中性粒細胞CD64聯(lián)合血清MCP-1、IL-8、IL-10水平檢測對新生兒敗血癥診斷效能的影響評價

王洪建，劉小慧，劉燕飛，李智全，武欣

(濮陽市人民醫(yī)院血液病研究所，河南 濮陽 457000)

敗血癥是由條件致病菌或致病菌侵入血液，在血循環(huán)中產(chǎn)生毒素并不斷繁殖生長而引發(fā)的急性全身感染，為導致新生兒死亡的第三大病因[1，2]。及早診斷并給予針對性治療，可降低敗血癥新生兒病死率；但新生兒敗血癥并無典型性臨床表現(xiàn)，診斷難度大，當其常規(guī)實驗室檢測結果及血培養(yǎng)結果為陰性時需結合多項臨床指標進行評估，以提高診斷準確率[3]。中性粒細胞CD64為反映敗血癥患兒體內炎癥狀態(tài)及感染狀態(tài)的敏感指標，有學者指出IL-8等炎性細胞因子水平與機體病原菌感染關系密切，為臨床評估膿毒癥敏感指標；此外趨化因子MCP-1可參與調控白細胞的遷移，參與炎癥反應，進而參與機體感染過程，與感染性疾病的發(fā)生關系緊密[4-6]?；诖吮狙芯繉ξ以?1例敗血癥新生兒及30例非敗血癥感染新生兒、30例健康新生兒進行中性粒細胞CD64及血清IL-8、IL-10、MCP-1水平檢測，探討各指標聯(lián)合檢測對新生兒敗血癥診斷效能的影響。結果如下。

1 對象與方法

1．1 研究對象 選取我院2016年5月-2018年4月收治的31例敗血癥新生兒為觀察組，女11例，男 20 例；胎齡 38～41 周，平均（39．40±1．20）周；出生體質量 2500～4000g，平均（3290．50±431．50）g；5 min Apgar評分 8～10 分，平均（8．90±0．50）分。 另取同期收治的30例非敗血癥感染患兒作為對照組，女 10 例，男 20 例；胎齡 38～41 周，平均（39．50±1．30）周；出生體質量 2510～4000g，平均（3294．60±430．30）g；5min Apgar評分 8～10 分， 平均 （8．80±0．60）分。并取30例健康新生兒作為健康對照組，女 11 例，男 19 例；胎齡 37～41 周，平均（39．70±1．15）周；出生體質量 2511～4010g，平均（3292．40±429．40）g；5min Apgar評分 8～10 分， 平均 （8．70±0．60）分。對比各組基線資料，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查批準。

1．2 敗血癥診斷標準 依據(jù)《新生兒敗血癥診療方案》制定敗血癥診斷標準：⑴無菌體腔培養(yǎng)出致病菌或血培養(yǎng)培養(yǎng)出致病菌；⑵血培養(yǎng)標本培養(yǎng)出條件致病菌，且與另份血或導管端或無菌體腔內培養(yǎng)出同種細菌。符合以上任一條且具備以下任一表現(xiàn)：⑴血標本病原菌抗原或DNA檢測陽性；⑵非特異性檢測異常2條或2條以上[7]。

1．3 納入標準 ⑴觀察組符合以上敗血癥診斷標準；⑵采血時間均為出生后28h內；⑶新生兒家屬知曉本研究并自愿簽署知情同意書。

1．4 排除標準 ⑴觀察組出現(xiàn)敗血癥嚴重并發(fā)癥者；⑵對照組胎膜早破、羊水污染或母體孕期罹患感染性疾患；⑶染色體異常新生兒；⑷先天畸形或伴有遺傳代謝病或出現(xiàn)窒息患兒；⑸出現(xiàn)HIV感染或其他免疫缺陷患兒；⑹入院前采用抗生素治療者；⑺心、肝、腎等重要臟器功能不全者。

1．5 方法 未行任何治療前取 6ml靜脈血，以1500r/min離心10～15min，分離上清液保存于-80℃冰箱中待檢，采用日本日立全自動生化分析儀（7180型），以酶聯(lián)免疫吸附法測定血清MCP-1、IL-8、IL-10水平，血清MCP-1測定試劑盒購自上海盈公酶聯(lián)檢測試劑有限公司，血清IL-8及IL-10試劑盒購自上海心語生物科技有限公司，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。采用NAVIOS三激光十色流式細胞儀 （美國Beckman Coulter公司）及配套專用試劑盒測定新生兒全血CD64：將異硫氰酸熒光素標記的CD64鼠抗人單克隆抗體CD64分別加入每支流式專用試管中（10μl/支），再加入60μl全血，混勻避光15min，上機檢測；檢測時依據(jù)側向角、前向角散射光信號圖顯示的形態(tài)學特征確定中性粒細胞群，測定CD64平均熒光強度（MFI）；每次上機檢測均采用600mV電壓。

1．6 統(tǒng)計學分析 通過 SPSS 19．0對數(shù)據(jù)進行分析，以（x±s）表示計量資料，t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗，n（%）表示計數(shù)資料，χ2檢驗，P＜0．05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 中性粒細胞 CD64 及血清 MCP-1、IL-8、IL-10水平 觀察組中性粒細胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平高于對照組及健康對照組，且對照組高于健康對照組（P＜0．05）。 見表 1。

