電針聯(lián)合氟西汀片對骨癌痛大鼠抑郁樣行為改善作用的研究

覃雙來，趙賓賓，關江鋒，吳永貴，張秋*

(1.武漢市第一醫(yī)院，湖北 武漢 430022；2.湖北中醫(yī)藥大學，湖北 武漢 430065)

通過電針聯(lián)合疼痛貼對骨癌痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用實驗，發(fā)現(xiàn)脛骨癌痛模型大鼠伴隨有神情呆漠、活動度降低、飲食減少、毛發(fā)干枯等抑郁樣行為，考慮該模型存在抑郁樣改變。電針具有較好的安神鎮(zhèn)痛作用，氟西汀片具有較好的抗抑郁作用，而癌痛是產(chǎn)生抑郁的主要原因，電針聯(lián)合氟西汀片可能會通過止痛和抗抑郁治療，從而改善脛骨癌痛模型大鼠的抑郁樣行為。本研究通過觀察脛骨癌痛模型大鼠抑郁樣行為學的改變，為臨床上推廣應用提供實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物來源

雄性SPF級SD大鼠(180～200 g)及幼鼠(60～80 g)，實驗動物及飼料均購于湖北省實驗動物研究中心，許可證號SCXK(鄂)2015-0018。于湖北中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥實驗中心(實驗動物中心)飼養(yǎng)，許可證號SYXK(鄂)2012-0067。室溫18℃～20℃，相對濕度50%～60%，12 h晝夜循環(huán)燈照，動物自由進食、飲水，適應性飼養(yǎng)3天后進行造模。所有實驗動物的處置均符合科技部2006年頒布的《關于善待實驗動物的指導性意見》的規(guī)定。

1.2 試劑與器材

曠場試驗分析系統(tǒng)(JLBehv-LA，上海吉量)；韓氏穴位神經(jīng)刺激儀(LH202H，中國，HANS)；氟西汀片由武漢市第一醫(yī)院制劑中心提供。

1.3 方法

1.3.1 模型的建立及分組

Walker-256乳腺癌細胞，購于武漢大學生物中心，注射至60～80 g幼鼠腹腔(4×107cells/mL)，接種7天后收集癌性腹水，離心3 min(1 300 rpm)，沉淀后,用10mL PBS洗滌,再次離心沉淀,然后以PBS重懸計數(shù),調(diào)整至適當濃度(4×106cells/mL),置于冰盒內(nèi)備用。對大鼠進行適應性刺激，篩選出連續(xù)3天的機械縮足閾值(Mechanical withdrawal threshold，MWT)≥26 g的大鼠，參照Medhurst的方法[6-7]建立脛骨癌痛模型。腹腔注射10%水合氯酸(4 mL/kg體質量)麻醉大鼠,仰臥位固定于操作臺上，右側膝關節(jié)部位備皮,碘伏消毒皮膚。在無菌條件下，左手固定膝關節(jié)使其表面皮膚緊張,用7號針頭在膝關節(jié)髕韌帶內(nèi)側緣沿脛骨縱軸往脛骨遠端鉆孔,深約1 cm。然后換用微量進樣器往脛骨骨髓腔內(nèi)注入4 μL腫瘤細胞，最后推入2 μL凝膠海綿溶液封口。另有大鼠12只，注射等量PBS后推入2 μL凝膠海綿溶液封口，作為空白對照組(空白組)。所有注射后均留針1 min,防止注射物滲出。術后9～13天MWT持續(xù)≤8 g的大鼠視為造模成功，成模率約為50%。建立大鼠脛骨癌痛模型，挑選表現(xiàn)有神情呆漠、活動度降低、飲食減少、毛發(fā)干枯等抑郁樣行為的大鼠48只，隨機分為模型對照組(模型組)、電針治療組(電針組)、氟西汀片治療組(氟西汀組)和電針聯(lián)合氟西汀片治療組(聯(lián)合治療組)4組，各組分籠飼養(yǎng)，做進一步實驗。

