乙型肝炎治療性疫苗研究進(jìn)展

楊富強(qiáng)，饒桂榮

·導(dǎo)向與述評(píng)·

乙型肝炎治療性疫苗研究進(jìn)展

楊富強(qiáng)，饒桂榮

當(dāng)前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)研發(fā)了一系列慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）治療性疫苗，主要有蛋白類疫苗、T細(xì)胞表位肽疫苗、DNA疫苗和細(xì)胞類（樹突狀細(xì)胞等）疫苗等。本文對(duì)國(guó)內(nèi)外相關(guān)乙型肝炎治療性疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，對(duì)存在問(wèn)題進(jìn)行討論分析，并提出解決方案，以期為治療CHB的臨床研究提供參考。

疫苗；乙型肝炎，慢性；免疫系統(tǒng)過(guò)程

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）是由HBV引發(fā)的一種世界性分布的傳染性疾病，未經(jīng)合理有效治療，容易導(dǎo)致肝硬化、肝癌甚至肝衰竭。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球有超過(guò)20億人感染HBV，其中超過(guò)2億人是慢性感染，每年約有60萬(wàn)～100萬(wàn)人死于CHB相關(guān)并發(fā)癥。CHB也是嚴(yán)重危害我國(guó)人民身體健康的重大傳染病，其防治工作的研究受到高度重視[1-3]。

目前臨床上已有抗病毒藥物在抑制病毒復(fù)制以及減輕肝臟炎癥方面發(fā)揮了重要作用，但它們并不能徹底清除病毒，尤其對(duì)肝細(xì)胞核內(nèi)產(chǎn)生新病毒的根源，即病毒復(fù)制的原始模板——共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）不能清除[4-5]。因此，大多數(shù)患者需要長(zhǎng)期治療，但這往往會(huì)出現(xiàn)耐藥性、病毒變異和反跳、病情反復(fù)等情況，導(dǎo)致久治不愈。

免疫治療有望成為CHB治療重要手段，但目前尚缺乏療效確切的乙型肝炎特異性免疫療法。治療性疫苗是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的免疫治療新概念，旨在提高機(jī)體特異性免疫應(yīng)答，在抗病毒感染方面具有廣闊應(yīng)用前景。乙型肝炎治療性疫苗更是一種基于特異性主動(dòng)免疫的調(diào)節(jié)制劑，主要是通過(guò)尋找并設(shè)計(jì)HBV特有抗原，有效刺激HBV攜帶者或CHB患者免疫系統(tǒng)，打破免疫耐受，通過(guò)肝細(xì)胞殺傷或非殺傷途徑，特異性地抑制和清除病毒，達(dá)到治療目的，它為CHB的治療策略及其藥物開發(fā)提供了新的思路[6]。本文針對(duì)近年來(lái)乙型肝炎抗病毒治療現(xiàn)狀和治療性疫苗研究領(lǐng)域的進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 CHB抗病毒治療現(xiàn)狀

綜合近年來(lái)CHB治療的基礎(chǔ)和臨床研究進(jìn)展，2014年12月廣州召開的“亞太肝病學(xué)會(huì)慢性乙型肝炎治療”專題研討會(huì)上與會(huì)學(xué)者達(dá)成共識(shí)——有效抑制HBV感染所導(dǎo)致的肝硬化、肝癌及肝衰竭的發(fā)生是目前抗病毒治療的戰(zhàn)略目標(biāo)，因此形成2個(gè)治療終點(diǎn)：①滿意終點(diǎn)，即HBVDNA降低，HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換；②理想終點(diǎn)，即HBV cccDNA臨床消除，HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換。

據(jù)臨床研究報(bào)道，在已有核苷（酸）類似物［nucleos(t)ide analogues,NUCs］抗病毒藥物的基礎(chǔ)上聯(lián)用、加用或改用免疫調(diào)節(jié)藥物［如干擾素（interferon,IFN）］，可獲得有意義的結(jié)果。如Ning等[7]對(duì)服用恩替卡韋（ETV）9～36個(gè)月且血清HBV DNA≤1000 copies/ml的患者改用聚乙二醇IFN（pegylated IFN,Peg-IFN）α-2a持續(xù)治療48周，該組相對(duì)于繼續(xù)服用ETV組有更高的HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換率（14.9%vs.6.1%，P=0.047），且有8.5%的HBsAg轉(zhuǎn)陰率，部分患者達(dá)到免疫控制的臨床標(biāo)準(zhǔn)。Xie等[8]評(píng)估了Peg-IFNα聯(lián)合ETV的療效，HBeAg水平顯著降低且血清學(xué)轉(zhuǎn)換率達(dá)31%。荷蘭Brouwer等[9]開展的一項(xiàng)全球多中心隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究ETV治療24周后加用Peg-IFNα持續(xù)治療48周的療效，HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換率（69%vs.25%，P=0.049）及HBV DNA＜2000 IU/ml的比例（79% vs.25%，P=0.014）均顯著高于ETV單藥治療組。因此，治療CHB的一線口服NUCs聯(lián)合IFN等免疫調(diào)節(jié)藥物，很可能成為未來(lái)臨床上的優(yōu)選方案。

