基于EP文件的Centaur XP化學(xué)發(fā)光免疫系統(tǒng)性能驗證

林佩娜，劉肖瑛，潘俊均

(東莞康華醫(yī)院檢驗科，廣東 東莞 523080)

醫(yī)學(xué)實驗室認可工作近年來備受檢驗者的關(guān)注，必要且良好的儀器性能驗證是實驗室滿足臨床需求的基本保證。為了保證檢驗結(jié)果的可靠性、準確性，實驗室必須對檢測系統(tǒng)的主要性能進行驗證，證實其能夠滿足預(yù)期的質(zhì)量要求后才能用于常規(guī)檢測。精密度、正確度、分析測量范圍、參考區(qū)間是檢測系統(tǒng)的主要性能指標，我們參考有關(guān)文獻，結(jié)合具體工作實際，以TSH-3，CA19-9為例探討化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)簡便可行的性能驗證方法。

1 材料與方法

1．1 材料來源 選擇健康體檢中心的體檢者和本院患者的新鮮血清標本；2017年第一次、第二次全國內(nèi)分泌室間質(zhì)評質(zhì)控品，批號分別為201711-201715和201721-201725；2017年第一次、第二次全國腫瘤標志物室間質(zhì)評質(zhì)控品，批號分別為201711-201715和 201721-201725；高、低值 TSH-3，CA19-9標本各1份。

1．2 儀器和試劑 儀器為德國西門子公司ADVIA Centaur XP全自動化學(xué)免疫分析系統(tǒng)；檢測試劑、校準品為西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品，質(zhì)控品分別為BIO-RAD Lyphochek Immunoassay plus control(批號 40342，40343) 和 BIO-RAD Tumor Marker plus control(批號 54631，54632)；所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1．3 精密度驗證實驗 根據(jù)CLIS EP15-A2文件，收取TSH-3，CA19-9高、低2個濃度的血清標本各1份，每份分別分裝于20個帶蓋的一次性離心管內(nèi)-20℃冰箱凍存；選用2個濃度水平，每個水平每天檢測3次，每次間隔2h，共5d，分別計算其批內(nèi)及批間不精密度，批內(nèi)精密度≤1/4允許總誤差(TEa)，批間精密度≤1/3允許總誤差(TEa)，為盡量避免影響檢測結(jié)果，試驗采用同一批號試劑、校準品，室內(nèi)質(zhì)控在控后進行驗證實驗[1]。

1．4 正確度驗證實驗 根據(jù)CLIS EP15-A2文件，在精密度評估滿足要求后，2017年第一次、第二次全國內(nèi)分泌室間質(zhì)評質(zhì)控品和2017年第一次、第二次全國腫瘤標志物室間質(zhì)評質(zhì)控品進行測定，計算檢測值和靶值的相對偏倚，相對偏倚≤1/2TEa為可接受。在此期間室內(nèi)質(zhì)控必須在控[2]。

1．5 分析測量范圍(AMR)驗證實驗 根據(jù)EP6-A2的文件 選擇新鮮高值(H)和低值(L)患者血清標本，所收集的高、低值濃度盡可能覆蓋可測量范圍，然后 按 1L，0．8L+0．2H，0．6L+0．4H，0．4L+0．6H，0．2L+0．8H，1H的關(guān)系配置系列濃度血清6份。將各個評價樣品的理論濃度記為X，其對應(yīng)的實際測定濃度記為Y，利用統(tǒng)計軟件計算Y與X的相關(guān)系數(shù)r，若r＞0．975則認為理論濃度與實測濃度有明顯的相關(guān)性[3]，可做下一步的回歸分析，利用直線回歸分析計算出Y與X的直線回歸方程，以R2≥0．95作為是否成線性判別點。

1．6 參考區(qū)間驗證 選擇20例體檢合格的健康人標本(經(jīng)檢查無心、肺、腎等重要臟器疾病，男10例，女10例，年齡在16-68歲)，在檢測系統(tǒng)上進行檢測，計算比率(r=檢測值在參考區(qū)間的標本數(shù)/總標本數(shù))，r≥95%，驗證結(jié)果可接受，說明檢驗科可引用該參考區(qū)間；r≤95%，分析查找原因后重新進行參考區(qū)間的驗證實驗[4]。

1．7 統(tǒng)計學(xué)方法 精密度，正確度的統(tǒng)計方法參照CLSI EP15-A2[5]，分析測量范圍的統(tǒng)計參照CLSI EP6-A2[6]，參考區(qū)間的統(tǒng)計方法參照CLSI C28-A3[7]；數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19．0進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果

2．1 精密度驗證結(jié)果 收取TSH-3，CA19-9高、低2個濃度的血清標本各1份，每個水平每天檢測3次，每次間隔 2h，共 5d，見表 1。

2．2 正確度驗證結(jié)果 TSH-3、CA19-9兩個項目10個濃度的衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價材料進行檢測，結(jié)果顯示偏倚均小于1/2TEa，各項目測定結(jié)果均符合要求，驗證通過。見表2。

