兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)14項(xiàng)測(cè)定結(jié)果的可比性分析

魏靜，沈才娟

(揚(yáng)州市醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，江蘇 揚(yáng)州 225000)

本實(shí)驗(yàn)室于2010年購(gòu)買了美國(guó)貝克曼DXC800型全自動(dòng)生化分析儀，隨著體檢業(yè)務(wù)的不斷增加，到了2013年又購(gòu)進(jìn)日本日立7600-020型全自動(dòng)生化分析儀。雖然兩臺(tái)生化儀所用試劑基本相同，但是同一標(biāo)本在不同儀器上測(cè)定其結(jié)果可能存在一定的差異，ISO15189要求當(dāng)同樣的檢驗(yàn)應(yīng)用不同程序或設(shè)備，或在不同地點(diǎn)進(jìn)行，或以上各項(xiàng)均不同時(shí)，應(yīng)有確切機(jī)制以驗(yàn)證在整個(gè)臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性[1]。本文按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)頒布的EP9-A2文件[2]的要求，對(duì)兩臺(tái)生化檢測(cè)系統(tǒng)14個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行比對(duì)分析和偏倚評(píng)估，以探討兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)同一標(biāo)本的測(cè)定結(jié)果是否有顯著差異，其差異能否達(dá)到臨床要求。

1 資料和方法

1．1 一般資料 隨機(jī)選取本單位體檢中心患者40例，使用黃色促凝管采集血液，濃度范圍涵蓋整個(gè)方法的可報(bào)告范圍。

1．2 儀器與試劑 貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀為參比系統(tǒng)，日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀為試驗(yàn)系統(tǒng)。兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)除了HDL-C和LDL-C使用的是寧波普瑞柏生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的試劑盒，其余項(xiàng)目均使用中山標(biāo)佳生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒。貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀參加衛(wèi)生部、江蘇省室間質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)良，性能穩(wěn)定，故將其作為參比系統(tǒng)，進(jìn)行系統(tǒng)間的比對(duì)分析。

1．3 校準(zhǔn)品與質(zhì)控品 日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀使用校準(zhǔn)品是英國(guó)RANDOX復(fù)合校準(zhǔn)液，批號(hào)為CAL2351；貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析除了 GLU、CREA、BUN、TP、ALB 使用的校準(zhǔn)品是Beckman原廠離子定標(biāo)液，批號(hào)為471288、471291和471294，其它項(xiàng)目均使用英國(guó)RANDOX復(fù)合校準(zhǔn)液，批號(hào)為CAL2351；兩臺(tái)儀器使用的質(zhì)控品都是Beckman多項(xiàng)復(fù)合質(zhì)控品（低、中和高值三個(gè)水平），批號(hào)為 M607701、M607702、M607703。

1．4 方法

1．4．1 比對(duì)項(xiàng)目 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（CHOL）、肌酐（CREA）、葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）

1．4．2 比對(duì)試驗(yàn) 按照實(shí)驗(yàn)室制定的SOP文件對(duì)兩臺(tái)儀器進(jìn)行每日、每周、每月的維護(hù)保養(yǎng)。根據(jù)廠家要求定期進(jìn)行校準(zhǔn)，并堅(jiān)持每天做室內(nèi)質(zhì)控，保證所有項(xiàng)目在控。按照EP9-A2文件的要求，每天隨機(jī)選取8例體檢患者的新鮮血清，確保無(wú)溶血，無(wú)乳糜血。在兩臺(tái)儀器上進(jìn)行雙份測(cè)定，第一次先按1→8順序檢測(cè)，第二次按8→1反序檢測(cè)，連續(xù)測(cè)量5d，最終取平均值作為測(cè)定結(jié)果。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

1．5．1 離群值檢驗(yàn) 根據(jù)EP9-A2文件的要求，對(duì)兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)分別進(jìn)行儀器內(nèi)離群值檢驗(yàn)和儀器間離群值檢驗(yàn)，繪制相應(yīng)散點(diǎn)圖查找離群點(diǎn)。若只有1個(gè)離群點(diǎn)，可以刪除，繼續(xù)分析。若有2個(gè)或2個(gè)以上離群點(diǎn)，則需查找原因，重新測(cè)定樣品替換離群數(shù)據(jù)，或重新分析所有數(shù)據(jù)[3]。

1．5．2 使用 Microsoft Excel 2007 與 SPSS13．0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。先將檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行F檢驗(yàn)方差分析，再將參比系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果作為X軸，試驗(yàn)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果作為Y軸，計(jì)算出相關(guān)系數(shù)(r)和線性回歸方程Y=bX+a。按照EP9-A2文件規(guī)定，若 r≥0．975（即 r2＞0．95）時(shí)即可將各個(gè)比對(duì)項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度（Xc）代入回歸方程計(jì)算出Yc，求出系統(tǒng)誤差(SE=｜Yc-Xc｜)和相對(duì)偏差(SE%=｜Yc-Xc｜/Xc*100%)，以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)CLIA’88規(guī)定的相對(duì)偏差SE%小于CLIA’88規(guī)定的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(Ea)的1/2為臨床可接受誤差[4]，即兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果具有可比性。

2 結(jié)果

2．1 離群值檢驗(yàn)結(jié)果 對(duì)40例樣本進(jìn)行方法內(nèi)、方法間的離群值檢查，未發(fā)現(xiàn)有離群值，所有數(shù)據(jù)均可用于實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。

2．2 相關(guān)性分析結(jié)果 r2≥0．95(即 r≥0．975)表明 X取值范圍合適，應(yīng)用回歸方程計(jì)算得到斜率和截距較為可靠；F檢驗(yàn)方差分析P＞0．05表示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)同一標(biāo)本的測(cè)定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析