2 乙型肝炎治療性疫苗國(guó)內(nèi)外研究概況

乙型肝炎患者自身抗HBV特異性細(xì)胞免疫狀態(tài)是決定HBV感染自然史和轉(zhuǎn)歸的重要因素之一，探尋有效的特異性免疫調(diào)節(jié)治療手段，以提高現(xiàn)有抗病毒藥物療效，成為今后抗病毒治療策略調(diào)整的重要方向。由于乙型肝炎治療性疫苗具有NUCs和IFN所不具備的優(yōu)勢(shì)，能更有效誘導(dǎo)機(jī)體特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）活性，備受學(xué)者們的關(guān)注?，F(xiàn)階段乙型肝炎治療性疫苗主要有蛋白類疫苗、T細(xì)胞表位肽疫苗、DNA疫苗和細(xì)胞類疫苗等幾大類別（表1）。

2.1 蛋白類疫苗蛋白類疫苗包括重組HBsAg疫苗（包含HBV包膜S蛋白的不同組分preS1、preS2和S）、HBcAg與HBsAg聯(lián)用疫苗、HBsAg及其特異性抗體組成復(fù)合物等。

將現(xiàn)有預(yù)防用的重組HBsAg疫苗加大劑量用于治療CHB，能引發(fā)特異但短暫的抗病毒免疫反應(yīng)。例如，康泰生物制品股份有限公司研發(fā)的大劑量乙型肝炎疫苗，在鋁佐劑含量不變的情況下把HBsAg濃度增加為60μg/ml。該疫苗已上市（國(guó)藥準(zhǔn)字S20100002），但只批準(zhǔn)用于預(yù)防乙型肝炎。我國(guó)最新CHB防治指南明確指出，對(duì)免疫功能低下或無(wú)應(yīng)答者，應(yīng)增加疫苗的接種劑量[10]。因此，該疫苗有一定的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。比利時(shí)的Glaxo－SmithKline公司將100μg重組HBsAg與AS02B佐劑聯(lián)用進(jìn)行肌內(nèi)注射，195例HBeAg陽(yáng)性乙型肝炎患者隨機(jī)按1∶1比例接受12次免疫┼拉米夫定（LAM）治療（治療組）或單用LAM治療（對(duì)照組），在第52周后誘發(fā)HBsAg特異性細(xì)胞增殖和HBsAb產(chǎn)生，但與對(duì)照組相比，治療組HBeAg轉(zhuǎn)陰率無(wú)明顯提高（16.1%vs.18.8%，P=0.682）[11]。

表1 乙型肝炎治療性疫苗Table 1 Therapeutic vaccines against hepatitis B

重組酵母表達(dá)的HBsAg與其相應(yīng)的高滴度人特異性HBIG的Fab段結(jié)合組成免疫復(fù)合物，可增加抗原免疫原性。如Wen等[12]研發(fā)的抗原抗體復(fù)合物疫苗——乙克（YIC），通過(guò)改變對(duì)HBsAg的提呈方式以誘導(dǎo)產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，消除免疫耐受性。早期研究證明，YIC能引起HBeAg陽(yáng)性CHB患者HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換并伴隨HBsAb產(chǎn)生和病毒載量降低[13]。從Ⅱb臨床試驗(yàn)對(duì)242例CHB患者的治療結(jié)果看，YIC治療組HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換率為21.8%（17/78），對(duì)照組為9.0%（7/78），但治療24周后仍能檢測(cè)到中等水平血清HBVDNA和HBsAg[14]。因此，該復(fù)合物型治療性疫苗能否有效降低并清除肝細(xì)胞內(nèi)cccDNA，能否達(dá)到徹底清除肝細(xì)胞內(nèi)病毒的目的，尚待證實(shí)。Ⅲ期臨床試驗(yàn)顯示，該疫苗治療效果并不顯著[15]。目前該疫苗正在改進(jìn)試驗(yàn)方案。

