日糧中銅水平對貉造血功能和肝臟銅濃度的影響

魏宇森 徐婷婷 鄭淑強(qiáng) 魏 來 劉志平*

(1.東北林業(yè)大學(xué)野生動物資源學(xué)院，哈爾濱，150040；2.哈爾濱華隆藍(lán)狐育種有限公司，哈爾濱，150070)

銅是動物維持機(jī)體正常代謝的必需微量元素，它與畜禽的造血功能有著密切的關(guān)系。在1949年張力等人的研究(下同)[1]表明斷奶仔豬日糧中銅水平與血液中某些酶類在代謝上存在一定的相關(guān)關(guān)系，雷鳴等[2]發(fā)現(xiàn)飼糧銅水平對生長獺兔血清總蛋白、白蛋白含量有極其顯著影響。李延鵬等[3]得出適宜銅含量對育成前期水貂的血清酶活性有明顯促進(jìn)作用的結(jié)論，肉雞、鵝、山羊等畜禽日糧中添加高銅的研究也有不少報道，其結(jié)論較為一致，即高銅飼料對動物生長發(fā)育有顯著影響，但日糧中銅含量超過畜禽需求量，畜禽會出現(xiàn)中毒癥狀，有研究發(fā)現(xiàn)，在家畜日糧中使用高銅和超高銅添加劑可顯著增加肝臟和肌肉中的銅含量。添加過量的銅會增加肝銅的殘留量，增加肝臟的負(fù)擔(dān)，可能引起肝臟變性和中毒癥狀[4]。

但目前國內(nèi)外關(guān)于貉(NyctereutesProcyonoides)對銅需求量的研究不夠充分，缺乏貉營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)。因此，本試驗以硫酸銅作銅源，研究在貉冬毛期日糧中添加不同劑量銅，分析日糧中銅水平對貉機(jī)體造血功能和肝臟銅沉積的影響，為貉飼料添加適宜的銅元素提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

選取哈爾濱華隆藍(lán)狐育種有限公司教學(xué)實習(xí)基地的6月齡體重相近健康公貉12只。

1.1.2 試驗材料

飼料級硫酸銅，Cu含量≥25.0%(成都蜀星飼料有限公司)，真空采血管(江蘇朗健醫(yī)療)，邁瑞2800 pet血球分析儀(邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，ICP-AES(美國安捷倫公司725)。

1.2 試驗方法

1.2.1 分組與日糧配制

挑選12只健康公貉隨機(jī)平分成4組，分別編號為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組。Ⅳ組為對照組正常投喂基礎(chǔ)日糧(基礎(chǔ)日糧中銅為10 mg/kg)，每只貉的飼喂量為300 g/d。因楊趙偉等[5]對冀東地區(qū)貉飼料微量元素調(diào)查，發(fā)現(xiàn)銅的平均含量為63 mg/kg，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于李光玉[6]所提出的建議量，故分別向Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組日糧中添加10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg的外源銅，用飼料攪拌機(jī)均勻混合。由專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)管理，每日11：00進(jìn)行投喂(1次/d，連續(xù)30 d)。

1.2.2 血液樣本采集

梁金強(qiáng)等[7]研究發(fā)現(xiàn)Beagle犬一天內(nèi)血液學(xué)和血液生化指標(biāo)會出現(xiàn)波動，因此采血時間固定于9：00—10：00。分別在試驗的第1天、第8天、第15天、第22天采血3 mL(試驗貉人工保定，用酒精棉在后肢處消毒，用無菌一次性注射器后肢靜脈采血)，轉(zhuǎn)移至采血管中保存待測。

山洪災(zāi)害防治是福建省一項長期而艱巨的任務(wù)。在總結(jié)山洪災(zāi)害防治縣級非工程措施項目建設(shè)前期經(jīng)驗的同時，也應(yīng)思考和分析山洪災(zāi)害防治建設(shè)和管理中存在的實際問題。例如，項目運(yùn)行管理難度大，鄉(xiāng)村防洪基礎(chǔ)依然較薄弱，山丘區(qū)群眾防災(zāi)減災(zāi)意識仍有待增強(qiáng)等。當(dāng)前，福建省正在加快完成山洪災(zāi)害防治縣級非工程措施項目建設(shè)任務(wù)，加強(qiáng)運(yùn)行管理，不斷提高山洪災(zāi)害防治水平。

1.2.3 血液樣本檢測

使用滴管將所取血液樣本移入寵動物非真空EDTA抗凝采血管中，放入血球分析儀測定RBC、HGB、HCT。

1.2.4 肝臟銅含量測量

在第22天采血后將試驗動物屠宰，摘取肝臟樣品。采用鹽酸微波消解法對肝臟樣品預(yù)處理，將樣品用蒸餾水清洗，稱取一定量樣品(1 g左右)于燒杯中，加入鹽酸、硝酸、氫氟酸溶解樣品并過濾，使用雙蒸餾水將濾液定容至20 mL后采用ICP-AES測試肝臟中銅元素含量。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用單樣本t檢驗對試驗結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié) 果

2.1 血液參數(shù)

