1 日齡雛雞免疫雞傳染性喉氣管炎重組雞痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究

高曉磊，韓明寶，劉思桐，趙麗霞，朱秀同，劉浩，郁宏偉，謝康

（1.瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司 河北保定 071000；2.天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司 天津 300308）

雞傳染性喉氣管炎（ILT）是由傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）引起的雞的一種急性上呼吸道傳染病，于1925 年首發(fā)于美國洛島，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重危害。疫苗接種是目前預(yù)防和控制雞傳染性喉氣管炎的最有效的措施，目前國內(nèi)外普遍采用弱毒疫苗防治本病，弱毒疫苗免疫效果較好，但其免疫原性與毒力呈正相關(guān)性，即弱毒疫苗株還殘存著毒力，病毒在自免的同時(shí)會(huì)導(dǎo)致由免疫雞向易感雞的傳播。因此弱毒疫苗僅限于流行地區(qū)使用并應(yīng)嚴(yán)格控制免疫劑量，清凈雞群一旦發(fā)生本病將引起ILT 暴發(fā)，導(dǎo)致重大經(jīng)濟(jì)損失，這是ILT 防治中存在的主要問題[1]?；蚬こ桃呙缫蚱浒踩院谩⒍靖弊饔眯〉葍?yōu)點(diǎn)成為ILT 疫苗研究的熱點(diǎn)[2]。

gB 基因是ILTV 的主要保護(hù)性抗原，gB 蛋白是病毒感染所必需的主要免疫糖蛋白。Tong 等[3]構(gòu)建了表達(dá)傳染性喉氣管炎病毒gB 基因重組雞痘病毒的疫苗，其可以保護(hù)SPF 雞和商品雞抵抗傳染性喉氣管炎強(qiáng)毒的攻擊。本研究的目的是考察雞傳染性喉氣管炎重組雞痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和刺種兩種不同免疫途徑免疫1 日齡雛雞后的安全性和效力，為擴(kuò)大重組疫苗臨床應(yīng)用提供一定的依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 疫苗

雞傳染性喉氣管炎重組雞痘病毒基因工程疫苗，180102 批，效價(jià)為1.1×104PFU/羽份。

1.2 攻毒用標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒

FPV 102 株，購自中國獸藥監(jiān)察所，攻毒用毒液效價(jià)為106.30EID50/0.2mL，攻毒時(shí)作1,000 倍稀釋，羽毛囊接種；ILTV WG 株，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供，攻毒用毒液效價(jià)為105.9EID50/0.2mL，攻毒時(shí)作2,000 倍稀釋，喉囊內(nèi)接種，0.4mL/羽。

1.3 免疫試驗(yàn)用雞

1 日齡SPF 白色來杭雞80 只，由瑞普公司質(zhì)量管理部提供，試驗(yàn)期間飼養(yǎng)于瑞普公司試驗(yàn)動(dòng)物房負(fù)壓隔離器中，其中20 只用于安全性試驗(yàn)，60 只用于效力試驗(yàn)。

1.4 安全性試驗(yàn)

20 只SPF 雞隨機(jī)分為2 組，每組10 只。第一組進(jìn)行頸部皮下注射，每只雞接種0.1mL（10 個(gè)免疫劑量）。第二組，皮下刺種0.1mL（10 個(gè)免疫劑量），隔離飼養(yǎng)，接種后觀察雞群的精神狀態(tài)以及局部的反應(yīng)情況。

1.5 效力試驗(yàn)

將60只SPF雞隨機(jī)分為6組，4組免疫，2組對(duì)照，每組10只。免疫1、3 組頸部皮下注射0.1mL（1 羽份）180102 批疫苗，免疫2、4 組皮下刺種0.01mL（1 羽份）180102 批疫苗，第5～6 組為對(duì)照。

