2種炮制工藝對(duì)遠(yuǎn)志化學(xué)成分的影響

李鴻飛， 劉 飛 ， 劉兆龍

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊 830000)

遠(yuǎn)志是臨床常用藥，為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志(PolygalatenuifoliaWilld.)或卵葉遠(yuǎn)志(PolygalasibiriaL.)的干燥根[1]。有安神益智、交通心腎功能[2]。臨床上常常用于失眠多夢(mèng)、健忘驚悸等癥狀。傳統(tǒng)認(rèn)為遠(yuǎn)志甘草水制后有減毒增效作用[3]，生遠(yuǎn)志可以引起口舌麻木、腹脹、嘔吐等不良反應(yīng)，而用甘草水制遠(yuǎn)志可以消除以上不良反應(yīng)。所以臨床上應(yīng)用遠(yuǎn)志常需炮制后入藥，而且目前全國各地炮制方法與歷代本草中的記載不盡相同[4]?！吨袊幍洹?015年版中的遠(yuǎn)志炮制品有生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志兩種規(guī)格。在《全國中藥炮制規(guī)范》中[5]除了有生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志，還載有蜜遠(yuǎn)志、朱遠(yuǎn)志等不同炮制品。本實(shí)驗(yàn)中傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)法制遠(yuǎn)志，來自于明代古籍《景岳全書》[6]，原文為“制以甘草湯，浸一宿曬干，炒用”，此法清代也有論述，現(xiàn)按《中國藥典》的炮制方法和傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)炮制方法進(jìn)行比較，考察不同炮制工藝對(duì)遠(yuǎn)志化學(xué)成分的影響[7]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Waters e2695型高效液相色譜儀[美國Waters科技(上海)有限公司]，AG135型電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，L400型臺(tái)式離心機(jī)(湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，UPW-N30UV型超純水儀(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)，SK-3300LH型超聲波清洗儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司) 。

1.3 藥材實(shí)驗(yàn)所用生遠(yuǎn)志(批號(hào)：180301、180501、180601)及甘草(批號(hào)：180501)2018年6月購于新疆玖元堂中藥飲片有限責(zé)任公司，其中遠(yuǎn)志5 kg、甘草1 kg均經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院李永和主任中藥師鑒定，實(shí)驗(yàn)用遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志(PolygalatenuifoliaWilld.)的干燥根，甘草為豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根和根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制方法

2.1.1 《中國藥典》法 取甘草，加適量水煎湯，去渣，加入凈遠(yuǎn)志，用文火煮至湯吸盡，取出，干燥。每100千克遠(yuǎn)志用甘草6 kg。

2.1.2 傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)炮制方法 取甘草，加適量水煎湯，去渣備用，另取凈遠(yuǎn)志，加入適量的甘草水拌勻，潤透至湯液吸盡，置炒鍋中，用文火炒干至顏色加深，表面有焦斑時(shí)取出，攤晾放涼。每100千克遠(yuǎn)志用甘草6 kg。

2.1.3 甘草水的制備[8]取甘草飲片，加入30倍量水浸泡30 min后，煎煮30 min，濾過, 再次加入30倍量水煎煮30 min，濾過,合并濾液，濃縮至凈遠(yuǎn)志的3倍量(藥典法制遠(yuǎn)志)或濃縮至凈遠(yuǎn)志的0.5倍量(傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)法制遠(yuǎn)志)，備用。

2.2 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件[9-10]Shimadzu VP-ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-0.05%磷酸溶液(70∶30)，檢測(cè)波長為210 nm，柱溫為30℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。理論板數(shù)按細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。根據(jù)以上條件，分離效果良好。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品(批號(hào)111849-201303，純度95.3%)適量，然后精密稱定，再加入甲醇，制成每1毫升含有1.037 mg細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的溶液，制備即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取實(shí)驗(yàn)用生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志粉末9個(gè)樣品(全部過三號(hào)篩)各1 g，放入具塞錐形瓶中，然后精密加入70%甲醇溶液50 mL，稱定其重量，超聲處理1 h，放冷以后，稱定其重量，再用70%甲醇溶液補(bǔ)足損失的重量，搖勻后濾過，再精密量取濾液25 mL，置于圓底燒瓶中蒸干，殘?jiān)偌尤?0 mL濃度為10%氫氧化鈉溶液，加熱回流2 h，冷卻以后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4～5，每次加入水飽和正丁醇50 mL并且不斷振搖，連續(xù)提取3次，合并正丁醇溶液，蒸干，所得殘?jiān)蛹状歼m量溶解，移至25 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，供試品溶液制備完成。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋配制成濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)樣3次，各進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行測(cè)定。所得細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的峰面積為縱坐標(biāo)Y，其濃度為橫坐標(biāo)X，得回歸方程是：Y=2.306×107X-1.297×106(系數(shù)r=0.999 7)。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品溶液的峰面積與濃度(0.1～1 mg/mL)有較好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取10 μL已制備的對(duì)照品溶液，按照以上色譜條件進(jìn)樣5次進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算所得峰面積的RSD值為0.7%。試驗(yàn)結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取10 μL同一批次制遠(yuǎn)志樣品溶液，按照以上色譜條件，在0、4、8、12和24 h時(shí)進(jìn)樣并進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算所得RSD值為1.2%。試驗(yàn)結(jié)果顯示，樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次制遠(yuǎn)志樣品粉末5份各1 g，按照供試品溶液的制備方法制備，每份溶液精密吸取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的含量，計(jì)算得RSD值為1.3%。結(jié)果表明，本試驗(yàn)方法重現(xiàn)性很好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量(編號(hào)為6)的制遠(yuǎn)志樣品粉末6份，精密稱定各1 g，分別加入等量的細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品溶液，按照供試品溶液的制備方法制得，從制備的每份溶液中精密吸取10 μL進(jìn)樣并按照以上色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算結(jié)果得：細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的平均回收率為98.93%，RSD值為1.7%。見表1。

