IgA腎病患者腎組織中TIM-1、TGF-β1的表達及臨床意義

王建芳，康樂

(駐馬店市中心醫(yī)院，1．檢驗科；2．新生兒科，河南 駐馬店 463000)

IgA腎?。↖gAN）是一種常見的原發(fā)性腎小球疾病，發(fā)病機制較為復(fù)雜，目前大多認(rèn)為是多種細(xì)胞因子及炎性因子水平異常導(dǎo)致機體免疫功能障礙而引發(fā)[1]。病理表現(xiàn)為腎小管間充質(zhì)細(xì)胞彌漫性增生、細(xì)胞外基質(zhì)堆積，對患者預(yù)后造成不利影響。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor β1，TGF-β1） 能刺激細(xì)胞外基質(zhì)的合成和沉積，促進間充質(zhì)細(xì)胞增生，參與腎小管間質(zhì)纖維化及腎小球硬化過程[2]。而T細(xì)胞免疫球蛋白與黏蛋白分子-1 （T-cell immunoglobulin and mucin domain，TIM-1）作為一種跨膜蛋白，廣泛參與了多種T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，可促進T細(xì)胞活化及免疫物質(zhì)分泌[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)TIM-1表達水平與促炎因子水平呈正相關(guān)，而IgAN發(fā)病與體內(nèi)免疫系統(tǒng)異常同樣密切相關(guān)[4]。目前臨床上對TIM-1、TGF-β1與 IgAN患者病理相關(guān)性研究較少，因此本次研究通過檢測IgAN患者腎組織中TIM-1、TGF-β1的表達水平，探究其與病理及臨床指標(biāo)的關(guān)系。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2017年1月到2018年12月我院收拾的75例IgA腎病患者作為A組，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)腎組織活檢確診為IgAN，參考中華醫(yī)學(xué)會腎病學(xué)主編的 《臨床診療指南·腎臟病學(xué)分冊》[5]；⑵年齡18～65歲；⑶患者知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并嚴(yán)重心肝脾肺功能異常、糖尿病、惡性腫瘤、遺傳性或繼發(fā)性腎臟疾病等；⑵合并其他臟器有纖維化病變（除腎臟）；⑶患者資料不全。選取40例微小病變腎病患者作為B組，排除標(biāo)準(zhǔn)與A組相同，同時選擇30例腎臟腫瘤切除術(shù)后腫瘤周邊正常腎組織作為對照組，A組男40例，女 35 例，年齡（35．7±3．0）歲；B 組男 22 例，女18 例，年齡（36．1±3．2）歲，對照組男 17 例，女 13例，年齡（35．9±2．8）歲，各組患者性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）。

1．2 方法 采集各組患者清晨空腹血5ml，離心取上清液，采用ELLSA法檢測白細(xì)胞介素-4（Interleukin，IL-4）和干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）水平，并計算IFN-γ/IL-4比值。采用Jaffe法檢測血肌酐（SCr）含量。 肌酐清除率（CCr）采用 Cockcroft公式計算，CCr（ml/min）=（140-年齡）×體重(kg)/N×血肌酐（mg/dL)，N 取值：男性，N=72，女性，N=85。收集患者24h尿液，采用考馬斯亮藍法檢測24h尿蛋白量。將A、B組患者腎活檢組織及腫瘤周邊正常組織于10%甲醛固定，脫水、包蠟、切片、免疫組化 （分別加入 TIM-1、TGFβ1一抗）、DBA 顯色，標(biāo)本放大400倍后，取腎小球8個以上、腎小管50個以上視野，采用Image pro-plus 6．0系統(tǒng)對其中陽性信號進行圖像分析，計算腎小球陽性面積占總腎小球面積的比值，作為TIM-1、TGFβ1在腎小球中的相對表達量。采用Haas法[6]對A組患者進行分型，Ⅰ型為輕微病變，Ⅱ型為局部增生；Ⅲ型為彌漫性增生，Ⅳ型為彌漫性增生，Ⅴ型為進行性慢性腎炎。采用Katafuchi法[7]按照腎小管間質(zhì)病變面積對A組患者進行分級，0級為無明顯病變，Ⅰ級為病變面積小于30%，Ⅱ級為病變面積30%～70%，Ⅲ級為病變面積大于70%。

