胃癌組織Sox2、VEGF-C蛋白表達及臨床意義

趙志勇，蘇建民，程治強，宋詩偉

(河南省省直第一醫(yī)院外科，河南 鄭州 450000)

胃癌主要通過淋巴結(jié)進行轉(zhuǎn)移，這也是影響患者預(yù)后的最關(guān)鍵的因素，現(xiàn)階段淋巴管內(nèi)皮細胞相對特異性標記物和有關(guān)淋巴管生成的細胞信號傳導(dǎo)通路已成為惡性腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要方向[1]。近年來，部分作用于淋巴管內(nèi)皮細胞的特異性生長因子不斷被發(fā)現(xiàn)并為胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的研究提供了新的思路。

Sox2轉(zhuǎn)錄因子的蛋白同雞Sox2蛋白有95%的同源[2]，同鼠 Sox2蛋白有 98%的相似[3]，研究[4]已證實其與腫瘤細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移和維持腫瘤干細胞自我更新具有密切聯(lián)系并提示在人類胃黏膜上皮細胞的分化過程中具有重要作用。相關(guān)研究[5]也在肺癌、前列腺癌、腺癌、胃癌、及卵巢癌等腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)了Sox2的異常表達。目前，血管內(nèi)皮生長因子及其受體是重要的淋巴管調(diào)節(jié)因子，其既可以調(diào)節(jié)成熟淋巴管的生理功能還可調(diào)節(jié)胚胎組織淋巴管生成，但目前淋巴管生理功能調(diào)節(jié)因子與胃癌轉(zhuǎn)移的作用研究資料相對缺乏。故此，本研究探討干細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2、VEGF-C在胃癌組織中的表達及臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取 2016年 2月至 2017年 4月我院病理科保存的胃癌組織標本52例，納入標準：⑴均經(jīng)病理組織學(xué)確診；⑵患者臨床資料保存完整；⑶術(shù)前未行放療、化療等治療。排除標準：⑴合并其他原發(fā)性惡性腫瘤者；⑵未分化癌或特殊類型胃癌。同時選取正常胃粘膜組織34例、慢性萎縮性胃炎組織40例、萎縮性胃炎伴腸化生或不典型增生組織33例作為對照，各組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05），見表 1。

表1 各組一般資料比較

1．2 實驗方法 采用SP免疫組化法檢測Sox2和VEGF-C蛋白表達：脫蠟及水化；蒸餾水沖洗，5min PBS溶液洗滌；抗原修復(fù)；H2O2室溫孵育10min，3次PBS洗滌；滴加適當比例稀釋的一抗，37℃溫箱30min孵育，4℃孵育過夜；滴加二抗后37℃溫箱30min孵育，3次PBS洗滌；DAB顯色，蘇木素復(fù)染后樹膠封片顯微鏡觀察。已知陽性切片作為陽性對照，代替一抗作為陰性對照，陽性對照充分顯色，終止反應(yīng)[6]。

1．3結(jié)果判斷 SOX2陽性定位于細胞漿及細胞膜，VEGF-C陽性定位于細胞質(zhì)，呈黃色顆粒狀，隨機選取5個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100個細胞，對染色強度及陽性細胞比例進行評分，染色強度：無色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例：＜5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為 2分，51%～75%為 3分，＞75%為4分。最終得分為染色強度和陽性細胞比例得分之積，≥5分為陽性表達，≤4分為陰性表達[7]。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS 19．0軟件，計量資料采用（x±s）表示，多組間比較使用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數(shù)資料比較使用χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組 Sox2、VEGF-C蛋白表達比較 胃癌組Sox2蛋白陽性表達率明顯低于正常胃粘膜組和慢性萎縮性胃炎組（P＜0．05），而 VEGF-C 蛋白陽性表達率明顯高于正常胃粘膜組和慢性萎縮性胃炎組（P＜0．05）；胃癌組和萎縮性胃炎伴腸化生或不典型增生組Sox2和VEGF-C蛋白陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）。 見表 2。

表2 各組Sox2、VEGF-C蛋白表達比較

2．2 Sox2蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系Sox2蛋白陽性表達與胃癌組織學(xué)類型、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān) （P＜0．05）， 與患者年齡、性別及浸潤深度無關(guān)（P＞0．05），見表 3。

2．3 VEGF-C蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系 VEGF-C蛋白陽性表達與胃癌浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0．05），與患者年齡、性別、組織學(xué)類型、TNM 分期和分化程度無關(guān)（P＞0．05），見表4。