表1 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷加樣回收率結(jié)果

2.2.9 樣品含量測(cè)定 根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)條件，生遠(yuǎn)志經(jīng)過甘草水炮制后，遠(yuǎn)志中有效成分細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量明顯升高，傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)法炮制遠(yuǎn)志中的化學(xué)成分細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量符合《中國藥典》規(guī)定，見表2、圖1、圖2。

表2 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量/%

圖1 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品

圖2 遠(yuǎn)志樣品HPLC色譜圖

2.3 遠(yuǎn)志酮Ⅲ及3，6′二芥子?；崽堑暮繙y(cè)定

2.3.1 色譜條件[11]Shimadzu VP-ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)，檢測(cè)波長為320 nm，柱溫為30℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量為5 μL。理論板數(shù)按3，6′二芥子?；崽欠逵?jì)算應(yīng)不低于3 000。根據(jù)以上條件，分離效果良好。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取實(shí)驗(yàn)用生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志粉末9個(gè)樣品(全部過三號(hào)篩)各1 g，放入具塞錐形瓶中，然后精密加入濃度為70%的甲醇溶液25 mL，稱定其重量，加熱回流1.5 h，冷卻后，再稱定其重量，然后用濃度為70%的甲醇溶液補(bǔ)足損失的重量，搖勻后濾過，取濾液，供試品溶液制備完成。

表3 遠(yuǎn)志酮Ⅲ加樣回收率結(jié)果

表4 3，6′二芥子?；崽羌訕踊厥章式Y(jié)果

表5 遠(yuǎn)志酮Ⅲ含量/%

表6 3，6′二芥子?；崽呛?%

圖3 遠(yuǎn)志酮Ⅲ及3，6′二芥子酰基蔗糖對(duì)照品圖譜

圖4 遠(yuǎn)志樣品HPLC色譜圖

3 討論

國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道[14-15]多以生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志為主，主要研究遠(yuǎn)志的藥理和成分分析，遠(yuǎn)志加工炮制工藝的報(bào)道比較少，而臨床上以蜜炙遠(yuǎn)志和甘草制遠(yuǎn)志應(yīng)用最多，本試驗(yàn)通過甘草制遠(yuǎn)志的實(shí)際生產(chǎn)和傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)炮制方法進(jìn)行研究，總結(jié)出自己的經(jīng)驗(yàn)，確定傳統(tǒng)方法炮制遠(yuǎn)志的工藝流程為：取甘草，加適量水煎湯，去渣備用，另取凈遠(yuǎn)志，加入適量的甘草水拌勻，潤透至湯液吸盡，置炒鍋中，用文火炒干至顏色加深，表面有焦斑時(shí)取出，攤晾放涼。遠(yuǎn)志每100千克，用甘草6 kg，此方法為遠(yuǎn)志的臨床用藥奠定了基礎(chǔ)。

課題組從實(shí)際出發(fā)并咨詢我院中藥專家和老藥工，改良了藥典法制遠(yuǎn)志的不足之處并對(duì)甘草制遠(yuǎn)志的歷史沿革進(jìn)行了系統(tǒng)整理，總結(jié)以往的炮制經(jīng)驗(yàn)和臨床體會(huì)，在對(duì)比了兩種炮制工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對(duì)甘草制遠(yuǎn)志的炮制工藝機(jī)理進(jìn)行了初步探究并總結(jié)了寶貴經(jīng)驗(yàn)。本課題經(jīng)驗(yàn)法制遠(yuǎn)志大大縮短了炮制時(shí)間，節(jié)省了大量人力物力，課題組下一步繼續(xù)對(duì)兩種工藝制遠(yuǎn)志的炮制時(shí)間、炮制程度等進(jìn)行對(duì)比，為工業(yè)批量生產(chǎn)提供技術(shù)支持，為制遠(yuǎn)志合理、安全、有效的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。