1．3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 22．0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman法，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組腎功能指標(biāo)比較 A組24h尿蛋白量、SCr水平明顯高于B組和對照組，CCr低于B組和對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），見表 1。

表1 各組腎功能指標(biāo)比較

表1 各組腎功能指標(biāo)比較

組別A組B組對照組例數(shù) SCr(μmol/L)75 40 30 70．58±4．62 46．74±2．57 46．12±2．40 CCr(ml/min) 24h尿蛋白定量(g)98．54±2．79 129．25±3．56 130．25±3．48 1．83±0．48 1．44±0．39 1．42±0．35

2．2 各組炎性因子比較 A組IL-4明顯高于B組和對照組，IFN-γ/IL-4低于B組和對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），各組 IFN-γ 水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05），見表 2。

表2 各組炎性因子比較

表2 各組炎性因子比較

組別A組B組對照組例數(shù) IL-4(pg/ml)75 40 30 67．94±3．28 43．29±2．93 42．17±2．85 IFN-γ(pg/ml) IFN-γ/IL-4 24．17±2．47 24．69±2．53 25．08±2．61 0．36±0．11 0．57±0．16 0．59±0．18

2．3 各組腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平 A組腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平明顯高于B組和對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），見表 3。

表3 各組腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

表3 各組腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

組別A組B組對照組例數(shù) TIM-1（%）75 40 30 7．48±0．53 2．15±0．46 2．09±0．42 TGF-β1（%）10．82±0．72 3．10±0．53 3．14±0．51

2．4 A 組患者 TIM-1、TGF-β1表達水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)性分析顯示，A組腎組織中TIM-1表達水平與IL-4呈正相關(guān) （r=0．497，P＜0．05）， 與 IFN-γ/IL-4 呈負(fù)相關(guān) （r=-0．309，P＜0．05），TGFβ1表達水平與 24h 尿蛋白定量呈正相關(guān)（r=0．330，P＜0．05），見表 4。

表4 TIM-1、TGF-β1表達水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

2．5IgAN患者不同 Haas分型腎組織 TIM-1、TGF-β1表達水平 IgAN患者Haas各分型中Ⅳ、Ⅴ型腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平高于Ⅰ-Ⅲ型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），見表 5。

表5 IgAN患者不同Haas分型腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

表5 IgAN患者不同Haas分型腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

HaasⅡ(n=15)HaasⅢ(n=22)HaasⅣ(n=14)HaasⅤ(n=12)7．44±0．52 9．39±0．81 7．52±0．56 9．83±0．90 8．73±0．79 12．05±1．54 9．02±0．86 12．26±1．73指標(biāo) HaasⅠ(n=12)TIM-1 TGF-β1 7．31±0．48 9．32±0．72

2．6 IgAN患者不同Katafuchi分級腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平 隨Katafuchi分級增加，IgAN患者腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=77．49、216．07，P＜0．05），見表6。

2．7 IgAN 患者腎組織 TIM-1、TGF-β1表達水平與病理情況的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析顯示，IgAN患者腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平與Haas分型、Katafuchi分級呈正相關(guān)（r＞0，P＜0．05），見表 7。

表6 IgAN患者不同Katafuchi分級腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

表6 IgAN患者不同Katafuchi分級腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

Ⅰ級(n=28) Ⅱ級(n=13) Ⅲ級(n=7)7．58±0．43 12．36±0．63 8．43±0．52 13．57±0．68 9．68±0．55 15．74±0．72指標(biāo) 0級(n=27)TIM-1(%)TGF-β1 7．02±0．41 9．84±0．59

表7 IgAN患者腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平與病理情況的相關(guān)性

3 討論

IgAN臨床表現(xiàn)為血尿、蛋白尿、水腫等癥，病理表現(xiàn)為腎小球硬化、系膜增生、或腎小管萎縮、或腎間質(zhì)纖維化等，是我國透析患者主要病因，給患者健康及家庭帶來較大危害和負(fù)擔(dān)[8]。目前IgAN發(fā)病機制尚不明確，推測可能是糖基化異常的IgA和抗體形成復(fù)合物在腎臟中沉積從而對腎臟造成損傷。有文獻報道，約22%血尿患者表現(xiàn)為腎間質(zhì)纖維化和（或）腎小球萎縮，表明腎小管和間質(zhì)損傷可能在腎小球疾病發(fā)展中起到重要作用，且對患者預(yù)后造成一定影響[9，10]。目前針對IgAN尚無確切治療方法，因此探討IgAN疾病發(fā)展相關(guān)因素對指導(dǎo)臨床診療具有重要意義。