3項血液指標(biāo)與日糧中銅元素含量及飼喂時間的關(guān)系(圖1，圖2，圖3)。

圖1 日糧銅水平對貉HGB的影響Fig.1 Effects of dietary copper level on HGB in racoon dog

圖2 日糧銅水平對貉RBC的影響Fig.2 Effects of dietary copper level on RBC in racoon dog

圖3 日糧銅水平對貉HCT的影響Fig.3 Effects of dietary copper level on HCT in racoon dog

由圖1可知，Ⅰ組和Ⅱ組的HGB在飼喂初期呈現(xiàn)明顯的上升(P<0.05)，隨著試驗時間的增加開始下降，Ⅲ組的HGB呈穩(wěn)步上升；由圖2可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的RBC含量，在飼喂初期明顯上升，Ⅱ組和Ⅲ組在末期顯著下降(P<0.01)；由圖3可知，Ⅰ、Ⅱ組緩慢下降，Ⅲ組在試驗初期迅速上升而后下降。同時Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3組血液指標(biāo)在試驗后期都趨于相近水平，高于Ⅳ組，且差異顯著(P<0.05)。

2.2 肝臟銅沉積量

圖4 日糧銅水平對貉肝臟銅沉積的影響Fig.4 Effects of dietary copper levels on liver copper deposition of raccoon dog

由圖4可知，Ⅰ組和Ⅱ組肝臟中銅的沉積量與日糧中銅的含量呈正相關(guān)增加，當(dāng)日糧中銅元素含量超過30 mg/kg時肝臟銅沉積量迅速增加。

3 結(jié) 論

在貉冬毛期，向基礎(chǔ)日糧(銅元素含量為10 mg/kg)中添加適量銅元素對貉的造血功能有促進(jìn)作用；但日糧中銅元素水平高于30 mg/kg時銅會在貉肝臟中加倍沉積。

4 討 論

4.1 機(jī)體造血

血液對維持動物機(jī)體正常的生命活動具有十分重要的意義，血液中的各種成分能比較客觀地反映動物的代謝情況，因此，血液生化指標(biāo)能直接指示動物的生理功能是否正常，是臨床檢驗中非常有用的一個指標(biāo)[8-9]。RBC、HGB、HCT三者結(jié)合可間接指示造血功能的強(qiáng)弱。健康狀況下，RBC、HGB、HCT越高，說明造血功能越強(qiáng)。

資料顯示，健康貉的血液參數(shù)與以下幾種動物的各項血液生化值沒有顯著差異(表1)。

表1 健康貉的血液參數(shù)與其他動物的比較Tab.1 Comparison of blood parameters between healthy raccoon dog and other animals

注：引自梁金強(qiáng)等[7]、肖向紅等[10]、吳學(xué)壯等[11]
Note：The quote LIANG Jinqiang et al[7]，XIAO Xianghong et al[10]，WU Xuezhuang et al[11].

本試驗發(fā)現(xiàn)日糧銅水平對貉的RBC、HGB、HCT短期內(nèi)具有影響，與吳學(xué)壯等[11]發(fā)現(xiàn)銅水平對水貂血紅蛋白含量和血細(xì)胞比容回歸分析和方差分析均無顯著影響的結(jié)論有不同，其原因不得而知，由于條件所限，沒有對貉的其他生理指標(biāo)及生長發(fā)育情況予以監(jiān)測統(tǒng)計，有待于進(jìn)一步實驗。

4.2 高銅飼料的毒性作用

高銅飼料條件下的IV組，出現(xiàn)厭食等輕微中毒癥狀，自從發(fā)現(xiàn)高銅飼料對斷奶仔豬的生長性能具有促進(jìn)作用以來[12]，高銅飼料被盲目使用，追求高效率，忽視了環(huán)境效益和動物福利。研究表明高銅會造成動物肝臟損傷[13-14]，因此研究貉的肝臟銅沉積量，對于貉飼料中銅適宜量的確定有十分重要的意義。

本試驗基礎(chǔ)日糧銅水平為10 mg/kg，圖4表明，Ⅳ、Ⅰ、Ⅱ組肝臟銅沉積量與日糧銅水平呈線性增長，Ⅲ組肝臟銅沉積量迅速增加。張力等[1]和王建明等[15]提出當(dāng)動物機(jī)體銅水平低于需要量時，肝臟銅沉積量會隨著日糧的變化而變化，呈一定的相關(guān)性；當(dāng)日糧銅明顯高于動物機(jī)體需要量時，肝臟銅沉積量會成倍數(shù)增加，沒有相關(guān)性。本試驗所設(shè)銅濃度梯度Ⅰ、Ⅱ組在貉所需銅含量范圍內(nèi)，而Ⅲ組超過了貉的正常需求量。Aulerich 等[16]以CuSO4·5H2O 為銅源，水貂日糧銅元素濃度為50 mg/kg時水貂生長正常，所以不適宜用水貂飼料銅含量標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)貉。

在貉養(yǎng)殖方面，陳蓉[17]總結(jié)貉飼料中毒的措施，陳國發(fā)[18]系統(tǒng)介紹貉的飼養(yǎng)管理。因為動物體內(nèi)銅的含量直接影響酪氨酸酶的活性，進(jìn)而影響動物毛色[19-20]。貉作為珍貴的毛皮動物之一，隨著人們對貉皮的需求量不斷增加，確定貉飼料含銅量相當(dāng)關(guān)鍵。由于本試驗的周期較短，長期飼喂高銅飼料對貉的健康狀況及皮張質(zhì)量的影響有待于進(jìn)一步研究。