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    Beclin1、EGFR、FOXP3在宮頸癌組織中表達水平及其臨床意義

    2019-07-31 08:07:06張靜黃普艷杜立娟
    實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2019年4期

    張靜,黃普艷,杜立娟

    (濟源市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,河南 濟源459000)

    宮頸癌的發(fā)生能夠?qū)е禄颊吲R床轉(zhuǎn)歸的惡化,患者的五年生存率和中位生存時間等均明顯的下降[1]。流行病學(xué)研究證實,宮頸癌的平均年發(fā)病率可達273~483/10萬人左右[2]。

    在揭示宮頸癌的病情進展機制的過程中,可以發(fā)現(xiàn)腫瘤調(diào)控相關(guān)蛋白的改變,能夠顯著影響到癌細胞的生物學(xué)特征,導(dǎo)致癌細胞浸潤和增殖調(diào)控的異常。自噬基因Beclin1的表達能夠通過維持上皮細胞的自噬作用,進而抑制癌細胞的過度增殖,促進癌細胞的凋亡[3];表皮生長因子(epidermal growth factor receptor,EGFR) 的表達上升,能夠促進癌細胞的侵襲能力的增強,促進了腫瘤新生血管的形成[4];叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子3(Foxp3)的表達,能夠通過誘導(dǎo)體內(nèi)T淋巴細胞功能的紊亂,導(dǎo)致癌細胞免疫監(jiān)察作用的下降,誘導(dǎo)癌細胞的免疫逃逸[5]。部分研究者探討了Beclin1在卵巢癌患者中的表達情況,認為Beclin1的表達下降是促進卵巢癌患者臨床分期進展和癌細胞分化障礙的重要因素[6],但關(guān)于 Beclin1、EGFR、FOXP3 在宮頸癌患者中的探討不足。為了揭示Beclin1、EGFR、FOXP3的表達與宮頸癌的關(guān)系,從而為臨床上宮頸癌患者的診療提高理論基礎(chǔ),本次研究選取2017年2月-2018年2月在我院接受治療的宮頸癌患者為研究對象,探討了不同腫瘤調(diào)控蛋白的表達及其與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 患者一般資料 選取2017年2月-2018年2月在我院接受治療的宮頸癌患者為研究對象。納入標準:⑴年齡≥18周歲;⑵經(jīng)病理診斷確診為宮頸癌患者;⑶無其他系統(tǒng)嚴重疾病者。排除標準:⑴合并其他部位原發(fā)腫瘤者;⑵不愿參與本項研究者。根據(jù)納入排除標準共納入研究對象100例,年齡 39~68 歲, 平均 52.3 7±4.12 歲, 其中Ⅰ期 42例,Ⅱ期35例,Ⅲ期23例;對照組納入排除標準:年齡≥18歲,無生殖系統(tǒng)腫瘤疾病者,共納入100例,年齡 40~69 歲,平均 52.3 5±3.49 歲。 兩組患者在年齡等一般資料方面無明顯差別,具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^,且所有患者均知情同意。

    1.2 檢測方法 所有組織標本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片,厚度約為4μm,采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin-biotin complex,SABC法)染色,二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene,DAB)顯色。Beclin1、EGFR、FOXP3 蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照,高倍顯微鏡下觀察Beclin1、EGFR、FOXP3蛋白的表達情況,具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

    1.3 評價指標 觀察兩組患者組織中Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平,比較不同特征宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平的差異,分析影響宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達的因素。Beclin1主要在胞漿中表達,陽性表達呈棕黃色染色;EGFR在胞漿中表達,陽性表達呈棕黃色染色;FOXP3在細胞核中表達,陽性表達呈黑色顆粒。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后,采用SPSS 11.5軟件進行分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和(x±s)表示。兩組患者、不同特征宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平的比較采用卡方檢驗進行分析,采用Logistic回歸分析法分析影響宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達的因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平的比較 宮頸癌患者的EGFR和FOXP3陽性表達率高于對照組,Beclin1陽性表達率低于對照組。見表1。

    2.2 不同特征宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平的比較 臨床分期為Ⅲ期、組織學(xué)分級為中、低分化、有浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者Beclin1表達率較低,EGFR、FOXP3陽性表達率較高。見表2。

    表1 兩組患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平的比較

    2.3 影響宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達的因素分析 將宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3陽性表達作為因變量,以單因素有意義的因素作為自變量,進行多因素Logistic回歸分析。統(tǒng)計分析可得,組織學(xué)分級、浸潤情況是影響宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3陽性表達的因素,其OR值分別為 5.732、5.513,5.132、4.368,4.058、5.112。 見表3。

