華蟾素膠囊聯(lián)合化療治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的效果及對(duì)免疫功能的影響

曾世彬 徐焱堯 李鷹飛

【摘要】 目的：觀察華蟾素膠囊聯(lián)合TX方案化療治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的效果和對(duì)免疫功能的影響。

方法：回顧性分析2015年6月-2018年9月本院收治的106例乳腺癌患者的臨床資料，根據(jù)治療方法不同分為對(duì)照組52例和觀察組54例。對(duì)照組采用多西他賽聯(lián)合卡培他濱片治療，觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合華蟾素膠囊治療。兩組患者化療4個(gè)療程后行影像學(xué)檢查評(píng)價(jià)療效，并在治療前后抽取兩組患者外周血檢測(cè)細(xì)胞因子水平及免疫功能變化。結(jié)果：治療后，觀察組DCR、ORR均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。觀察組治療后血清IL-2水平明顯高于治療前，IL-6水平顯著低于治療前;對(duì)照組治療后血清IL-2水平明顯低于治療前，IL-6水平顯著高于治療前（P<0.05）。觀察組治療后血清IL-2明顯高于對(duì)照組，而IL-6水平顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。與治療前比較，觀察組治療后CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯升高，而CD8+細(xì)胞水平顯著下降，CD4+/CD8+比值顯著升高（P<0.05）。對(duì)照組治療后CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值均顯著低于觀察組，而CD8+水平顯著高于觀察組（P<0.05）。治療后，觀察組DCR亞組CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯高于對(duì)照組的DCR亞組，CD8+細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組的DCR亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：華蟾素膠囊聯(lián)合TX方案化療可有效提高轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的臨床效果，增強(qiáng)免疫功能。

【關(guān)鍵詞】 華蟾素膠囊; 轉(zhuǎn)移性乳腺癌; 免疫功能

【Abstract】 Objective：To observe the efficacy of Cinobufotalin Capsules combined with TX regimen in the treatment of metastatic breast cancer（MBC）and its effects on immune function.Method：Clinical data of 106 breast cancer patients admitted to our hospital from June 2015 to September 2018 were retrospectively analyzed，according to different treatment methods，the patients were divided into control group（n=52）and observation group（n=54）.The control group was treated with Docetaxel combined with Capecitabine Tablets，and the observation group was treated with Cinobufotalin Capsules on the basis of control group.Imaging examination was performed after 4 courses of chemotherapy in the two groups to evaluate the efficacy，and peripheral blood samples of the two groups were taken before and after treatment to detect cytokine levels and immune function changes.Result：After treatment，DCR and ORR in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）.After treatment，the level of serum IL-2 in the observation group was significantly higher than that before treatment，and the level of IL-6 was significantly lower than that before treatment;after treatment，the level of serum IL-2 in the control group was significantly lower than that before treatment，and the level of IL-6 was significantly higher than that before treatment（P<0.05）.After treatment，the level of serum IL-2 in the observation group was significantly higher than that in the control group，while the level of IL-6 in the observation group was significantly lower than that in the control group（P<0.05）.Compared with before treatment，the levels of CD3+，CD4+，NK cells in the observation group increased significantly after treatment，while the levels of CD8+ decreased significantly，and the ratio of CD4+/CD8+ increased significantly（P<0.05）.After treatment，the levels of CD3+，CD4+，NK cells and the ratio of CD4+/CD8+ in the control group were significantly lower than those in the observation group，while the level of CD8+ was significantly higher than that in the observation group（P<0.05）.After treatment，the levels of CD4+ and NK cells in the DCR subgroup of the observation group were significantly higher than those in the DCR subgroup of control group，and the level of CD8+ cell was significantly lower than that in the DCR subgroup of control group，with statistically significant differences（P<0.05）.

Conclusion：Cinobufotalin Capsules combined with TX regimen chemotherapy can effectively improve the clinical efficacy and enhance immune function of patients with MBC.

【Key words】 Cinobufotalin Capsules; Metastatic breast cancer; Immune function

First-authors address：The First Peoples Hospital of Fuzhou，F(xiàn)uzhou 344000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.17.001

乳腺癌是威脅中國婦女健康最常見的惡性腫瘤之一[1]，根據(jù)中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析，乳腺癌位居女性惡性腫瘤發(fā)病率首位，死亡率位居第5位，且發(fā)病率逐年升高[2-3]。盡管乳腺癌治療方案不斷規(guī)范化及多學(xué)科綜合治療，但是5年內(nèi)仍有20%～60%乳腺癌患者發(fā)生轉(zhuǎn)移，大部分轉(zhuǎn)移性乳腺癌（metastatic breast cancer，MBC）患者難以治愈，平均生存時(shí)間為2～3年[4]。近年來研究表明，華蟾素的藥理作用是通過抑制腫瘤細(xì)胞的生長、誘導(dǎo)其凋亡、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等多方面發(fā)揮其抗腫瘤作用[5]。華蟾素與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用在非小細(xì)胞肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤治療中可以提高效果，減輕毒副反應(yīng)[6-8]，但在乳腺癌的臨床應(yīng)用文獻(xiàn)報(bào)道較少。本研究采用華蟾素聯(lián)合化療治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者，觀察聯(lián)合用藥療效，并探索其抗腫瘤機(jī)制?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2015年6月-2018年