免疫后28d，試驗(yàn)1、2 組和對(duì)照1 組分別用1,000 倍稀釋的ILTV WG 株（喉囊內(nèi)接種）攻擊，0.4mL/只。試驗(yàn)3、4 組和對(duì)照2 組分別用1,000 倍稀釋的FPV 102 株（羽毛囊接種）攻擊，每只0.4mL/只。觀察20d，每天兩次觀察雞群，記錄發(fā)病和死亡情況。所有雞只在免疫前、攻毒前和攻毒后均逐只進(jìn)行稱重。

2 結(jié)果

2.1 安全性試驗(yàn)

兩組雞在試驗(yàn)期內(nèi)無任何全身反應(yīng)，精神食欲不受影響，發(fā)育正常，刺種組雞接種4d 后接種部位均發(fā)生痘腫，5d 腫脹厚度達(dá)最大，此后逐漸消退。重組疫苗皮下注射或皮下刺種1 日齡試驗(yàn)雞，均未出現(xiàn)嚴(yán)重臨床反應(yīng)，重組疫苗對(duì)1 日齡雛雞是安全的。

表1 重組疫苗免疫1 日齡雛雞的攻毒保護(hù)

2.2 效力試驗(yàn)

對(duì)重組疫苗免疫1 日齡雛雞的攻毒保護(hù)試驗(yàn)表明（表1），皮下注射方式免疫后28d，免疫雞群可獲得對(duì)ILTV WG 株和FPV 102 株強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)，保護(hù)率為80%和70%。皮下刺種方式免疫后28d，免疫雞群可獲得對(duì)ILTV WG 株和FPV 102 株強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)，保護(hù)率為90%和70%。

3 討論

疫苗接種是目前預(yù)防和控制雞傳染性喉氣管炎的最有效措施，弱毒活疫苗、滅活疫苗、基因工程疫苗對(duì)本病均有不同程度的保護(hù)作用，國內(nèi)外普遍采用弱毒疫苗防治傳染性喉氣管炎。弱毒疫苗推薦免疫日齡一般在4 周齡以上，即便如此，使用后也會(huì)造成一定的病理損傷，如不同程度的結(jié)膜炎等，病毒在雞體內(nèi)傳代和傳播的過程中會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)[4]，這些都決定了弱毒疫苗主要應(yīng)用于ILT 的流行地區(qū)。我國養(yǎng)殖水平差異較大，養(yǎng)殖環(huán)境復(fù)雜，這使得ILT 控制變得錯(cuò)綜復(fù)雜，規(guī)模化雞場(chǎng)中發(fā)病日齡不斷提前，唯一的解決辦法是使用更為安全可靠的疫苗。

前面的研究已經(jīng)證明，表達(dá)傳染性喉氣管炎病毒gB 基因的重組雞痘病毒對(duì)1 周齡雛雞是安全的[1]，且免疫效果非常理想。但1 日齡雛雞的安全性和效力卻未有報(bào)道。本研究中安全性試驗(yàn)表明雞傳染性喉氣管炎重組雞痘病毒基因工程疫苗以10 羽份劑量皮下注射或皮下刺種1 日齡試驗(yàn)雞不會(huì)引起明顯的臨床反應(yīng)，即重組疫苗對(duì)1 日齡雛雞是安全的。效力試驗(yàn)結(jié)果表明，以皮下注射或是以皮下刺種方式免疫1 日齡雛雞，都能經(jīng)受住FPV 或ILTV 強(qiáng)毒的攻擊，免疫組發(fā)病率和病死率均顯著降低，相對(duì)于雞痘傳染性喉氣管炎的預(yù)防效果要更出色一些。

在疫苗使用的過程中，首先要考慮疫苗的安全性和免疫效力，本研究為傳染性喉氣管炎雛雞免疫防治提供了借鑒，為雞傳染性喉氣管炎重組雞痘病毒基因工程疫苗臨床推廣應(yīng)用提供了重要數(shù)據(jù)，具有重大的科學(xué)意義。