    3 討論

    宮頸柱狀上皮細胞的持續(xù)性異常分裂,能夠促進宮頸惡性腫瘤的發(fā)生,特別是在合并有HPV16、HPV18感染的患者中,宮頸癌的發(fā)生風險更高[7]。臨床上的長期觀察認為,宮頸癌的五年生存率不足35%,包括手術(shù)在內(nèi)的相關(guān)綜合性治療措施治療后的無瘤生存時間不足28個月[8,9]。免疫靶向治療能夠在婦科惡性腫瘤的診療過程中發(fā)揮重要的作用,其能夠抑制腫瘤的復(fù)發(fā),提高患者的整體生存預(yù)后水平。而本次研究對于宮頸癌患者病灶組織中的相關(guān)因子的表達分析,能夠為臨床上宮頸癌的免疫靶向治療提供理論基礎(chǔ)。

    Beclin1蛋白主要存在于平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞或者間質(zhì)細胞中,Beclin1蛋白的表達濃度的上升,能夠促進自噬作用促進癌細胞的凋亡。Beclin1還能夠通過穩(wěn)定癌細胞的周期,抑制癌細胞快速跨越G0期,降低了癌細胞的持續(xù)性自我增殖的風險[10];EGFR能夠通過促進癌細胞的生物學(xué)特征的改變,進而提高癌細胞的浸潤和自我增殖的能力?;A(chǔ)領(lǐng)域方面的研究認為,EGFR蛋白的表達濃度上升,能夠影響到宮頸腺體細胞突破基底膜的風險,導(dǎo)致癌細胞轉(zhuǎn)移能力的提升[11];FOXP3是影響到樹突狀T淋巴細胞功能的指標,F(xiàn)OXP3的上升能夠抑制CD4+T淋巴細胞功能,抑制T細胞的抗原提呈作用,進而降低了自然殺傷性T淋巴細胞對于腫瘤細胞的殺傷作用[12]。部分研究者探討了EGFR在宮頸癌病灶組織中的表達情況,認為EGFR的表達上升能夠顯著促進宮頸癌患者腫瘤病灶的擴大,但對于Beclin1及FOXP3的分析研究不足。

    表2 不同特征宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3表達水平的比較

    表3 -1影響宮頸癌患者Beclin1表達的因素分析

    表3 -2影響宮頸癌患者EGFR表達的因素分析

    表3 -3影響宮頸癌患者FOXP3表達的因素分析

    在本次免疫組化研究過程中,可以發(fā)現(xiàn)宮頸癌病灶組織中的Beclin1表達陽性率明顯的下降,而EGFR、FOXP3的表達陽性率明顯的上升,高于良性病變的宮頸組織,差異較為明顯,提示了Beclin1、EGFR、FOXP3等的異常表達均可能參與到了宮頸癌的病情進展過程。通過匯集不同的相關(guān)文獻,筆者認為這主要考慮與 Beclin1、EGFR、FOXP3的下列幾個方面的作用有關(guān)[13,14]:⑴Beclin1的表達下降導(dǎo)致癌細胞的自噬作用明顯的不足,癌細胞的增殖缺乏有效的調(diào)控和抑制;⑵EGFR的上升能夠促進腫瘤新生血管的形成,提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平;⑶FOXP3的上升能夠抑制體內(nèi)的T淋巴細胞免疫,抑制體內(nèi)自然殺傷性T淋巴細胞的激活。鄭鳳霞等[15]研究者在探討了不同臨床分期的宮頸癌患者資料后發(fā)現(xiàn),宮頸癌病灶組織中的EGFR可平均上升35%以上,特別是在合并有宮旁組織浸潤或者高腫瘤負荷表現(xiàn)的患者中,EGFR的表達陽性率可進一步的上升。在探討B(tài)eclin1、EGFR、FOXP3的表達與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn),在臨床分期較晚、癌細胞分化較差或者合并有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的患者中,Beclin1的表達可進一步的下降,而EGFR、FOXP3的陽性表達水平可進一步的上升,提示了不同指標與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。這主要由于Beclin1的下降,或者EGFR、FOXP3的上升,能夠?qū)е聦m頸柱狀上皮細胞對于盆腔內(nèi)組織浸潤能力的增強,并提高了宮頸癌細胞對于淋巴結(jié)內(nèi)皮細胞的粘附能力等有關(guān)。但部分研究者并不認為EGFR的表達與宮頸癌患者的組織學(xué)分級程度有關(guān),存在不同的臨床結(jié)論,考慮可能與EGFR蛋白的檢測靈敏度或者宮頸癌患者的臨床病情差別較大有關(guān)。最后本次研究還發(fā)現(xiàn),組織學(xué)分級、浸潤情況是影響宮頸癌患者Beclin1、EGFR、FOXP3陽性表達的因素,進一步提示了Beclin1、EGFR、FOXP3與宮頸癌患者組織學(xué)分級、癌細胞浸潤的關(guān)系。

    綜上所述,在宮頸癌患者中,Beclin1的表達明顯的下降,而EGFR、FOXP3的表達明顯的上升,Beclin1、EGFR、FOXP3的表達與宮頸癌患者組織學(xué)分級及癌細胞浸潤程度等密切相關(guān)。后續(xù)臨床研究可以繼續(xù)探討B(tài)eclin1、EGFR、FOXP3蛋白的表達與宮頸癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系。

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