2.2 T細(xì)胞表位肽疫苗T細(xì)胞表位是存在于抗原分子上的被T細(xì)胞所識(shí)別的抗原決定簇，是具有免疫原性的多肽片段。T細(xì)胞通過(guò)其表面T細(xì)胞受體識(shí)別這些抗原性片段后，開始免疫應(yīng)答并活化增殖。美國(guó)Epimmune公司首先開發(fā)了T細(xì)胞表位肽疫苗——Theradigm-HBV，該疫苗由3部分共價(jià)連接：HBV CTL表位HBc18-27、TT Th表位（TT830-843）和N端2棕櫚酸分子。26名HLA-A2健康受試者和90例CHB患者接受免疫，研究證明，Theradigm-HBV在26名健康受試者中可誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫力，但在CHB患者中效果不明顯[16]。

在Epimmune公司的疫苗設(shè)計(jì)原理基礎(chǔ)上，Shi等[17]合成類似的HBV多肽疫苗——治療用（合成肽）乙型肝炎疫苗。該疫苗在HLA-A2+小鼠體內(nèi)能誘導(dǎo)發(fā)生Th1極化，激活CD8+T淋巴細(xì)胞并產(chǎn)生HBV特異性CTL毒性反應(yīng)。但其Ⅱ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組（疫苗┼ETV）和對(duì)照組（空脂質(zhì)體┼ETV）相比，除隨訪第12周病毒學(xué)應(yīng)答率顯著高于對(duì)照組外，2組其他療效指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。目前，該疫苗尚未進(jìn)行新的臨床試驗(yàn)研究。

2.3 DNA疫苗HBV DNA疫苗屬基因疫苗，是指將編碼某種抗原蛋白的重組質(zhì)粒載體直接導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞后，通過(guò)宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)表達(dá)蛋白抗原，誘導(dǎo)相應(yīng)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。近年來(lái)其在治療性疫苗研究中成為研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。

國(guó)內(nèi)首個(gè)批準(zhǔn)用于臨床研究的治療性DNA疫苗——雙質(zhì)粒HBV DNA疫苗，是以編碼HBV抗原蛋白preS2┼S的真核表達(dá)質(zhì)粒pS2.S作為疫苗，同時(shí)構(gòu)建編碼人IL-2和IFNγ融合蛋白的質(zhì)粒作為佐劑，并應(yīng)用了在體電脈沖技術(shù)肌內(nèi)注射給藥。Ⅰ期試驗(yàn)結(jié)果證明該疫苗的安全性和耐受性良好，30名健康志愿者都未出現(xiàn)不良反應(yīng)[18]。Ⅱa期試驗(yàn)中將39例CHB患者根據(jù)轉(zhuǎn)氨酶水平分為2組：第1組共6例，轉(zhuǎn)氨酶水平比正常水平高1～2倍，只接受DNA疫苗治療；第2組轉(zhuǎn)氨酶水平高于正常水平2倍以上，共33例，隨機(jī)按1∶2比例接受LAM┼安慰劑（對(duì)照組）或LAM┼DNA疫苗（治療組）治療。結(jié)果顯示：第1組患者產(chǎn)生特異性分泌IFNγ的T淋巴細(xì)胞，能夠有效誘導(dǎo)抗HBV特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。第2組患者接受LAM┼DNA疫苗后36周，檢測(cè)到HBV DNA抑制率比對(duì)照組高，并在第60周達(dá)到顯著性差異（90.9%vs.54.5%，P=0.030）；且HBV基因耐藥雙位點(diǎn)變異（rtM204V/I/S┼rtL180M）發(fā)生例數(shù)較對(duì)照組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（4.5%vs. 36.4%，P=0.030）；與對(duì)照組比較，LAM┼DNA疫苗治療組顯示較低的病毒學(xué)突破率（P=0.030）和更高的HBV特異性T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答率[19]。為進(jìn)一步證明LAM聯(lián)合雙質(zhì)粒HBV DNA疫苗治療組的有效性和安全性，該研究團(tuán)隊(duì)擴(kuò)大病例數(shù)至225例進(jìn)行Ⅱb臨床多中心隨機(jī)雙盲試驗(yàn)，公開的報(bào)道數(shù)據(jù)顯示：治療組血清HBV DNA抑制率和HBeAg轉(zhuǎn)換率均優(yōu)于對(duì)照組。2組HBV DNA抑制率在第48周時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（10.3%vs.3.5%，P=0.044）。亞組分析結(jié)果顯示，在第72周時(shí)，治療組具有較高的HBeAg轉(zhuǎn)換率（54.5%vs.15.8%，P=0.040），提示雙質(zhì)粒HBV DNA疫苗誘導(dǎo)較強(qiáng)的病毒特異性T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答。