表3 Sox2蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系

表4 VEGF-C蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系

2．4 Sox2與VEGF-C蛋白表達相關(guān)性 胃癌組織Sox2蛋白表達與VEGF-C蛋白表達無相關(guān)性 （P＞0．05），見表 5。

表5 胃癌組織Sox2與VEGF-C蛋白表達相關(guān)性

3 討論

研究[8]發(fā)現(xiàn)胃癌的發(fā)展過程可從正常胃粘膜-慢性萎縮性胃炎-不典型增生-胃癌的依次進展。若對不典型增生和慢性非萎縮性胃炎患者的病情及時干預(yù)、及時治療，便可有效避免疾病發(fā)展為成胃癌，進而從源頭上提高預(yù)后效果。最新的研究[9]也對胃癌的分子機制和相關(guān)因子之間的聯(lián)系進行了探討。

研究[10]證實腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程與胚胎干細胞關(guān)系密切，干細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2(sex determining region Y-box2)屬于SOX家族，被稱為胃特異性轉(zhuǎn)錄因子，具有調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的作用而Sox2還可表達于人類消化道并存在于胃底和幽門粘膜等胃上皮細胞中，但結(jié)腸中不表達。此外，Sox2對胃粘膜上皮細胞表型標志物MUC5AC的表達和胃蛋白酶具有重要調(diào)節(jié)作用。因為Sox2在維持正常胃表型和功能及胃的胚胎發(fā)育、分化過程中作用顯著，故而，研究者推測其與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系[11]。

血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是一種特異性促進細胞增殖的有絲分裂源，亦稱血管調(diào)理素或血管通透因子，可促進血管內(nèi)皮細胞的增殖、分裂和誘導(dǎo)血管生成，并可增加微靜脈和小靜脈的通透性。VEGF-C被稱為淋巴管生成因子，是VEGF家族新發(fā)現(xiàn)成員，可與VEGFR-2或VEGFR-3特異性受體結(jié)合分別發(fā)揮促進血管及淋巴管的生成的作用；VEGF-C可通過旁分泌作用于VEGFR-3促進自身的分泌并介導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖和淋巴管的增生，調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細胞分化，故而VEGF-C常被認為是重要的淋巴管生成因子[12]。但目前淋巴管生理功能調(diào)節(jié)因子與胃癌轉(zhuǎn)移的作用研究資料相對缺乏。故此，本研究探討干細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2、VEGF-C在胃癌組織中的表達及臨床意義。

本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組Sox2蛋白陽性表達率為57．69%，明顯低于正常胃粘膜組94．12%和慢性萎縮性胃炎組82．50%，而VEGF-C蛋白陽性表達率為75．00%，明顯高于正常胃粘膜組20．59%和慢性萎縮性胃炎組45．00%；胃癌組和萎縮性胃炎伴腸化生或不典型增生組Sox2和VEGF-C蛋白陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）。上述結(jié)果提示Sox2和VEGF-C可維持胃粘膜上皮細胞的正常表型和功能，其異常表達可能與胃癌的發(fā)生和發(fā)展具有密切聯(lián)系。Sox2是胃癌細胞保留胃腺體細胞表型的重要條件，可能屬于胃癌發(fā)生過程中的一類抑癌基因；VEGF-3與其特異性受體結(jié)合后可激活酪氨酸激酶信號系統(tǒng)導(dǎo)致淋巴管擴張和增生[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)粘液腺癌、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Sox2蛋白陽性表達率分別為 25．00%、28．57%、30．77%和 48．65%，明顯低于非粘液腺癌、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0．05）；侵及漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者VEGF-C蛋白陽性表達率分別為88．00%和89．19%，明顯高于未侵及漿膜、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0．05）。 上述結(jié)果說明 Sox2 和 VEGF-C 蛋白與胃癌的臨床病理特征有一定關(guān)系，可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。相關(guān)文獻[14]發(fā)現(xiàn)胃癌組織中Sox2甲基化可下調(diào)Sox2的表達，使胃癌細胞無法正常凋亡而無限增殖，認為Sox2蛋白表達下調(diào)與胃癌的早期發(fā)生、腫瘤分化、胃癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移能力增加密切相關(guān)。VEGF-C可增加淋巴結(jié)通透性和淋巴管外組織間壓力進而牽拉內(nèi)皮細胞增加淋巴管腔致使胃癌細胞經(jīng)過疏松細胞而進而轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織Sox2蛋白表達與VEGF-C 蛋白表達無相關(guān)性（P＞0．05）。 這說明兩種蛋白為影響胃癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的獨立危險因素。

綜上所述，胃癌組織Sox2蛋白呈低表達，而VEGF-C蛋白呈高表達，與患者臨床病理特征有一定關(guān)系，可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。