2．2 診斷效能 中性粒細胞CD64聯(lián)合血清MCP-1、IL-8、IL-10水平對新生兒敗血癥診斷敏感度高于各指標單一診斷，漏診率低于各指標單一診斷（P＜0．05）。 見表 2、表 3。

3 討論

血培養(yǎng)、桿狀核粒細胞/中性粒細胞、C反應蛋白、白細胞計數(shù)及降鈣素原等為目前臨床診斷新生兒敗血癥的常用實驗室指標。其中血培養(yǎng)仍為目前臨床診斷新生兒感染性疾患的 “金標準”，具有較高檢出率，但其培養(yǎng)時間長，早期診斷敏感度低，導致部分患兒因無法及時確診而延誤治療時機；降鈣素原為診斷新生兒敗血癥的特異性指標，但患兒出生3d內存在生理高峰，需建立日齡依賴性參考值，存在一定局限性；而C反應蛋白雖與機體感染密切相關，但其早期敏感度低，需連續(xù)多次檢測方可獲取最佳診斷數(shù)據(jù)，導致其臨床應用受限[8，9]。因此臨床亟待尋找可靠的標志物以準確評估新生兒是否患有敗血癥。

表1 對比各組中性粒細胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平

表1 對比各組中性粒細胞CD64及血清MCP-1、IL-8、IL-10水平

注：與健康對照組相比，aP＜0．05；與對照組相比，bP＜0．05。

CD64（MFI） IL-8（pg/ml） IL-10（ng/L） MCP-1（ng/L）66．70±23．80ab 40．30±13．77a 25．10±4．90 51．411 0．000 187．70±26．70ab 85．40±25．42a 36．10±21．60 300．025 0．000 72．20±22．80ab 19．10±4．10a 8．65±2．01 193．302 0．000 62．50±21．81ab 48．20±20．80a 38．40±20．60 10．094 0．000組別 例數(shù)觀察組對照組健康對照組FP 31 30 30

表2 診斷四格表[n（%）]

表3 對比不同指標診斷效能[n（%）]

有學者指出中性粒細胞CD64為臨床診斷小腸結腸炎及晚發(fā)性膿毒癥重要的生物標志物，可在感染發(fā)生4～6h后呈高表達[10]。此外國外學者Lam HS等[11]指出CD64對敗血癥新生兒的診斷敏感度高達89%，特異度更是高至98%。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組CD64高于對照組及健康對照組，且對照組高于健康對照組（P＜0．05），可見中性粒細胞 CD64可作為臨床診斷評估新生兒是否發(fā)生敗血癥的有效指標；但本研究發(fā)現(xiàn)CD64對新生兒敗血癥敏感度為70．97%，這可能與新生兒敗血癥的發(fā)生不僅是感染導致的免疫防御反應，且是和能量、代謝、免疫相結合的病、生理過程，而發(fā)病早期細胞因子風暴消耗能量大，致使后期能量供應不足有關；因此僅測定CD64存在一定的誤診、漏診率。

MCP-1為調節(jié)單核巨噬細胞浸潤、遷移的重要趨化因子，可參與多種疾病的細胞凋亡，學者嚴爭等[12]研究發(fā)現(xiàn)MCP-1在敗血癥新生兒中呈高表達狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組血清MCP-1水平高于對照組及健康對照組，對照組高于健康對照組（P＜0．05），說明MCP-1可作為臨床診斷新生兒敗血癥的指標之一；但多種疾病均可引起血清MCP-1水平升高，且本研究發(fā)現(xiàn)其應用于新生兒敗血癥診斷中，診斷敏感度僅為67．74%，因此臨床診斷時需結合其他指標以提高診斷準確率。IL-8是一種炎性細胞因子，可通過結合受體CXCR2及受體CXCR1對中性粒細胞產(chǎn)生趨化作用，進而調控炎癥反應，當機體被植物血凝素、脂多糖等刺激時，血清中其水平會迅速升高，與感染性疾病的發(fā)生存在緊密聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組血清IL-8水平高于對照組及健康對照組，且對照組高于健康對照組（P＜0．05），說明 IL-8 可作為臨床診斷新生兒敗血癥的輔助血清學指標。此外抗炎因子IL-10在血循環(huán)中的表達與病原菌感染存在緊密聯(lián)系，當機體出現(xiàn)感染時，會大量分泌IL-10，致使其血清水平升高，本研究發(fā)現(xiàn)其診斷新生兒敗血癥敏感度雖只有 64．52%，但特異度高達 91．67%，因此可作為區(qū)分新生兒是否發(fā)生敗血癥的特異性指標。與中性粒細胞CD64及血清MCP-1、IL-8聯(lián)合檢測，可提高診斷效能，減少漏診率。本研究發(fā)現(xiàn)中性粒細胞 CD64與血清 MCP-1、IL-8、IL-10聯(lián)合診斷新生兒敗血癥，診斷靈敏度為96．77%，高于各指標單一診斷，漏診率低于各指標單一檢測，說明中性粒細胞 CD64聯(lián)合血清 MCP-1、IL-8、IL-10水平檢測應用于新生兒敗血癥診斷中，診斷效能高，可作為臨床診治疾病的依據(jù)。

綜上，中性粒細胞CD64聯(lián)合血清IL-10、IL-8、MCP-1水平檢測可提高新生兒敗血癥診斷靈敏度，降低漏診率，診斷效能高，可為臨床診治疾病提供參考。