2．3 相對(duì)偏倚評(píng)估 將各個(gè)比對(duì)項(xiàng)目3個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平濃度（Xc）代入回歸方程計(jì)算出Yc，求出相對(duì)偏差 （SE%），再與1/2Ea比較判斷臨床可接受性，見表2。除了尿素氮的低濃度相對(duì)偏倚大于1/2美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案（CLIA’88）最大允許誤差（Ea），其余的均小于1/2 CLIA’88最大允許誤差，可被臨床接受。

表2 兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)比對(duì)項(xiàng)目的相對(duì)偏倚評(píng)估

3 討論

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則ISO/15189（醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求）對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性和可比性提出了明確要求，強(qiáng)調(diào)方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn)是實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確度溯源和病人標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果可比性的重要途徑[5]。完成一個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、操作程序以及操作人員的組合被稱為檢測(cè)系統(tǒng)。國(guó)際上推薦使用封閉的或配套的生化檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)保證檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性和準(zhǔn)確性，而我國(guó)的現(xiàn)狀是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用儀器、試劑和校準(zhǔn)品均不配套的開放系統(tǒng)[6]。一般來(lái)說(shuō)，開放系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果的溯源性一般可以通過(guò)廠家提供的試劑和校準(zhǔn)品的溯源性報(bào)告得到驗(yàn)證[7]，本實(shí)驗(yàn)室使用的兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)就屬于開放系統(tǒng)，其中中山標(biāo)佳和寧波普瑞柏兩個(gè)試劑廠家都有詳細(xì)的溯源性分析報(bào)告，朗道校準(zhǔn)品的溯源性也是有據(jù)可循的，并且試劑盒的方法學(xué)性能驗(yàn)證能滿足臨床的要求，這與沙瑤等報(bào)道的一致[8]。不同的生化檢測(cè)系統(tǒng)，特別是開放系統(tǒng)，對(duì)同一項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果一般會(huì)造成不同程度的差異，這個(gè)不少國(guó)內(nèi)學(xué)者都有研究報(bào)道過(guò)[9-13]。那么如何保證檢驗(yàn)結(jié)果的的準(zhǔn)確性呢？由此筆者參考CLSI頒布的EP9-A2文件，以貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀為參比系統(tǒng)，日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀為試驗(yàn)系統(tǒng)，對(duì)兩者進(jìn)行14項(xiàng)指標(biāo)的比對(duì)分析和偏倚評(píng)估，來(lái)探討兩臺(tái)生化檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果的一致性、準(zhǔn)確性和相關(guān)性。

本研究顯示，兩臺(tái)儀器所測(cè)的14個(gè)項(xiàng)目相關(guān)系數(shù) r2＞0．95（即 r＞0．975），P＞0．05，表明應(yīng)用回歸方程計(jì)算得到斜率和截距較為可靠，樣本數(shù)據(jù)取值范圍合理，兩種生化檢測(cè)系統(tǒng)的相關(guān)性良好，便于進(jìn)一步分析兩者的系統(tǒng)誤差。系統(tǒng)誤差可分為恒定系統(tǒng)誤差和比例系統(tǒng)誤差，恒定系統(tǒng)誤差和比例體統(tǒng)誤差分別可以通過(guò)線性回歸方程Y=bX+a中的斜率b和截距a反映出來(lái)，當(dāng)b越接近1，a越接近0，說(shuō)明2種方法結(jié)果之間存在的系統(tǒng)誤差越小。從表2中看出，CREA和UA的a相對(duì)比較大，說(shuō)明干擾物的影響較大，存在一定的恒定系統(tǒng)誤差，可能是由于兩臺(tái)儀器使用年限不同，比色杯清洗能力不同而導(dǎo)致本底不同造成的；除LDL外，其余指標(biāo)b均大于0．9437，說(shuō)明當(dāng)LDL濃度越高，其比例系統(tǒng)誤差會(huì)越明顯，但在醫(yī)學(xué)決定水平濃度的范圍內(nèi)這兩個(gè)誤差并不影響最終臨床可接受性。由表3可以看出，除了尿素氮的低濃度相對(duì)偏倚大于1/2美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案（CLIA’88）最大允許誤差（Ea），不被臨床接受，其余檢測(cè)結(jié)果均具有可比性。對(duì)于兩臺(tái)生化檢測(cè)系統(tǒng)的尿素氮在低濃度水平檢測(cè)不一致，其原因可能是檢測(cè)方法不同造成的。貝克曼DXC800采用電極法，而日立7600-020則采用酶偶聯(lián)速率法，前者是通過(guò)電導(dǎo)率改變來(lái)檢測(cè)尿素氮的含量，而后者是基于吸光度的變化與尿素氮含量成正比，若及時(shí)給予維護(hù)和校正則可以避免，這與呂慧、賴戰(zhàn)峰等報(bào)道的一致[14]。

一個(gè)實(shí)驗(yàn)室一般只能有一臺(tái)比較先進(jìn)的檢測(cè)系統(tǒng)參加室間質(zhì)評(píng)，如果不進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)室儀器之間的自身比對(duì)，就會(huì)使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差，從而給臨床造成了誤解[15]。保證不同檢測(cè)系統(tǒng)產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理中的重要環(huán)節(jié)，生化檢測(cè)對(duì)于一個(gè)實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)是至關(guān)重要的，定期利用新鮮血清對(duì)不同生化檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行比對(duì)分析，既可以反映結(jié)果的一致性，還可以了解誤差的來(lái)源，及時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)和保養(yǎng)，從而確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。