1.3.2 干預方法

空白組與模型組正常飼養(yǎng)，無特殊干預。電針組：按照《實驗針灸學》定位[8]，將大鼠軀干固定于布制的柔軟鼠套中，露出頭部，待大鼠安靜后用碘伏消毒，“百會”穴向后頭部平刺進針，用0.25 mm×13 mm針灸針直刺約5～10 mm接電針，通過韓氏穴位神經(jīng)刺激儀給予“疏密波”,電針頻率為2 Hz/100 Hz，刺激強度為0.5～1.5 mA，以穴位局部出現(xiàn)皮膚肌肉輕微顫動為宜，持續(xù)30 min，每日1次，連續(xù)12天。氟西汀組：0.2%氟西汀按10 mg/kg灌胃，每日1次，連續(xù)12天。聯(lián)合組：電針治療，0.5 h后0.2%氟西汀按10 mg/kg灌胃。各組自造模成功后第3天起，每天干預1次，連續(xù)12天，在干預完成后30 min內(nèi)，完成指標測定。

1.3.3 曠場試驗

本研究結果顯示，高脂血癥性和酒精性胰腺炎構成比升高，膽源性胰腺炎構成比下降，與其他研究結果一致[15-16]。這種變化與醫(yī)療水平的提高使膽道疾病得到很好的干預有關；同時還與社會經(jīng)濟的發(fā)展，人們飲食及生活習慣的改變有著密切的關系[17]。飲食結構的變化、酗酒及其他不良生活習慣導致高脂血癥和肥胖患者明顯增加[18-19]，血清三酰甘油持續(xù)>10 mmol/L或更高時就會誘發(fā)AP[20-21]。從AP病因譜變化來看，我國魯西南地區(qū)AP的發(fā)病原因由膽道系統(tǒng)疾病逐漸變?yōu)楦咧Y，因此積極改善人們的飲食結構和生活方式，降低高脂血癥的患病率已迫在眉睫。

實驗箱為80 cm×80 cm×80 cm的方形玻璃盒。清潔實驗箱后，將其放在與計算機上曠場實驗分析軟件相連的隔音箱中。將大鼠放在實驗箱中央后觀察其15 min的自由活動，應用動物行為視頻跟蹤分析系統(tǒng)跟蹤記錄5 min,分析大鼠的活動總路程。

1.3.4 懸尾實驗(TST)

將大鼠尾部固定后使大鼠頭部距離底面約5 cm，適應2 min后以攝像機進行記錄大鼠的不動時間。計算2～6 min大鼠的無肢體掙扎的不動時間總和。

1.3.5 強迫游泳試驗(FST)

強迫游泳試驗在直徑23 cm高60 cm裝滿一半水的測試桶中進行。實驗前大鼠禁食不禁水12 h。在造模前1天進行預實驗，大鼠強迫游泳15 min后回籠, 在造模第12天進行正式實驗。記錄內(nèi)容為5 min內(nèi)大鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài),或僅有細小的肢體運動以保持頭部浮在水面的不動時間。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 曠場試驗結果

在曠場試驗中，模型組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的活動里程低于空白組(P<0.01)；空白組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的活動里程高于模型組(P<0.01)。結果見表1。

表1 各組大鼠曠場試驗結果比較

注：與空白組比較，aaP<0.01；與模型組比較，bbP<0.01。

2.2 懸尾試驗結果

在懸尾試驗中，模型組、電針組、氟西汀組大鼠的不動時間高于空白組(P<0.01)；空白組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的不動時間低于模型組(P<0.01)。結果見表2。

表2 各組大鼠懸尾試驗結果比較

注：與空白組比較，aaP<0.01；與模型組比較，bbP<0.01。

2.3 強迫游泳試驗結果

在強迫游泳試驗中，模型組、電針組、氟西汀組大鼠的不動時間高于空白組(P<0.01)；空白組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的不動時間低于模型組(P<0.01)。結果見表3。

