不同炮制方法對黨參化學(xué)成分及產(chǎn)品質(zhì)量的影響

陳 皓, 王 瑞, 董敬遠(yuǎn), 邢 浩, 賈明璐, 陳雪平

(漯河市中心醫(yī)院,河南 漯河462000)

黨參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.為臨床常用補(bǔ)益中藥材,性味甘、平,主歸肺脾二經(jīng),具有補(bǔ)中益氣、滋脾養(yǎng)肺等效果,臨床多用于脾胃虛弱、體倦無力、口渴少食、中氣不足、潤肺化痰、解毒平肝等［1-2］。關(guān)于黨參的歷史記載較多,《綱目拾遺》 稱其具有益肺氣、治肺虛、補(bǔ)血等作用, 《本草從新》 中提到其“補(bǔ)中益氣,和脾胃,除煩渴”［3］。近年來研究顯示,黨參在提高機(jī)體免疫力、增強(qiáng)機(jī)體造血功能、調(diào)節(jié)機(jī)體腸胃蠕動(dòng)、改善血液循環(huán)等方面具有良好效果,而且含有多種人體必需的氨基酸及微量元素,可作為人參理想的替代品［4］,2010 年版《中國藥典》 中共收錄黨參、素花黨參、川黨參3 個(gè)品種,稱其“補(bǔ)中益氣,健脾益肺,用于脾肺虛弱,氣短心悸,食少便溏,虛喘咳嗽,內(nèi)熱消渴”。中藥炮制是中藥材應(yīng)用于臨床治療前或制備成各種劑型前需要進(jìn)行的加工過程,有助于降低甚至消除藥物的烈性、毒性和不良反應(yīng),增強(qiáng)藥物作用,提高臨床療效,同時(shí)除去藥材中的雜質(zhì)和非藥用部分,也有助于純凈藥材、保證質(zhì)量及用量準(zhǔn)確［5］。文獻(xiàn)中記載的黨參炮制方法較多,本實(shí)驗(yàn)旨在研究不同炮制方法對黨參化學(xué)成分及藥材質(zhì)量的影響,以期規(guī)范該藥材炮制工藝,提高其安全性及有效性,發(fā)揮醫(yī)用價(jià)值。

1 材料

Agilent 1200 高效液相色譜儀(美國Agilent 公司)；CQ-250 超聲波清洗器(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠)；Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm,昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化儀器廠)；MP17C-KE 微波爐(美的公司)。

黨參由浙江省永康醫(yī)藥公司提供 (批號20120909),經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)系鑒定教研室專家鑒定為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的干燥根。黨參炔苷對照品(批號136085375,江西本草天工科技有限公司)。冰醋酸、乙腈、乙醇等試劑為色譜純(美國Sigma公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制工藝

2.1.1 米制 將米置于鍋內(nèi),用文火加熱,噴灑純凈水少許,以米粘貼于鍋上為宜,待煙冒出時(shí)即加入切好的黨參段,翻炒至微黃色后取出放凉,將米粒去除。每100 kg 黨參使用20 kg 米。

2.1.2 酒制 將黨參置于米酒中拌勻,置于熱鍋中炒制,以近乎干燥為宜,取出放凉。每100 kg黨參使用1.5 kg 米酒。

2.1.3 土制 取灶心土置于熱鍋內(nèi)炒制,以將土炒松為宜,后加入黨參片炒制至有香氣逸出,取出將土篩去后放凉。每100 kg 黨參使用30 kg 灶心土。

2.1.4 蜜制 取蜜用開水稀釋后與黨參片一同加入鍋中拌勻,文火加熱,炒制棕黃色且不粘手為宜,取出放凉。每100 kg 黨參使用20 kg 蜜。

2.1.5 炒制 將黨參片或黨參段置于鍋內(nèi),文火炒制,以黨參變?yōu)樽攸S色、表面略有焦斑為宜,取出放凉［6］。

2.2 觀察指標(biāo) 不同炮制方法對黨參中多糖、黨參炔苷含有量及產(chǎn)品質(zhì)量的影響。

2.3 檢測方法

2.3.1 黨參炔苷含有量

2.3.1.1 色譜條件 Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流動(dòng)相乙腈-1%冰醋酸；體積流量1 mL/min；柱溫25 ℃；檢測波長267 nm。

2.3.1.2 對照品溶液制備 準(zhǔn)確稱量10 mg 干燥至恒定質(zhì)量的黨參炔苷對照品,與流動(dòng)相一同加入10 mL 量瓶中,定容,即得(1 mg/mL),待用。

2.3.1.3 樣品處理 將黨參磨成細(xì)粉,準(zhǔn)確稱取5.000 g,加入50 mL 50%酒精,于60 ℃水浴鍋中水浴處理30 min 后微波爐加熱5 min,濾過,濾液減壓回流至干,加入10 mL 量瓶中,流動(dòng)相定容后備用。