法國(guó)巴斯德研究所Mancini-Bourgine等[20-21]研發(fā)的DNA疫苗是pCMV-S2.S疫苗（編碼HBV包膜S和M蛋白）。一項(xiàng)小樣本臨床試驗(yàn)中，10例HBeAg陽(yáng)性慢性HBV攜帶者接受治療，2例檢測(cè)到T淋巴細(xì)胞增殖，2例產(chǎn)生抗preS2抗體且出現(xiàn)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，4例血清HBV DNA水平下降，其中1例完全消失，直至第15個(gè)月仍檢測(cè)不到病毒DNA，表明該DNA疫苗可恢復(fù)或激活慢性HBV攜帶者T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。但Ⅰ/Ⅱ期臨床研究報(bào)道顯示，70例CHB患者經(jīng)該疫苗（ANRSHB02VAC-AND）聯(lián)合NUCs治療后，未能達(dá)到有效防止病毒學(xué)突破的預(yù)期目標(biāo)[22]。韓國(guó)Pohang科技大學(xué)開發(fā)的HB-100DNA疫苗，由5個(gè)不同的pGX10為載體的質(zhì)粒（8mg）組成，包括S（2mg）┼S1/S2/X（1.5mg）┼core（1.5mg）┼Pol（1mg）┼hIL-12N222L（2mg），表達(dá)HBV多數(shù)抗原蛋白和人類IL-12N222L細(xì)胞因子。試驗(yàn)中12例CHB患者先接受LAM治療8周，然后開始HB-100的免疫，結(jié)果顯示一半的患者HBV DNA滴度降低，伴隨產(chǎn)生HBV特異性分泌IFNγ的T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，在治療結(jié)束40周后仍能檢測(cè)到記憶性CD4+T淋巴細(xì)胞[23]。最近該研究小組將HB-100改進(jìn)為HB-110，并在研究中同時(shí)給予患者阿德福韋酯治療，結(jié)果14例患者只有1例出現(xiàn)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，提示HB-110的特異性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答較弱[24-25]。

2.4 細(xì)胞類疫苗

2.4.1 DC疫苗研究證實(shí)，在HBV感染中存在抗原提呈功能的缺陷，特別是DC功能的缺陷會(huì)導(dǎo)致感染HBV后成為HBV攜帶狀態(tài)。在體外用抗原沖擊致敏DC，再回輸體內(nèi)，或?qū)⒖乖嚯幕驅(qū)隓C，可有效誘導(dǎo)特異性CTL反應(yīng)[26]。因此，利用DC的這種免疫功能或與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine-induced killer cells,CIK細(xì)胞）聯(lián)合IFN進(jìn)行主動(dòng)免疫治療將為治療CHB提供一種手段。

Akbar等[27]取CHB患者血液制備的HBsAg/ HBcAg-DC細(xì)胞，與自體T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，以評(píng)估DC特異性免疫調(diào)節(jié)的能力。該試驗(yàn)證明，負(fù)載HBsAg/HBcAg抗原的DC疫苗能誘導(dǎo)CHB患者自體T淋巴細(xì)胞增殖和抗原特異性的CTL應(yīng)答?？岛Ｑ嗟萚28]將320例CHB患者隨機(jī)分為2組，每組各160例，對(duì)照組采用自體DC和CIK細(xì)胞治療，試驗(yàn)組采用自體DC和CIK細(xì)胞聯(lián)合IFN治療。結(jié)果顯示，2組治療后HBV DNA和HBeAg水平均明顯下降（P＜0.01），證明自體DC和CIK細(xì)胞可有效清除HBV，顯著改善CHB患者的肝功能及細(xì)胞免疫功能，且聯(lián)合IFN療效更佳。