9月本院收治的106例乳腺癌患者的臨床資料，

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)及影像學(xué)檢查確診轉(zhuǎn)移性乳腺癌（Ⅳ期）[9];②具有CT/MRI可測(cè)量可評(píng)估的靶病灶;③所有患者ECOG PS評(píng)分≤2分，預(yù)計(jì)生存時(shí)間>3個(gè)月;④心、肝、腎等重要臟器功能無明顯異常;⑤依從性好。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：

①對(duì)試驗(yàn)相關(guān)藥物過敏或有用藥禁忌證;②轉(zhuǎn)移至腦或中樞神經(jīng)系統(tǒng)且未得到控制者;③妊娠期及哺乳期婦女;④精神異常及有乙醇或其他藥物濫用者;

⑤近期內(nèi)服用過免疫調(diào)節(jié)劑等對(duì)研究指標(biāo)有影響的藥物。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 治療方法 對(duì)照組采用TX方案化療：多西他賽注射液（生產(chǎn)廠家：齊魯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20041128，規(guī)格：2 mL∶40 mg）聯(lián)合卡培他濱片（生產(chǎn)廠家：齊魯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20133361，規(guī)格：500 mg×12片）治療，具體用法：多西他賽75 mg/m2靜脈滴注，d1，卡培他濱片1 000 mg/m2，口服d1～14，早、晚餐后30 min口服，21 d為1個(gè)療程;觀察組在對(duì)照組化療基礎(chǔ)上，同時(shí)予華蟾素膠囊（生產(chǎn)廠家：陜西東泰制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z20050846，規(guī)格：250 mg×20粒）口服，500 mg/次，3次/d，持續(xù)口服3個(gè)月。兩組患者均化療4個(gè)療程。

1.3 觀察指標(biāo) （1）IL-2、IL-6檢測(cè)：在治療前和完成4個(gè)療程化療后分別抽取兩組患者清晨空腹外周靜脈血5 mL，應(yīng)用離心機(jī)（美國Beckman公司），3 000 r/min，離心10 min，收集離心管上層的血清，-20 ℃保存待檢。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒均由武漢博士德生物技術(shù)開發(fā)公司提供，嚴(yán)格按試劑說明書方法進(jìn)行測(cè)定。（2）免疫細(xì)胞檢測(cè)。治療前和完成4個(gè)療程化療后分別采集患者外周靜脈血2 mL加入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，加入20 μL鼠抗人CD3、CD4、CD8、NK直標(biāo)熒光抗體，混勻，閉光條件下孵育30～40 min，4 ℃、3 000 r/min，離心10 min，沖洗、過濾后加入PBS緩沖液400 μL，采用流式細(xì)胞儀（美國 BD公司）進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 兩組均化療4個(gè)療程后影像學(xué)檢查評(píng)估療效，根據(jù)實(shí)體瘤評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)RECIST 1.1評(píng)價(jià)療效。（1）完全緩解（complete response，CR）：所有目標(biāo)病灶消失，任何病理性淋巴結(jié)（無論是否為目標(biāo)病灶）短軸值必須<10 mm;（2）部分緩解（partial response，PR）：以臨界直徑的總和為參照，所有目標(biāo)病灶直徑的總和至少減小30%;（3）疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）：以目標(biāo)病灶半徑的總和最小值為參照，既達(dá)不到緩減標(biāo)準(zhǔn)，也達(dá)不到惡化標(biāo)準(zhǔn)者;（4）疾病進(jìn)展（progress disease，PD）：以目標(biāo)病灶直徑總和最小值為參照（包括最小值等于臨界值），所有目標(biāo)病灶直徑總和至少增加20%[10]。另外，直徑總和增加的絕對(duì)值必須>5 mm（出現(xiàn)新的病灶也可認(rèn)為是惡化）。客觀緩解率（overall response rate，ORR）=（CR+PR）/總例數(shù)×100%，疾病控制率（disease control rate，DCR）=（CR+PR+SD）/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 對(duì)照組52例，觀察組