2.3.1.4 線性關(guān)系考察 依次取配制好的對照品溶 液 1.0、 5.0、 10.0、 20.0、 25.0 μL, 在“2.3.1.1” 項(xiàng)條件下進(jìn)樣。 以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),樣品量為橫坐標(biāo)(X) 進(jìn)行回歸,得方程Y＝320.22X+9.365 (r ＝ 0.999 8), 在 0.02 ～0.50 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.1.5 精密度試驗(yàn) 將對照品溶液連續(xù)3 d 在“2.3.1.1” 項(xiàng)條件下進(jìn)樣6 次,測得黨參炔苷峰面積RSD 0.03%,表明儀器精密度良好。

2.3.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將黨參制成供試品溶液,每隔1 h 在“2.3.1.1” 項(xiàng)條件下進(jìn)樣,連續(xù)6 次,測得黨參炔苷峰面積RSD 0.08%,表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.3.1.7 樣品含有量測定 對不同炮制方法下黨參進(jìn)行分析,計(jì)算黨參炔苷含有量［7］。

2.3.2 多糖含有量

2.3.2.1 線性關(guān)系考察 準(zhǔn)確稱取葡萄糖對照品12.1 mg 后加水溶解,并于100 mL 量瓶中定容至0.121 mg/mL, 吸 取 0、 0.2、 0.4、 0.5、 0.6、0.7、0.75 mL 于量筒中,蒸餾水定容至1 mL,加入2.0 mL 5%苯酚溶液后搖勻,滴加5.5 mL 濃硫酸,搖勻后置于60 ℃水浴鍋內(nèi)30 min,在490 nm波長處測定吸光度。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X),吸光度為縱坐標(biāo)(A) 進(jìn)行回歸,得方程為A ＝0.008 6X+0.014 5(r ＝0.999 1),在0.000 ～0.011 mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2.2 多糖含有量測定 準(zhǔn)確稱取干燥至恒定質(zhì)量的樣品23.5 mg,加水溶解,置于100 mL 量瓶中定容,吸取0.2 mL,按“2.3.2.1” 項(xiàng)下方法測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到多糖質(zhì)量濃度,計(jì)算含有量［8］。

2.4 檢測結(jié)果

2.4.1 對黨參質(zhì)量、含水量及黨參炔苷含有量的影響 含水量測定選擇甲苯法,精確稱取不同炮制方法所得黨參50.0 g 進(jìn)行蒸餾,測定其含水量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同炮制方法對黨參含水量及黨參炔苷含有量的影響不同,炮制后黨參質(zhì)量及含水量依次為蜜制＞米制＞酒制＞土制＞炒制,黨參炔苷含有量依次為酒制＞米制＞炒制＞蜜制＞土制,見表1。

2.4.2 對黨參中多糖含有量的影響 不同炮制方法對黨參中多糖含有量具有較大影響,依次為酒制＞蜜制＞炒制＞土制＞米制。與生品比較,酒制和蜜制方式可增加該成分含有量,而炒制、土制、米制可導(dǎo)致其出現(xiàn)不同程度的降低,見表2。

3 討論

黨參炔苷作為黨參藥理作用最關(guān)鍵的化合物之一,是炮制過程中標(biāo)志性檢測成分,通常以其作為衡量不同產(chǎn)地黨參質(zhì)量的重要指標(biāo)［9］,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)黨參炔苷對機(jī)體胃黏膜的保護(hù)具有重要作用［10］。不同產(chǎn)地黨參中黨參炔苷含有量具有較大差異,黃健等［11］測定山西五臺山黨參炔苷含有量為10.62%, 遼寧黨參為2.249%, 甘肅黨參為2.489%；時(shí)軍等［12］對來自內(nèi)蒙古、云南、貴州等地的9 種黨參檢測發(fā)現(xiàn),黨參炔苷含有量介于0.187～1.174 mg/g 之間,其中云南福貢產(chǎn)者最低,甘肅岷縣產(chǎn)者最高,均表明其受產(chǎn)地、種植環(huán)境等的影響較大。

表1 不同炮制方法對黨參質(zhì)量、含水量及黨參炔苷含有量的影響Tab.1 Effects of different processing methods on C.pilosula quality，water content and lobetyolin content

表2 不同炮制方法對多糖含有量的影響Tab.2 Effects of different processing methods on the content of polysaccharides

