù)分析

    采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,數(shù)據(jù)均用“均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,采取組間對(duì)比,P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 山桐子油理化指標(biāo)及主要脂肪酸組成

    經(jīng)測(cè)定,山桐子油酸價(jià)(KOH)為 0.864 mg/g,皂化值(KOH)為207.996 mg/g,碘值(I)為124 g/100 g ,不皂化物中甾醇相對(duì)含量為25.14%,維生素E的相對(duì)含量為18.34%。

    從山桐子油中檢測(cè)出5種主要脂肪酸(見(jiàn)表1),分別為亞油酸、棕櫚酸、油酸、棕櫚油酸和硬脂酸,其中亞油酸含量最高。

    表1 山桐子油中主要脂肪酸組成

    2.2 山桐子油對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌線粒體ATP合成能力以及Ca2+含量的影響(見(jiàn)表2)

    由表2可見(jiàn),力竭運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比,ATP合成能力明顯降低(P<0.05),低、中、高劑量山桐子油組ATP合成能力呈上升趨勢(shì),高劑量組的ATP合成能力與力竭運(yùn)動(dòng)組相比明顯增加(P<0.05)。ATP作為直接供給心肌能量的重要高能磷酸化合物,主要在線粒體中合成,力竭運(yùn)動(dòng)后ATP含量明顯降低,導(dǎo)致了一系列代謝的異常和紊亂。山桐子油可以提高心肌線粒體內(nèi)ATP的合成能力,改善大鼠力竭運(yùn)動(dòng)之后引起的ATP含量降低。力竭運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比Ca2+含量極顯著增加(P<0.01),低、中、高劑量山桐子油組Ca2+含量呈下降趨勢(shì),其中高劑量山桐子油組的Ca2+含量與對(duì)照組相比不具有顯著性差異(P>0.05),低、中劑量山桐子油組的Ca2+含量與力竭運(yùn)動(dòng)組相比明顯降低(P<0.05),高劑量山桐子油組的Ca2+含量與力竭運(yùn)動(dòng)組相比極顯著降低(P<0.01)。鈣是心肌細(xì)胞中維持正常生理功能的重要指標(biāo),細(xì)胞鈣代謝異常會(huì)引起機(jī)體各種功能障礙,Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)主要依靠線粒體進(jìn)行,力竭運(yùn)動(dòng)后,大量自由基生成,導(dǎo)致滲透性轉(zhuǎn)運(yùn)通道打開(kāi),使Ca2+大量釋放,使細(xì)胞漿中Ca2+含量升高,導(dǎo)致鈣超載,山桐子油中含有生育酚類物質(zhì),是一種重要的抗氧化劑和自由基清除劑,可在機(jī)體內(nèi)起穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的作用[8],同時(shí)當(dāng)Ca2+內(nèi)流超過(guò)正常時(shí),生育酚類物質(zhì)可以起到Ca2+拮抗劑的作用,表明機(jī)體在長(zhǎng)時(shí)間的力竭運(yùn)動(dòng)中,Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)是運(yùn)動(dòng)性疲勞更為敏感的指標(biāo),山桐子油對(duì)細(xì)胞內(nèi)的Ca2+起到穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的作用。

    表2 山桐子油對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌ATP合成能力 以及Ca2+含量的影響

    注:各組與對(duì)照組相比,#表示有顯著差異(P<0.05),##表示有極顯著差異(P<0.01);與力竭運(yùn)動(dòng)組相比較,*表示有顯著差異(P<0.05),* *表示有極顯著差異(P<0.01)。下同。

    2.3 山桐子油對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌線粒體SOD、GSH-Px、CAT、MDA的影響(見(jiàn)表3)

    表3 山桐子油對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌線粒體SOD、GSH-Px、CAT、MDA的影響 U/mg

    由表3可見(jiàn):力竭運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比SOD活性明顯降低(P<0.05),低、中、高劑量山桐子油組SOD活性呈上升趨勢(shì),高劑量山桐子油組的SOD活性與力竭運(yùn)動(dòng)組相比明顯增加(P<0.05);力竭運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比GSH-Px活性極顯著降低(P<0.01),低、中、高劑量山桐子油組GSH-Px活性呈上升趨勢(shì),低、中劑量山桐子油組的GSH-Px活性與力竭運(yùn)動(dòng)組相比明顯提高(P<0.05),高劑量山桐子油組的GSH-Px活性與力竭運(yùn)動(dòng)組相比極顯著提高(P<0.01);力竭運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比CAT活性明顯降低(P<0.05),低、中、高劑量山桐子油組CAT活性呈上升趨勢(shì),高劑量山桐子油組的CAT活性與力竭運(yùn)動(dòng)組相比明顯增加(P<0.05)。機(jī)體通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的力竭運(yùn)動(dòng)之后可以導(dǎo)致心肌線粒體內(nèi)抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)的活性明顯下降,心肌線粒體內(nèi)自由基增多,特別是過(guò)氧化物大量堆積,抗氧化酶被大量催化歧化反應(yīng)而消耗,從而抑制SOD、GSH-Px、CAT的活性。SOD、GSH-Px、CAT具有特殊的生理活性,是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)[15]。山桐子油具有較強(qiáng)的抗氧化能力,可以清除由力竭運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的大量自由基,進(jìn)而提高SOD、GSH-Px、CAT的活性。

    由表3還可以看出,力竭運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比MDA含量明顯提高(P<0.05),低、中、高劑量山桐子油組MDA含量呈下降趨勢(shì),高劑量山桐子油組與力竭運(yùn)動(dòng)組相比明顯降低(P<0.05)。長(zhǎng)時(shí)間力竭運(yùn)動(dòng)后MDA含量增加,MDA作為自由基與不飽和脂肪酸反應(yīng)生成的代謝產(chǎn)物,可以反映機(jī)體的自由基代謝變化,作為機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物,對(duì)細(xì)胞具有嚴(yán)重的損傷作用,心肌損傷導(dǎo)致ATP合成能力不足,無(wú)氧酵解增加,乳酸堆積,pH下降,細(xì)胞內(nèi)酸中毒,致使線粒體腫脹[14]。山桐子油可以刺激抗氧化酶的活性,清除自由基,提高ATP合成能力,減少乳酸堆積,阻止pH降低,提高心肌收縮能力,從而降低MDA的含量,減少對(duì)細(xì)胞的損傷。

    3 結(jié) 論

    大鼠在經(jīng)過(guò)力竭實(shí)驗(yàn)后,不同劑量的山桐子油對(duì)大鼠的心機(jī)線粒體影響不同,但均會(huì)增加ATP合成能力、SOD活性、GSH-Px活性、CAT活性,降低Ca2+含量、MDA含量,并且以上指標(biāo)呈量效關(guān)系。因此,山桐子油對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌線粒體的保護(hù)有很好的干預(yù)作用。

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