2.4.2 T細(xì)胞疫苗T細(xì)胞是指用于治療腫瘤、病毒性疾病和自身免疫性疾病的CTL。近年來(lái)發(fā)展的利用基因改造技術(shù)表達(dá)特異性CAR的T細(xì)胞疫苗，因更具靶向性和殺傷活性而引人關(guān)注，可能為CHB治療開創(chuàng)新局面。Qasim等[29]通過(guò)基因修飾從患者自體細(xì)胞構(gòu)建了嵌合HBsAg修飾的T細(xì)胞，用于治療HBV感染導(dǎo)致的肝癌，患者體內(nèi)HBsAg水平顯著降低，未發(fā)生肝臟炎癥或其他毒性，確認(rèn)了嵌合HBsAg受體修飾的T細(xì)胞療法對(duì)肝癌治療的可行性。

3 乙型肝炎免疫治療存在的問(wèn)題

乙型肝炎蛋白類疫苗是外源性抗原，進(jìn)入機(jī)體后，大部分抗原被抗原提呈細(xì)胞攝入至細(xì)胞漿中，水解為小的抗原肽片段后與主要組織相容性復(fù)合體（majorhistocompatibility complex,MHC）-Ⅱ類分子結(jié)合，形成穩(wěn)定的抗原肽MHC-Ⅱ類分子復(fù)合物，提呈給CD4+T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)以Th2型為主的體液免疫應(yīng)答，不能激發(fā)較強(qiáng)細(xì)胞免疫反應(yīng)，故不能完全殺滅肝細(xì)胞內(nèi)病毒。蛋白類疫苗還往往須借助佐劑（鋁等）或多次注射來(lái)加強(qiáng)免疫效果，在給機(jī)體帶來(lái)不良反應(yīng)的同時(shí)，也會(huì)造成機(jī)體免疫疲憊[30]。

從國(guó)內(nèi)外近年來(lái)的試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，抗原抗體復(fù)合物疫苗和多表位肽疫苗臨床效果并不顯著[14-15]，可能因?yàn)榭乖贵w復(fù)合物需要適當(dāng)比例才能使機(jī)體產(chǎn)生高滴度抗體，而多表位肽疫苗須改善短肽的抗原性以滿足體內(nèi)有效的抗原提呈[16]。因此，在免疫顯性表位的基礎(chǔ)上重新設(shè)計(jì)或修飾線性短肽，改變它們的分子結(jié)構(gòu)以滿足抗原提呈的需要成為關(guān)鍵。

細(xì)胞類疫苗可有效打破免疫耐受，恢復(fù)細(xì)胞免疫應(yīng)答和清除HBV，但需嚴(yán)格的細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增和檢測(cè)鑒定等過(guò)程。為增強(qiáng)DC疫苗效果，可能還須修飾DC或與其他免疫調(diào)節(jié)藥物聯(lián)合。

DNA疫苗的優(yōu)點(diǎn)在于內(nèi)源性抗原的表達(dá)、修飾及合成在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，并通過(guò)MHC-Ⅰ類抗原復(fù)合物方式提呈，能更有效誘導(dǎo)機(jī)體特異性CTL活性[31-32]。但由于裸DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染率低，存在免疫反應(yīng)起效慢、效果較弱等缺點(diǎn)。我們的研究發(fā)現(xiàn)，一個(gè)療程的DNA疫苗給藥，只在一定的治療階段提高了CHB患者病毒學(xué)應(yīng)答，且其誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答出現(xiàn)時(shí)間晚，持續(xù)時(shí)間短，這與國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究結(jié)果基本一致[20，33]。法國(guó)學(xué)者曾嘗試在末次DNA疫苗給藥后的數(shù)月，增強(qiáng)免疫接種，但未激發(fā)起有效的T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答而提高抗病毒治療的遠(yuǎn)期效果[21]。在一項(xiàng)納入70例患者的隨機(jī)開放性對(duì)照研究中，該HBVDNA疫苗序貫性聯(lián)合NUCs治療CHB未能達(dá)到有效防止HBV病毒學(xué)突破和反彈的主要治療終點(diǎn)[22]。那么，當(dāng)治療性HBVDNA疫苗誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答強(qiáng)度減弱或消失時(shí)，是選擇一次性增強(qiáng)免疫，還是繼續(xù)另一個(gè)療程的治療性疫苗給藥？如何選擇增強(qiáng)免疫原及其接種的時(shí)機(jī)？其臨床和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)是什么？這些都需要更多的基礎(chǔ)及臨床試驗(yàn)研究來(lái)解釋和回答。因此，如何更好地提高CHB患者具有抗病毒治療效應(yīng)的HBV特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答的強(qiáng)度，并延長(zhǎng)其持續(xù)時(shí)間，是治療性疫苗研究和開發(fā)過(guò)程中亟待解決的問(wèn)題。

