酶聯(lián)免疫聯(lián)合核酸檢測對減少輸血傳播疾病風險的探討

葉祖興，劉麗娜，何林璞

(1．福建醫(yī)科大學附屬三明第一醫(yī)院，福建 三明 365000；2．福建省三明市中心血站，福建 三明 365000)

眾所周知，輸血傳播感染性疾病的防控屬于臨床輸血安全的重點問題之一[1]。如何有效解決病毒感染的“窗口期”是血液篩查技術(shù)的關鍵。其中乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、艾滋病病毒（HIV）以及梅毒病毒（TP）是嚴重危害人體健康的重要感染性病原微生物，其主要通過血液制品以及靜脈吸毒等途徑傳播[2]。迄今為止，我國絕大部分的采供血機構(gòu)均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎抗體（抗-HCV）、艾滋病抗體（抗-HIV）以及梅毒抗體（抗-TP），以明確獻血者是否感染上述病毒[3]。雖然該檢測方式具有操作簡便、靈敏度和特異性較高等優(yōu)點，然而對于部分“窗口期”感染、病毒變異以及免疫靜默期感染的獻血者存在一定的缺陷，易導致漏檢情況的發(fā)生，從而給輸血安全造成極大的隱患[4]。近年來，隨著醫(yī)療水平的不斷進步，核酸檢測開始被廣泛應用。本文通過研究酶聯(lián)免疫聯(lián)合核酸檢測對減少輸血傳播疾病風險的效果，旨在為提高血液質(zhì)量以及保證輸血安全提供指導作用，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2016年1月-2017年12月三明市中心血站采集的獻血者血液樣本68345例為研究對象。其中男性獻血者41273例，女性獻血者27072 例，年齡 19～58 歲，平均年齡（28．42±6．42）歲；受教育年限 6-16 年，平均受教育年限（11．43±2．47）年。納入標準：⑴所有患者均符合《獻血者健康檢查要求》[5]（GB18467-2011）體檢標準；⑵年齡＞18 歲。所有獻血者均簽署了知情同意書，三明市中心血站倫理委員會已批準。

1．2 儀器與試劑 BEP111全自動酶免分析儀 （德國西門子醫(yī)療設備有限公司），cobas311全自動生化分析儀（瑞士羅氏公司）和羅氏全自動核酸檢測系統(tǒng)。HBsAg試劑盒 （意大利索靈和英科新創(chuàng)）；抗-HCV試劑盒（強生和珠海麗珠公司）；抗-HIV試劑盒（法國Bio-Rad和珠海麗珠公司）；抗-TP試劑盒（北京萬泰和英科新創(chuàng)公司）。

1．3 檢測方法

1．3．1 ⑴血液樣本采集：采集獻血者血液樣本3份，每份5ml。帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管1支，用于核酸檢測；EDTA-K2抗凝真空采血管2支，分別進行酶聯(lián)免疫吸附試驗以及血型檢測。所有樣本均使用兩個不同廠家的試劑進行平行試驗。

1．3．2 酶聯(lián)免疫吸附試驗 具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1．3．3 核酸檢測 使用羅氏全自動核酸檢測系統(tǒng)及配套試劑。檢測對象為酶聯(lián)免疫吸附法檢測為陰性以及0．7≤S/CO≤3．0的獻血者，主要以6人份混樣進行HBV-DNA、HCV-RNA以及HIV-RNA三聯(lián)檢測[6]：如混檢結(jié)果無反應性，則表示6份樣本均合格；如混檢結(jié)果呈陽性，則將6份樣本予以單人份檢測，有反應性者表示核酸陽性，無反應性者表示核酸陰性。

1．3．4 評價標準 酶聯(lián)免疫吸附法試驗結(jié)果判定標準如下[7]：HBsAg、抗-HCV、抗-HIV 以及抗-TP 檢測 S/CO＜0．7 為無反應性，即為陰性，0．7≤S/CO＜1即為灰區(qū)，S/CO≥1．0即為有反應性，即為陽性。其中單試劑有反應性以及單、雙試劑有反應性標本均以原試劑對原標本管以及對應辮管標本進行雙孔復試。如復試孔無反應性即為合格，任意孔有反應性均為不合格。

1．4 統(tǒng)計學方法 本文數(shù)據(jù)均采用SPSS 20．0軟件進行檢測分析，采用“χ2”檢驗、t檢驗，用“[n(%)]”表示計數(shù)資料，用“（x±s）”表示計量資料均數(shù)標準差。P值＜0．05為兩組數(shù)據(jù)對比差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2．1 68345例獻血者血液樣本HBsAg、抗-HCV、抗-HIV以及抗-TP檢測結(jié)果 68345例獻血者血液樣本中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV以及抗-TP酶聯(lián)免疫檢測不合格人數(shù)占比為 0．83%（570/68345）， 其中 1．0≤S/CO≤3．0 血液樣本 89 例，S/CO＞3．0 樣本 164 例，0．7≤S/CO＜1．0 樣本 319 例，合格血液樣本67775例。見表1。

2．2 67775例酶聯(lián)免疫檢測合格獻血者的核酸檢測結(jié)果 67775例酶聯(lián)免疫檢測合格獻血者檢出HBV-DNA 陽性人數(shù)占比為 0．07%（46/67775），檢出HCV-RNA與HIV-RNA陽性人數(shù)占比均為0．00%（0/67775）。 見表 2。