54例，均為女性，病理類型：浸潤性導(dǎo)管癌89例，浸潤性小葉癌10例、髓樣癌4例，腺樣囊性癌

2例，黏液癌1例。兩組患者的年齡、PS評(píng)分、月經(jīng)狀態(tài)、ER/PR狀態(tài)、三陰型、既往化療情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組患者近期療效比較 治療后，觀察組DCR為75.93%，顯著高于對(duì)照組的55.77%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.799，P=0.028）;觀察組ORR為62.96%，顯著高于對(duì)照組的40.38%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=5.409，P=0.020）。見表2。

2.3 兩組患者治療前后外周血細(xì)胞因子比較 治療前，兩組血清IL-2、IL-6水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療后，觀察組血清IL-2水平明顯高于治療前，IL-6水平顯著低于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組治療后血清中IL-2水平明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;對(duì)照組治療后的IL-6水平與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。觀察組患者治療后血清IL-2水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-4.744，P=0.003），而IL-6水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.941，P=0.008）。

2.4 兩組患者治療前后免疫功能指標(biāo)比較 治療前，兩組免疫功能指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與治療前相比，對(duì)照組患者治療后的CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值均明顯降低，而CD8+水平顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與治療前相比，觀察組患者CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值均明顯升高，而CD8+水平顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療后，對(duì)照組患者CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平和CD4+/CD8+比值均低于觀察組，而CD8+水平明顯高于觀察組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.649、-6.147、-5.878、-3.647、5.003，P=0.013、0.000、0.000、0.009、0.002）。見表4。

2.5 兩組患者治療后免疫功能與療效相關(guān)性分析 兩組患者治療后按療效進(jìn)行亞組分析，分為DCR亞組及PD亞組，對(duì)照組亞組間的CD4+、CD8+、NK細(xì)胞水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;在觀察組中，DCR亞組CD4+細(xì)胞水平明顯高于PD亞組，而CD8+細(xì)胞水平明顯低于PD亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩亞組的NK細(xì)胞水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。觀察組中DCR亞組CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯高于對(duì)照組的DCR亞組（t=-9.568、-2.404，P=0.000、0.027）;觀察組DCR亞組的CD8+細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組DCR亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=23.760，P=0.000）。見表5。

3 討論

化療具有免疫抑制效應(yīng)，對(duì)腫瘤特異性免疫反應(yīng)會(huì)造成嚴(yán)重的影響[11]。蒽環(huán)類及紫杉類藥物是治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的首選藥物[12]，但可誘導(dǎo)心臟毒性的發(fā)生及骨髓功能的損傷[13]。近年來腫瘤學(xué)家研究提出“誘導(dǎo)緩解-強(qiáng)化治療-免疫重建-鞏固治療-免疫恢復(fù)”的多階段治療模式，是希望在最大限度殺滅腫瘤細(xì)胞之后能恢復(fù)患者免疫功能，使機(jī)體免疫細(xì)胞能殺滅殘留的腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治愈腫瘤的作用，因此通過優(yōu)化治療策略，以重建與恢復(fù)免疫功能，是近年來腫瘤研究領(lǐng)域焦點(diǎn)之一和有待攻克的研究課題。

祖國醫(yī)學(xué)在調(diào)動(dòng)機(jī)體的抗病能力，增強(qiáng)免疫力，減輕副作用方面，有著獨(dú)特的長處。華蟾素主要成分蟾蜍毒素、蟾蜍色胺具有一定抗腫瘤作用。有研究表明，在腫瘤綜合治療中，華蟾素聯(lián)合化療可以增效減毒，協(xié)同提高患者的生活質(zhì)量，延長生存期[6-8，14]。

本研究結(jié)果顯示，采用華蟾素聯(lián)合TX方案治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌，較單純化療顯著提高了臨床獲益，其DCR及ORR明顯升高，亦證實(shí)華蟾素具有抗腫瘤作用。

抗腫瘤免疫治療策略是逆轉(zhuǎn)腫瘤逃避免疫檢測(cè)和排斥反應(yīng)的耐受狀態(tài)[15]，其中細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤的主要免疫機(jī)制，主要是通過T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等體內(nèi)的免疫活性細(xì)胞完成的。其中NK細(xì)胞毒性無MHC限制，不依賴抗體即可殺傷腫瘤細(xì)胞，可抑制乳腺癌腫瘤干細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散[16]，是機(jī)體防御腫瘤的天然屏障。T淋巴細(xì)胞不僅是細(xì)胞