4 解決方案和展望

據(jù)報(bào)道，乙型肝炎患者體內(nèi)記憶性T淋巴細(xì)胞，尤其是中央記憶性T淋巴細(xì)胞的形成和維持有利于HBV感染的控制和病毒清除[34]，因此先給予NUCs，有效降低病毒載量或體內(nèi)抗原負(fù)荷，在此基礎(chǔ)上再免疫接種治療性DNA疫苗，可能有利于T淋巴細(xì)胞免疫抵抗細(xì)胞內(nèi)感染病原體，這對(duì)于CHB的臨床治療具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。

針對(duì)HBV治療性疫苗的問(wèn)題和技術(shù)瓶頸，可采用以下方法：①采用電脈沖技術(shù)輔助DNA疫苗增加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率；②采用細(xì)胞因子（如IL-2、IFNγ或IL-12）為佐劑增強(qiáng)免疫效果；③引用有利于中央記憶性T淋巴細(xì)胞形成和維持的治療性疫苗研發(fā)策略。治療性雙質(zhì)粒HBV DNA疫苗一系列研究[18-19]證明采用以上方法可增強(qiáng)治療性HBV DNA疫苗作用，產(chǎn)生較強(qiáng)的以Th1型為主的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答，也證明抗病毒藥物與特異性免疫應(yīng)答聯(lián)合應(yīng)用，可在部分患者中有效降低病毒復(fù)制水平并伴有HBeAg轉(zhuǎn)陰及HBeAb產(chǎn)生。治療性HBV DNA疫苗與記憶性T淋巴細(xì)胞形成和維持的關(guān)系研究，可能為HBV治療性疫苗或藥物提供研制思路。因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CHB患者T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答，從功能和表型上觀測(cè)和分析中央記憶性/效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞在增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞免疫功能誘導(dǎo)及維持中的重要作用，及其與治療性疫苗臨床療效的關(guān)系極為重要。檢測(cè)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞免疫功能，優(yōu)化治療性HBVDNA疫苗的免疫接種策略，如初免-加強(qiáng)策略、抗病毒藥物聯(lián)合特異性DNA疫苗等，具有重要的臨床意義[35-36]。

盡管圍繞新靶位的抗病毒治療研究有了一定進(jìn)展，但距離臨床實(shí)際應(yīng)用仍有很長(zhǎng)的路要走。探尋特異性免疫治療新方法——誘導(dǎo)HBV感染者自身體內(nèi)強(qiáng)勁而可持續(xù)的多表位以及多克隆HBV特異性的T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。同時(shí)，要提高臨床治療有效率，就必須與抗病毒治療聯(lián)合，如何正確選擇患者、把握治療時(shí)機(jī)以及實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療是獲得臨床研究實(shí)質(zhì)性進(jìn)展的關(guān)鍵。隨著分子病毒學(xué)、分子免疫學(xué)及分子細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域研究的不斷進(jìn)展，我們期待乙型肝炎治療性疫苗的研究和應(yīng)用將為抗病毒治療達(dá)到理想終點(diǎn)起到關(guān)鍵作用。

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（2015-01-13收稿 2015-02-13修回）

（責(zé)任編委 李 軍 本文編輯 王 姝）

Research progress of therapeutic vaccines against hepatitis B

YANG Fu-qiang*,RAO Gui-rong
Liver Disease Research Center,458 Hospital of PLA,Guangzhou,Guangdong 510600,China
*Corresponding author,E-mail:yangfq23@163.com

A series of therapeutic vaccines against chronic hepatitis B(CHB),including the ones of HBV protein,the specific epitope peptide,DNA plasmids and cells(dendritic cells),have been studied and developed.The authors presenta literature review on the research progress of therapeutic vaccines againsthepatitis B and propose a solution for the obstacleswe are facing during the development of therapeutic vaccines,so as to provide a reference for clinical research formanagementofCHB.

vaccines;hepatitis B,chronic;immune system processes

R186；R512.62

A

1007-8134(2015)02-0065-05

國(guó)家“十二五”科技重大專項(xiàng)（2014ZX10002002003）；2014年廣東省自然科學(xué)基金（408192444036）

510600廣州，解放軍第四五八醫(yī)院全軍肝病中心（楊富強(qiáng)、饒桂榮）（楊富強(qiáng)、饒桂榮為并列第一作者）

楊富強(qiáng)，E-mail:yangfq23@163.com