表3 各組大鼠強迫游泳試驗結果比較

注：與空白組比較，aaP<0.01；與模型組比較，bbP<0.01。

3 討論

癌癥是嚴重危害人類健康的疾病之一，骨轉移癌是癌癥晚期常見的并發(fā)癥，疼痛是骨轉移最主要的癥狀[9]，嚴重影響患者的生存質量[10]。絕大多數(shù)患者因癌痛相關知識缺乏，一旦出現(xiàn)疼痛會產(chǎn)生不同程度的抑郁[11]。國外Hoos等[12]首先報道了癌癥患者治療中存在著疼痛引起的抑郁狀態(tài)。大量研究報道了癌癥患者疼痛與抑郁的相關性[13],疼痛和抑郁通過反復的惡性循環(huán)相互影響和促進[14]。癌痛會導致患者情緒低落，產(chǎn)生抑郁，嚴重影響患者的生活質量[15]。而抑郁對疼痛的發(fā)生以及疼痛的頻率、持續(xù)時間、程度也具有很大影響[16]，抑郁情緒會加重患者對疼痛的感知，降低鎮(zhèn)痛治療的效果。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的兩種單胺類神經(jīng)遞質——去甲腎上腺素(NE)和5-羥色胺(5-HT)在疼痛信號的加工處理和疼痛的調(diào)節(jié)中扮演著重要角色。這兩種物質的功能狀態(tài)決定了一個人對疼痛的感覺，即NE和(或) 5-HT功能低下時，疼痛閾值下降，產(chǎn)生疼痛。相關研究顯示，抑郁癥的主要病理改變表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，突出表現(xiàn)為中樞單胺類神經(jīng)遞質尤其是NE和5-HT的功能低下，這樣就在疼痛和抑郁癥之間建立了聯(lián)系：中樞神經(jīng)系統(tǒng)5-HT 和 NE 的功能失調(diào)。

針灸療法以其獨特的理論體系，廣泛應用于癌痛治療領域。百會穴居顛頂，是足三陽經(jīng)、肝經(jīng)和督脈等多經(jīng)交會的部位，內(nèi)通于腦，為百脈聚會之所在，各經(jīng)脈氣會聚之處，能連貫周身經(jīng)穴，通達陰陽脈絡。百會穴性屬陽，陽中寓陰，對于調(diào)節(jié)機體的陰陽平衡起著重要的作用，是調(diào)節(jié)大腦功能的重要穴位。針刺百會可以調(diào)節(jié)元神, 安神鎮(zhèn)痛。

電針是現(xiàn)代科學與中醫(yī)學的結合產(chǎn)物, 是在針刺的基礎上接通電流，在脈沖電流的作用下，通過結合針和電的雙重刺激，調(diào)節(jié)細胞膜兩側的離子分布情況和極化狀態(tài)，從而發(fā)揮治療作用。基礎研究發(fā)現(xiàn)，電針刺激百會穴可使大鼠腦內(nèi)5-HT含量增加，增強選擇性 5-HT 再攝取抑制劑藥物的抗抑郁效果，減少大鼠模型的海馬結構損傷和功能異常，改善大鼠的抑郁樣行為和認知障礙[17]。

目前臨床上常用的三環(huán)類抗抑郁藥物能阻止中樞神經(jīng)突觸前膜對去甲腎上腺素的再攝取,阻斷Ach,以達到抗抑郁的目的。但三環(huán)類抗抑郁藥毒副作用較大，患者耐受性差。5-HT再攝取抑制劑氟西汀能夠增加突觸間隙中對5-HT的傳遞信息,緩解抑郁，安全性相較三環(huán)類抗抑郁藥物具有明顯優(yōu)勢。氟西汀可以上調(diào)患者的疼痛閾值和情感體驗，同時通過影響 NE、5-HT 及阿片類受體等從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果[18]，切斷抑郁和疼痛的負性相互作用，并發(fā)揮止痛的協(xié)同作用，減少患者精神痛苦,改善患者軀體癥狀。

曠場試驗中模型組大鼠的活動里程低于空白組，而懸尾試驗、強迫游泳試驗中模型組大鼠的不動時間均高于空白組，提示與空白組相比，脛骨癌痛模型大鼠存在抑郁樣行為學改變。曠場試驗中3組治療組的大鼠的活動里程均高于模型組，而懸尾試驗、強迫游泳試驗中模型組大鼠的不動時間均低于模型組，提示電針治療、氟西汀治療以及聯(lián)合治療均可以改善脛骨癌痛模型大鼠的抑郁樣行為學改變。

目前關于針藥結合的研究日益增多，針藥結合，相輔相成，互相協(xié)同，其療效顯著優(yōu)于單一治療。本研究的結果具有積極意義，為痛-抑郁二聯(lián)征提供了新的研究手段，肯定了電針治療、氟西汀治療以及聯(lián)合治療對骨癌痛大鼠抑郁樣行為的改善作用，且多項指標反應出電針聯(lián)合氟西汀治療較單純的電針治療或氟西汀治療更加有效，為擴大臨床應用提供了思路和借鑒。下一步應增加樣本量并優(yōu)化取穴，探討作用機制，擴大治療效果和應用范圍。