2．3 酶聯(lián)免疫檢測 HBsAg0．7≤S/CO＜1．0 與 1．0≤S/CO≤3．0獻血者核酸檢測結(jié)果 酶聯(lián)免疫檢測HBsAg0．7≤S/CO＜1．0 獻血者核酸檢測陽性率為5．36%（6/112）， 明 顯 低 于 酶 聯(lián) 免 疫 檢 測 HB-sAg1．0≤S/CO≤3．0 獻血者的 22．58%（7/31）， 組間對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。 見表 3。

表1 68345例獻血者血液樣本HBsAg、抗-HCV、抗-HIV以及抗-TP檢測結(jié)果[n（%）]

表2 67775例酶聯(lián)免疫檢測合格獻血者的核酸檢測結(jié)果[n（%）]

3 討論

對于采供血機構(gòu)而言，輸血傳播的疾病主要為病毒性傳染病，而在我國最受關注的病毒包括HBV、HCV以及HIV等[8-10]。目前，我國大部分采供血機構(gòu)為了保證輸血的安全，普遍采用酶聯(lián)免疫吸附法對各種病毒進行檢測。且自從國家衛(wèi)生部頒布了《血站基本標準》后，所有的采供血機構(gòu)均需對所采集的血液樣本進行檢測，以保證輸血安全[11，12]。然而，酶聯(lián)免疫吸附試驗所檢測的病毒標志物均為特異抗原或抗體類，因此病毒“窗口期”、病毒變異以及病毒非典型性血清的轉(zhuǎn)陽等不利因素均可能促使病毒漏檢情況的發(fā)生，從而對臨床用血安全造成潛在威脅[13，14]。由此，尋找一種靈敏度更高的檢測方式對獻血者血液樣本進行篩查顯得尤為重要，其中核酸檢測是近年來開始被廣泛應用于血液安全篩查中的抑制方式，可有效檢出血液中較低水平的HBV、HCV以及HIV等病毒感染，同時對于上述病毒的隱匿性感染、病毒亞型以及病毒變異均有一定的檢出作用。由此，本文通過研究酶聯(lián)免疫聯(lián)合核酸檢測對減少輸血傳播疾病風險的效果，目的在于為降低輸血傳播疾病風險提供參考依據(jù)。

表3 酶聯(lián)免疫檢測不同HBsAg0.7≤S/CO＜1.0與1.0≤S/CO≤3.0組值獻血者核酸檢測結(jié)果[n（%）]

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)：68345例獻血者血液樣本中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV以及抗-TP酶聯(lián)免疫檢測不合格人數(shù)占比為 0．83%（570/68345），其中 1．0≤S/CO≤3．0 血液樣本 89 例，S/CO＞3．0 樣本 164 例，0．7≤S/CO＜1．0 樣本 319 例， 合格血液樣本 67775例。這與夏傳友等人的研究報道相一致[15，16]，表明了酶聯(lián)免疫吸附試驗可應用于血液樣本篩查中。此外，67775例酶聯(lián)免疫檢測合格獻血者檢出HBVDNA 陽性 人數(shù) 占比 為 0．07%（46/67775）， 檢 出HCV-RNA與HIV-RNA陽性人數(shù)占比均為0．00%（0/67775）。這提示了酶聯(lián)免疫吸附試驗應用于血液樣本篩查中，并無法完全排除HBV感染，存在一定的漏檢率。而核酸檢測可有效彌補酶聯(lián)免疫吸附試驗在該方面的缺陷，有效提高HBV的檢出率。分析原因，作者認為核酸檢測主要是通過將血液中微小的病毒核酸通過PCR擴增以及熒光信號識別，從而達到早期檢測縮短“窗口期”的作用，進一步彌補酶聯(lián)免疫吸附法的缺陷，達到提高輸血安全的目的[17，18]。另外，酶聯(lián)免疫檢測 HBsAg0．7≤S/CO＜1．0 獻血者核酸檢測陽性率為5．36%（6/112），明顯低于酶聯(lián)免疫檢測 HBsAg1．0≤S/CO≤3．0 獻血者的 22．58%（7/31），提示了核酸檢測可有效檢出酶聯(lián)免疫檢測HBsAg0．7≤S/CO＜1．0 以 及 HBsAg1．0≤S/CO≤3．0獻血者HBsAg感染情況。究其原因，筆者認為酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測HBsAg的基本原理為抗原、抗體的特異性反應，而臨床上已有相關研究報道證實，類風濕因子、補體、部分自身抗體、交叉反應物質(zhì)以及高濃度非特異性免疫球蛋白等內(nèi)源性感染因素與標本儲存時間較長、細菌污染等外源性因素均可能對酶聯(lián)免疫吸附試驗的測定結(jié)果產(chǎn)生干擾[19，20]。

綜上所述，采用酶聯(lián)免疫聯(lián)合核酸檢測可顯著降低輸血傳播疾病風險，從而達到提高血液質(zhì)量以及輸血安全的目的。具有較高的臨床推廣應用價值。然而，由于檢測方式的局限性，核酸檢測也存在一定時間的“窗口期”，由此，采供血機構(gòu)應從源頭上加強獻血者的篩選，加強獻血前的健康體檢工作，盡量選取低危人群作為獻血者。與此同時，核酸檢測因具有較高的靈敏度，因此對實驗室環(huán)境以及血液標本均有較高的要求，因此在上機操作中應嚴格根據(jù)相關規(guī)程進行檢測，完善標本留取、環(huán)境清潔消毒等環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制。