TGF-β1是一種由脂多糖及巨噬細(xì)胞分泌、表達于機體多種組織器官中的細(xì)胞因子，能參與胚胎、骨骼發(fā)育、腫瘤發(fā)生、免疫調(diào)節(jié)等生理過程[11]。TGF-β1在組織損傷初期能促進損傷修復(fù)和再生，并能促進血管平滑肌的增生，同時通過多條信號途徑參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1能促進膠原蛋白類物質(zhì)在組織中沉積，激活成纖維細(xì)胞，促進間質(zhì)區(qū)域血管生成，在組織纖維化過程中起到關(guān)鍵作用[12，13]。本次研究中發(fā)現(xiàn)，A組腎組織中TGF-β1表達水平明顯高于B組和對照組，且在Haas分型（Ⅳ和Ⅴ型）及Katafuchi分級患者中表達水平逐級升高。相關(guān)性分析顯示，TGF-β1表達水平與24h尿蛋白定量、Haas分型、Katafuchi分級呈正相關(guān)，表明患者腎組織中TGF-β1表達水平與腎功能、IgAN病理發(fā)展密切相關(guān)。推測原因可能是TGF-β1可通過影響蛋白多糖、Ⅲ型膠原蛋白、纖連蛋白的表達水平，促進胞外基質(zhì)的生成及沉積，加重了腎臟組織損傷[14]。

TIM是一種最早發(fā)現(xiàn)于小鼠體內(nèi)的基因家族，能共同編碼具有生物活性的跨膜蛋白，通過影響T細(xì)胞亞群的分化及平衡[15]。人體TIM家族包括TIM-1、TIM-3、TIM-4， 其中 TIM-1 能特異性表達在T細(xì)胞表面，與TIM-4結(jié)合為細(xì)胞活化提供協(xié)同信號并促進Th0向Th2分化，從而影響T細(xì)胞亞群Th1/Th2平衡[16]。有研究發(fā)現(xiàn)，在過敏性紫癜患者外周血單核細(xì)胞中TIM-1 mRNA表達上調(diào)，且伴隨Th2水平的升高[17]。在SLE患者中，TIM-1表達水平與病情及體內(nèi)IL-4水平呈正相關(guān)，表明在TIM-1可通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群參與多種自身免疫疾病的發(fā)生發(fā)展過程[18]。IFN-γ是Th1參與免疫反應(yīng)的主要執(zhí)行細(xì)胞因子，IFN-γ/IL-4可反映Th1/Th2平衡情況。本次研究中發(fā)現(xiàn)，A組TIM-1表達水平明顯高于B組和對照組，CCr、IFN-γ/IL-4比值低于B組和對照組，IgAN患者Haas各分型中Ⅳ和Ⅴ型腎組織中TIM-1表達水平高于Ⅰ-Ⅲ型，且隨Katafuchi分級（0-Ⅲ級）增加，腎組織中TIM-1表達水平逐漸升高，經(jīng)Spearman相關(guān)分析，IgAN患者腎組織中TIM-1表達水平與Haas分型、Katafuchi分級、IL-4水平呈正相關(guān)，與IFN-γ/IL-4呈負(fù)相關(guān)，推測TIM-1可能通過促進Th2分化表達，促進了Th2細(xì)胞優(yōu)勢反應(yīng)，增加局部免疫反應(yīng)強度，加重了對腎組織的免疫損傷[19]。因此臨床診療中可以考慮通過抑制TIM-1信號通路或下調(diào)TGF-β1表達水平從而降低免疫反應(yīng)及腎小管間質(zhì)損傷，可能成為一個治療IgAN新途徑[20]。

綜上所述，TIM-1、TGF-β1通過調(diào)控 Th免疫、腎小管間質(zhì)病理損傷過程參與了IgAN發(fā)生和發(fā)展過程，TIM-1、TGF-β1高表達可加重IgAN病情發(fā)展及惡化，可作為腎小管間質(zhì)損傷的標(biāo)志物之一。我們設(shè)想通過降低TIM-1、TGF-β1表達水平從而減弱腎臟免疫損傷，為臨床診療提供新的依據(jù)和思路。