五味子靈芝片對(duì)酒精所致大鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的影響

白紅光，岳云燕，董守光，于曉風(fēng)，王 鵬，睢大筼*

（1.吉林省紅五味生物技術(shù)有限公司，長(zhǎng)春134200；2.吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春130021）

五味子首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，為木蘭科北五味子屬植物五味子Schisandra chinensis（Turcz）Baill.的果實(shí)，習(xí)稱北五味子，是我省長(zhǎng)白山道地中藥材，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心之功效。五味子中化學(xué)成分為揮發(fā)性成分、木脂素類、有機(jī)酸類、多糖類、苷類及其他成分等[1]。五味子所含7種主要木脂素對(duì)化學(xué)毒物引起的肝細(xì)胞損傷均有明顯保護(hù)作用[2]。靈芝為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma Lucidium(Leyss.ex Fr.)Karst或紫芝G.sinensis Zhao,Xu et Zhang的干燥子實(shí)體。靈芝三帖酸及靈芝多糖對(duì)多種理化及生物因素引起的肝損傷均有保護(hù)作用，能促進(jìn)肝臟對(duì)毒物的代謝，對(duì)中毒性肝炎有確切的療效[3、4]。五味子靈芝片是將我省道地中藥材五味子和靈芝合理配伍研制的一種高端保健食品，按“有助于降低酒精性肝損傷危害”功效進(jìn)行開發(fā)。本文通過建立大鼠酒精性肝損傷模型，觀察其對(duì)大鼠酒精所致實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用，為開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重220～230g，合格證號(hào)SCXK-（吉）2007-0003，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品與試劑

五味子靈芝片由吉林省紅五味生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：20181015；以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成混懸液；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、腫瘤壞死因子 α （TNF-α）、 白細(xì)胞介素6（IL-6）、 丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶 （SOD）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）及天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）測(cè)試盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

雄性Wistar大鼠50只，取10只大鼠為正常組，其余大鼠建立酒精性肝損傷模型[5]：第1~4周灌胃給予40%白酒8g/kg，第5~8周給予50%白酒9g/kg，第9~16周給予 50%白酒 10g/kg[酒精劑量（g）=乙醇體積（mL）×預(yù)配酒精濃度（%）×酒精密度（0.8 g/mL）]。第9周造模大鼠根據(jù)體重隨機(jī)分為4組：模型組，五味子靈芝片0.25、0.5、1.0 g/kg組，各組大鼠分別每天灌胃給予相應(yīng)藥物1次，正常組及模型組給予同體積0.5%的羧甲基纖維素鈉。給藥8周后，大鼠以水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清， 檢測(cè) TC、TG、LDL-c、HDL-c、TNF-α、IL-6、MDA含量及SOD、AST、ALT活性；取血后摘取肝臟，去除周圍結(jié)締組織，經(jīng)生理鹽水洗滌后用濾紙吸干，電子天平稱肝濕重，計(jì)算肝臟指數(shù) [肝臟指數(shù)=肝濕重（g）/體重（g）×100%]，取部分肝臟制備勻漿，檢測(cè) TC、TG、MDA 含量及SOD活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間對(duì)比采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠體質(zhì)量和肝臟指數(shù)的影響

與正常組比較，模型組大鼠食欲減退，活動(dòng)減少，伴有腹瀉，體質(zhì)量明顯降低，肝臟指數(shù)明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，五味子靈芝片0.5、1.0 g/kg組大鼠毛發(fā)光澤，體態(tài)活潑，食量及排便未見異常，體質(zhì)量明顯增加，肝臟指數(shù)明顯降低（P<0.05或P<0.01），結(jié)果見表1。

表1 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠體質(zhì)量和肝臟指數(shù)的影響 (x±s,n=10)

2.2 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠脂類代謝的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清TC、TG、LDL-c含量及TC/HDL-c、LDL-c/HDL-c比值均明顯增加（P<0.05或P<0.01），HDL-c含量明顯降低（P<0.05）。 與模型組比較，五味子靈芝片 0.5、1.0 g/kg組血清 TC、TG、LDL-c含量及TC/HDL-c、LDL-c/HDL-c比值均明顯降低（P<0.05或 P<0.01），HDL-c含量明顯增加（P<0.05），結(jié)果見表 2。

表2 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠脂類代謝的影響 (x±s,n=10)

2.3 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠血清AST及ALT活性的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清AST及ALT活性均明顯升高（P＜0.05 或 P＜0.01）；與模型組比較，五味子靈芝片0.5、1.0 g/kg組血清AST及ALT活性均明顯降低（P＜0.05 或 P＜0.01），0.25g/kg組血清 ALT 活性亦明顯降低（P＜0.05），結(jié)果見表 3。

表3 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠血清AST及ALT活性的影響 (x±s,n=10)

2.4 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠血清TNF-α、IL-6含量的影響

與正常組比較，模型組小鼠血清TNF-α及IL-6含量均明顯增加（P＜0.01）；與模型組比較，五味子靈芝片1.0 g/kg劑量組能明顯降低大鼠血清TNF-α及IL-6含量（P＜0.05），0.25及 0.5 g/kg組對(duì)血清 TNF-α 及 IL-6 含量均無明顯影響（P＞0.05），結(jié)果見表 4。

表4 五味子靈芝片對(duì)酒精性肝損傷大鼠血清TNF-α及IL-6含量影響 (x±s,n=10)

3 討論

長(zhǎng)期大量飲酒可引起酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纖維化以及肝硬化等不同程度的肝損傷。酒精參與肝細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)，其在肝臟中過量代謝，使肝細(xì)胞產(chǎn)生大量的自由基，促使肝細(xì)胞變性、壞死和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，最終導(dǎo)致肝損傷[5]。在ROS的作用下，脂質(zhì)的過氧化作用產(chǎn)生大量MDA等過氧化物，這些多不飽和脂肪酸的代謝產(chǎn)物能抑制GSH的生物合成，減弱SOD的抗氧化功能，使三羧循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝，致使脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積，TG升高，并最終誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，引起血清ALT及AST升高[6]。

大量酒精攝入后，能引起某些腸道細(xì)菌釋放內(nèi)毒素進(jìn)入進(jìn)入肝臟，迅速引起肝臟內(nèi)的巨噬細(xì)胞活化，與可溶性LPS結(jié)合蛋白結(jié)合，與一種由mCD14和toll樣受體-4組成的受體復(fù)合物相互作用，導(dǎo)致NF-κB的產(chǎn)生，進(jìn)而產(chǎn)生大量細(xì)胞毒性因子以及TNF-α、IL-6等炎性因子，共同促進(jìn)了肝細(xì)胞與酒精性相關(guān)肝病的發(fā)生[7～9]。本實(shí)驗(yàn)中，參芝片能能明顯增加大鼠體質(zhì)量，降低肝臟指數(shù)， 降低血清TC、TG、LDL-c、TNF-α和IL-6含量及AST、ALT活性，升高HDL-c含量，提示其對(duì)酒精所致大鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷具有保護(hù)作用，可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂及對(duì)抗炎癥損傷實(shí)現(xiàn)的。