2．3 分析測量范圍系列標本測量結(jié)果 TSH-3的廠家提供的線性范圍為 0．004～150mIU/ml，CA19-9的廠家提供的線性范圍為1．2～700U/ml，根據(jù)實測值與計算的預(yù)測值獲得回歸方程TSH-3為Y=1．0183X-1．2454 (R2=0．9992)，CA19-9 為 Y=0．9963X-0．7846(R2=0．9996)，相關(guān)系數(shù) r＞0．975 則認為理論濃度與實測濃度有明顯的相關(guān)性。因此，TSH-3 在 0．008～130．198mIU/ml，CA19-9 在 1．585～564．765U/ml試驗所涉及的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系；與結(jié)果見表3。

2．4 20例參考個體的結(jié)果 選擇20例體檢合格的健康體檢者標本，TSH-3的檢測結(jié)果在 0．15～1．63mIU/ml之間，95%的結(jié)果在西門子說明書提供的 0．55～4．78mIu/ml范圍內(nèi)；CA19-9 的檢測結(jié)果在2．42～36．27U/ml之間，100%的結(jié)果在西門子說明書提供的0～37U/ml范圍內(nèi)，說明可以直接引用廠家提供的參考區(qū)間。

3 討論

西門子ADVIA Centaur XP系統(tǒng)是經(jīng)美國食品和藥物管理局(FDA)認可的化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)，生產(chǎn)廠家對其分析性能已做了詳細全面的評估，并已被臨床實驗室廣泛應(yīng)用；但是，由于不同實驗室不同儀器之間存在差異，常導(dǎo)致臨床結(jié)果不一致而給臨床帶來疑惑和困擾[8]，且《臨床實驗室改進法規(guī)修正案》和ISO15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則》[9]對此明確規(guī)定，對開展新的檢測項目，更換檢測系統(tǒng)或改變試劑盒廠商時，實驗室需對其相關(guān)方法學(xué)分析性能予以驗證，提供并保留相關(guān)的方法學(xué)驗證數(shù)據(jù)以確保結(jié)果的準確可靠。因此，必要且良好的儀器性能驗證是實驗室檢測結(jié)果與臨床互認的基本保證[10]。

精密度性能是檢測系統(tǒng)的基本分析性能之一，也是其它方法學(xué)評價的基礎(chǔ)，國際上將精密度性能列為檢驗分析性能的第1位，如果精密度差，其它性能評價試驗將無法進行[11]。本文采用了CLSI EP15-A2提供的簡化方案，以TSH-3、CA19-9為測定指標，對高、低2個濃度的血清標本進行分析，實驗結(jié)果顯示，TSH-3批內(nèi)不精密度在1．97%～2．31%， 批間不精 密度在 2．69%～3．75%，CA19-9 批內(nèi)不精密度在 3．59%～5．74%，批間不精密度在6．82%～7．20%，二者批內(nèi)精密度和批間精密度分別小于 1/4CLIA，88允許范圍和 1/3CLIA，88允許范圍，表明精密度性能符合要求。

表1 TSH-3和CA19-9精密度實驗結(jié)果

表2 室間質(zhì)量評價材料驗證結(jié)果

表3 TSH分析測量范圍驗證表

正確度反映的是測量值與真實值之間的一致程度，臨床醫(yī)師對其非常關(guān)注，是保證醫(yī)療工作的實際需要，在方法學(xué)性能評價實驗中的重要性僅次于精密度評價實驗[12]；目前，關(guān)于正確度性能評價有多種方案，主要有CLSI EP9-A2和CLSI EP15-A2，但是EP9-A2由于實驗過程較繁瑣，統(tǒng)計過程較復(fù)雜，在許多情況下實用性不強[13]，所以本文使用CLSI EP15-A2“精密度和正確度性能的用戶驗證”指南[14]進行正確度驗證，結(jié)果顯示TSH-3 的相對偏倚為-4．72%～3．88%，CA19-9 的相對偏倚為-8．96%～5．16%， 二者均在 1/2TEa(12．5%)之內(nèi)，表明正確度性能符合要求。

分析測量范圍及參考區(qū)間驗證也是反映分析方法性能的重要指標，本研究通過一系列濃度血清驗證TSH-3，CA19-9的線性范圍，從表2中顯示，系列血清的測量值與預(yù)測值線性良好，與廠家聲明基本一致；生物參考區(qū)間是臨床判斷健康與否的標準，CLSI C28-A3文件提供3種方法評估參考區(qū)間，本研究采用20個參考值數(shù)據(jù)驗證是其中最簡便可行的方法[15]，結(jié)果表明，廠家聲明的參考區(qū)間可以轉(zhuǎn)移使用。

綜上所述，本文通過對ADVIA Centaur XP化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)TSH-3、CA19-9的精密度、正確度等性能的檢測，驗證了其與國際公認的質(zhì)量要求或廠家聲明的要求基本一致。所采用的方法操作簡便、實用，且成本較低，對規(guī)范化學(xué)發(fā)光免疫檢驗，提供檢驗質(zhì)量控制具有重要意義。