研究表明,黨參在增強(qiáng)機(jī)體造血功能、改善機(jī)體腸胃運(yùn)動(dòng)、抗缺氧、抗血栓、改善血脂、提高機(jī)體免疫力、改善機(jī)體血液系統(tǒng)循環(huán)水平等方面均具有較為理想的臨床效果［13］。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),向戊四氮、硝酸士的寧處理后的小鼠腹腔注射一定劑量的黨參后,小鼠自由活動(dòng)次數(shù)明顯減少,驚厥及死亡的時(shí)間顯著延長、例數(shù)明顯降低［14］；Fleischer 等［15-16］報(bào)道,黨參水溶性、脂溶性提取所得產(chǎn)物均對家兔中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的抑制作用,此外,黨參總堿還能有效緩解東莨菪堿對家兔記憶功能的損傷作用,對因東莨菪堿引起的家兔乙酰膽堿濃度下降具有抵抗作用。邱亞磊等［17］實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,黨參對提高家兔機(jī)體血紅蛋白水平及紅細(xì)胞數(shù)量具有積極意義,并且未發(fā)現(xiàn)溶血癥狀；竇霞等［18］發(fā)現(xiàn),給予大鼠一定劑量的黨參后機(jī)體內(nèi)血紅蛋白水平明顯升高,與注射生理鹽水組具有明顯差異,進(jìn)一步研究還發(fā)現(xiàn)黨參對大鼠血紅蛋白水平的調(diào)節(jié)作用與其對脾臟的刺激效果有關(guān)；目前臨床常將丹參與黨參聯(lián)合應(yīng)用于心絞痛及冠心病患者的治療,對改善患者機(jī)體微循環(huán)、抑制機(jī)體血小板聚集及紅細(xì)胞硬化、避免機(jī)體血栓形成等均具有積極意義［19］。

黨參的水提醇沉溶液對大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍具有抵抗作用,對應(yīng)激性、幽門結(jié)扎、慢性乙醇性胃潰瘍具有較好的預(yù)防及治療效果,且給藥量在10.0～80.0 g/kg 時(shí)具有明顯的量效關(guān)系［20］。黨參多糖對提高大鼠胃黏膜內(nèi)PGE2a 水平具有積極意義,這也表明黨參能增強(qiáng)大鼠胃黏膜的屏障作用,提高胃黏膜細(xì)胞保護(hù)效果,抵抗大鼠胃黏膜損傷［21］。

研究表明,黨參配伍靈芝、黃芪對增強(qiáng)機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能的效果超越卡介苗,機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能增強(qiáng)可有效提高機(jī)體抗病能力,這與中醫(yī)治療“氣虛” 相吻合,從而達(dá)到“扶正” 效果［22］。鄒利等［23］通過體外培養(yǎng)人體淋巴細(xì)胞發(fā)現(xiàn),高濃度黨參可促進(jìn)人體淋巴細(xì)胞的有絲分裂,低濃度時(shí)則表現(xiàn)為抑制作用,表明它對淋巴細(xì)胞有絲分裂過程的影響。

不同炮制方法可導(dǎo)致中藥成分發(fā)生不同的質(zhì)和量變化,同時(shí)改變具有生理活性及臨床治療作用的成分,從而導(dǎo)致其臨床效果的差異,炮制加工的方式、時(shí)間、環(huán)境溫濕度、輔料的選擇及用量等均會對中藥材有效成分的含有量產(chǎn)生影響［24-25］。中藥炮制的目的主要包括： (1) 通過合理的炮制方法促進(jìn)其有效成分的溶出, 增強(qiáng)臨床治療效果；(2) 通過炮制加工降低中藥材毒性,以達(dá)到入藥要求； (3) 改變中藥材成分,突出或加強(qiáng)中藥材某一方面的作用； (4) 通過炮制加工降低中藥材儲存難度,延長儲存時(shí)間。中藥材炮制加工是以中醫(yī)藥理論為依據(jù),并結(jié)合藥材本身性質(zhì)及臨床辨證施治要求而施行的一項(xiàng)不可或缺的制藥技術(shù),只有在繼承傳統(tǒng)炮制技術(shù)及理論的基礎(chǔ)上結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)制藥技術(shù)進(jìn)行整理總結(jié),制定科學(xué)規(guī)范的炮制質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn),探索并改進(jìn)炮制工藝,才能有效推動(dòng)相關(guān)技術(shù)的發(fā)展,提高臨床用藥的安全性及治療的有效性［26-28］。

研究發(fā)現(xiàn),不同炮制方法對黨參質(zhì)量、含水量、黨參炔苷含有量及多糖含有量等均具有不同程度的影響,炮制后黨參質(zhì)量出現(xiàn)不同程度的降低,含水量變化也較為明顯,依次為蜜制＞米制＞酒制＞土制＞炒制；黨參炔苷作為黨參重要成分之一,含有量越高則表明黨參質(zhì)量越好,治療效果越佳,經(jīng)炮制后其提取率明顯升高,依次為酒制＞米制＞炒制＞蜜制＞土制。此外,酒炙及蜜制加工后黨參中多糖含有量較生品明顯升高,其原因可能與酒精可增加該成分溶解度有關(guān)；蜜制一方面可增加中藥材中多糖含有量,另一方面也不排除蜜作為輔料對該成分含有量的影響,這與高歡等［29］觀點(diǎn)一致。

結(jié)合現(xiàn)有文獻(xiàn)可知,蜜制黨參可增強(qiáng)中藥材補(bǔ)中益氣的效果；米制黨參焦香味較為濃厚,有助于增強(qiáng)中藥材益氣健脾的功效；土制黨參和胃健脾效果明顯。因此,臨床用藥時(shí)不僅要考慮到不同炮制方法對黨參化學(xué)成分的影響,還應(yīng)關(guān)注其療效,根據(jù)治療目的選擇合適的炮制品。