免疫的效應(yīng)細(xì)胞，而且還是重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞作為機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫和體液免疫的重要調(diào)節(jié)者存在著一定的平衡關(guān)系，是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要因素[17]。IL-2可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，增強(qiáng)T、B淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答、NK細(xì)胞功能及單核細(xì)胞的吞噬作用。IL-6可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤的生長，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)系[18]。高水平的IL-6與乳腺癌患者腫瘤負(fù)荷，體力狀況相關(guān)，是預(yù)后不良的生物標(biāo)志物[19]。本研究對(duì)照組采用TX方案4周期化療后，IL-2明顯降低，IL-6明顯升高，對(duì)照組患者CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯降低，而CD8+水平顯著升高，CD4+/CD8+比值明顯下降，提示T細(xì)胞免疫功能受損;但在觀察組采用華蟾素聯(lián)合化療后，IL-2明顯升高，IL-6明顯降低，CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯升高，而CD8+細(xì)胞顯著下降，CD4+/CD8+明顯升高，提示華蟾素通過升高IL-2水平增強(qiáng)免疫功能，降低IL-6水平，使受損的免疫功能得到恢復(fù)與增強(qiáng)，與既往文獻(xiàn)[7，20]研究相似。

對(duì)兩組患者DCR亞組分析顯示，觀察組DCR亞組CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯升高，CD8+細(xì)胞水平明顯降低，提示觀察組應(yīng)用華蟾素治療增強(qiáng)了機(jī)體免疫殺傷力。

綜上所述，華蟾素聯(lián)合TX化療能夠有效提高轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的臨床療效，調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞水平，增強(qiáng)免疫功能。但是本研究樣本量較小，缺乏對(duì)患者遠(yuǎn)期療效的隨訪觀察，因此還有待于臨床試驗(yàn)進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1]陳萬青，李賀，孫可欣，等.2104年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中華腫瘤雜志，2108，40（1）：5-13.

[2]李賀，鄭榮壽，張思維，等.2014年中國女性乳腺癌發(fā)病與死亡分析[J].中華腫瘤雜志，2018，40（3）：166-170.

[3] Siegel R L，Miller K D，Jemal A.Cancer statistics，2017[J].CA Cancer J Clin，2017，67（1）：7-30.

[4]徐瑞華，姜文奇，管忠震.臨床腫瘤內(nèi)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：264-266.

[5] Kai S，Lu J H，Hui P P，et al.Pre-clinical evaluation of cinobufotalin as a potential anti-lung cancer agent[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，452（3）：768-774.

[6]徐冬梅，劉麗娟.華蟾素聯(lián)合卡培他濱治療老年胃癌的療效觀察[J].實(shí)用癌癥雜志，2015，30（3）：405-407.

[7]陳彬.華蟾素聯(lián)合GP方案治療中晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床療效和抗腫瘤機(jī)理[J].實(shí)用癌癥雜志，2016，31（2）：224-227.

[8]東麗，李卉，李剛，等.華蟾素膠囊聯(lián)合XELOX方案治療中晚期結(jié)直腸癌臨床療效觀察[J].海峽藥學(xué)，2017，29（10）：169-171.

[9]中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌專業(yè)委員會(huì).中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范（2017年版）[J].中國癌癥雜志，2017，27（9）：695-720.

[10] Eisenhauer E A，Therasse P，Boqaerts J，et al.New response evaluation criteria in solid tumours：revised RECIST guideline（version 1.1）[J].Eur J Cancer，2009，45（2）：228-247.

[11] Wang W H，Xu H Y，Zhao Z M，et al.Dynamic and significant changes of T-cell subgroups in breast cancer patients during surgery and chemotherapy[J].Int Immunopharmacology，2018，65：279-283.

[12] Liu L，Chen F，Zhao J，et al.Correlation between overall survival and other endpoints in metastatic breast cancer with second- or third-line chemotherapy：literature-based analysis of 24 randomized trials[J].Bulletin du Cancer，2016，103（4）：336-344.

[13]石遠(yuǎn)凱，巴一，馮繼鋒，等.中國蒽環(huán)類藥物特性專家共識(shí)[J].中國腫瘤臨床，2018，45（3）：109-112.

[14]袁梅美，惠起源.華蟾素抗惡性腫瘤的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，11（2）：44-46.

[15] Stambrook P J，Maher J，F(xiàn)arzaneh F.Cancer Immunotherapy：Whence and Whither[J].Molecular Cancer Research，2017，15（6）：635-650.

[16] Tallerico R，Conti L，Lanzardo S，et al.NK cells control breast cancer and related cancer stem cell hematological spread[J].Oncoimmunology，2017，23，6（3）：e1284718.

[17] Chatten C.Immunoregulatory cells of the tumor microenvironment[J].Frontiers in Bioscience，2010，15（1）：291-308.

[18] Dethlefsen C，H?jfeldt G，Hojman P.The role of intratumoral and systemic IL-6 in breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat，2013，138（3）：657-664.

[19] Lin S，Gan Z，Han K，et al.Interleukin-6 as a prognostic marker for breast cancer：a meta-analysis[J].Tumori，2015，101（5）：535-541.

[20]陳建英，胡先全，黃三雄，等.華蟾素膠囊聯(lián)合GP方案對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2016，54（14）：12-15.

（收稿日期：2019-02-18） （本文編輯：張爽）